T∕XAASS 005-2022 小麦及发酵制品中呕吐毒素安全控制规范.pdf

TICS 67.060CCS B 22小小麦麦及及发发酵酵制制品品中中呕呕吐吐毒毒素素安安全全控控制制规规范范Safety control of deoxynivalenol in wheat and fermented products2022-12-12 发布2022-12-12 实施新疆维吾尔自治区农学会发布XAASS新 疆 维 吾 尔 自 治 区 农 学 会 团 体新 疆 维 吾 尔 自 治 区 农 学 会 团 体 标 准标 准T/XAASS 005-2022T/XAASS 0052022前言本文件按照GB/T 1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由新疆农业科学院提出。本文件由新疆维吾尔自治区农学会归口。本文件主要起草单位：新疆农业科学院、中国科学院上海营养与健康研究所。本文件主要起草人：王成、武爱波、李凯琳、范盈盈、刘峰娟、郑伟华、华震宇、安静、郭万慧、姜娜。T/XAASS 00520222小麦及发酵制品中呕吐毒素安全控制规范1范围本文件规定了在种植、采收、贮存、运输、加工等环节及基于降解酶制剂的小麦籽粒及小麦糖浆污染处置，从而控制饲料原料等粮食作物中呕吐毒素的基本要求和管理准则。本文件适用于小麦中的呕吐毒素污染控制及基于降解酶制剂的小麦籽粒及小麦糖浆污染处置。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本文件。GB 1351 小麦GB 1355 小麦粉GB 2715 食品安全国家标准 粮食GB 2761 食品安全国家标准 食品中真菌毒素限量GB 5009.111 食品安全国家标准 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定GB 13122 食品安全国家标准 谷物加工卫生规范GB 14881 食品安全国家标准 食品生产通用卫生规范GB/T 15796 小麦赤霉病测报技术规范GB 22508 食品安全国家标准 原粮储运卫生规范NY/T 3856 小麦中镰刀菌毒素管控技术规程3术语和定义3.1呕吐毒素又称脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON），主要由禾谷镰刀菌（Fusariumgraminearum）产生的一类倍半萜烯次级代谢产物，属于 B 型单端孢霉烯族毒素。禾谷镰刀菌是小麦等农作物中最常见的病原真菌，在小麦等农作物中生长、繁殖，导致赤霉病，进而产生 DON，并在收获后的各个环节中污染粮食及其制品，严重影响着农产品品质和食品的安全性。3.2轮种轮种是指前后两季种植不同的作物或相邻两年内种植不同的复种方式。3.3粒藏法即小麦入仓贮藏，此法仓容利用率高。如仓库密闭性能好，种子处在低温干燥的条件下可以较长期贮藏而不影响生活力。T/XAASS 005202233.4降解酶制剂降解酶制剂是经生物加工后制成的具有催化活性的生物化学品，是可降解特定化学物质的制剂产品，具有高效性、专一性，在适宜条件（pH 值和温度）下具有活性。4种植4.1种植前对田间残留的秸秆、杂草、陈谷穗进行清理，减少真菌产生的基质，并采取轮种的种植方式，避免同种真菌的常年感染。4.2种植时保持合适的株间距，给予作物良好的通风和干燥条件，阻断禾谷镰刀菌等真菌侵染植株所需的温度、湿度条件。4.3特殊环境下宜选用抗真菌作物品种，对于不同的环境状况应选用不同的作物品种。4.4进行深耕晾晒土壤，从而改善土壤物理状况，并通过物理杀菌方式减少病原微生物数量。4.5除草过程中应避免对植株造成机械损伤，并尽量避免在阴雨天进行，同时及时清除发生病变的植株。4.6在扬花期和成熟期，对小麦，不宜进行灌溉，以避免过量灌溉可能造成的镰刀菌的侵染和扩散。灌溉时要均匀，确保田间的所有作物均能获得充足的水分。5 采收5.1采收标准宜在谷物生长完全成熟后水分含量低的情况下进行，同时保证同一批收获的谷物中不混杂尚未成熟、水活度高的谷物，预防水分含量的差异对后期贮存的不利影响。5.2采收设备要求采收前应检查采收设备，清洗设备上的残留物并干燥，防止真菌污染物的污染，同时确保用于收获和贮存的设备、设施均能正常工作，避免造成谷物损伤。5.3采收过程中要求应避免谷物与土壤接触，收获前应保持土壤干燥。要选择好时机，避免在阴雨天收获。根据监测呕吐毒素污染状况对已被镰刀菌等真菌污染的小麦进行单独采收。5.4收获完后要求宜采取措施将田间被侵染的谷穗、谷壳秸秆和残体收集起来并尽可能减少散布，以免真菌孢子侵染后种植的谷物。6贮存前处理6.1清杂新收获的谷物应做好清理工作，去除破损、虫蚀生芽、生霉、病斑及其他损伤的颗粒和杂质。6.2堆积避免在干燥或脱粒前将收获后的新鲜高水分谷物堆积存放。为降低真菌生长的危险性，除严寒地区外，在高湿度天气自然晾晒一些谷物，可能导致真菌感染，可以使用强制通风来降低谷物水分。T/XAASS 005202246.3记录记录不同位置多个采样点采集样本，进行温度、水分、湿度测量，监测谷物状态并根据水分含量综合确定后期收储方式。6.4干燥6.4.1新采收的谷物应尽快干燥，降低镰刀菌等真菌的生长风险。可采用机械干燥、就仓干燥、晾晒等干燥方式，干燥能力应与贮存量匹配。6.4.2谷物水分含量应低于贮存中镰刀菌等真菌生长要求的水分含量，以避免新鲜谷物上的大量真菌，特别是镰刀菌的进一步生长。6.4.3及时测定谷物的水分含量，并将谷物干燥到安全水分以内（小于 12.5%）。在含水量降至 12.5%以下之前，如遇阴雨天气，应在室内平摊晾干、风干，晴天后再经晒场摊晒。6.4.4干燥时水分在 17%以上干燥时粮温不超过 46，水分在 17%以下干燥时粮温不超过 54。6.4.5用于水分测定的谷物样品应具有代表性，记录不同位置多个采样点采集的样本。为避免同一批谷物干燥前后混存从而导致再次引起水分含量变化，应将干燥后的谷物单独贮存。6.4.6干燥过程中尽量减少对谷物的损伤，避免真菌的感染。7贮存7.1贮存过程中，尽可能降低贮存设施受到啮齿类动物侵扰。7.2贮存过程中，可采取使用适合的已被注册登记的杀虫剂和杀真菌剂，应注意使用的化学药剂不应导致危害和影响谷物的最终使用，并要严格控制使用剂量。如有机酸中的丙酸有利于粮食的安全贮存，能有效地杀死各种真菌包括镰刀菌、防止动物用饲料谷物上产生真菌毒素。在长期贮存时，这些有机酸盐通常更为有效。7.3使用适当的采样和测试方法监测所有准备贮存和外运的谷物中呕吐毒素的水平。发现谷物变质或出现真菌生长时，应去除受污染的谷物，将保留下的谷物通风降温。不要用被感染的谷物作食品或饲料。7.4需要时，使用通风措施以维持贮存区域内合适的温度和保持温度均匀。贮存期间，应定期检查谷物的水分含量和粮堆温度。温度异常上升时，应查找原因，避免可能存在的微生物大量生长和（或）出现虫害，并采取合理的控制措施。7.5对于包装谷物，确保包装袋的清洁、干燥，且宜堆放在有防水层的地面上，并设通风垛。7.6应勤检查、严管理及时发现和处理问题，建议每三天检查一次粮温一般为粮温不超过 36 为正常。7.7采用三热密闭法时缸内的麦温达到 40 以上，保持 810 天，杀死未死的卵、蛹、幼虫及成虫，从而达到聚热杀虫的效果。7.8采用缺氧保管法时缸密闭 510 天使氧气浓度降到 2%5%，二氧化碳浓度增加到40%50%。保持一定时间使害虫窒息死亡。但应注意，小麦水分应控制在标准之内（小于12.5%），平均粮温 30 以上。7.9应隔离贮存呕吐毒素含量水平超过 GB 2761 规定限值的谷物，不得用于食品加工。在食品生产、流通过程中的贮存环节应符合 GB 14881 的相关要求。8运输8.1运输容器使用前应进行清洁和消毒，没有可见真菌、昆虫和其他任何污染物质。并保持用于运输的容器、车辆及船只的清洁干燥，防止污染所运输的谷物。需要时，使用登记注册的熏蒸剂或杀真菌剂消毒运输工具和容器。T/XAASS 005202258.2应采取适当措施对运输的食品原料进行防护，如使用密封容器、防水帆布等。避免谷物受到菌斑、昆虫、尘土等的污染。8.3避免谷物在装运过程中受潮，宜避免运输过程中温度波动和避免采用可能导致在谷物上形成结露的措施，以免导致局部湿气积聚，进而造成真菌生长和毒素产生。8.4运输时可用防虫和防啮齿类动物的容器或使用一些化学药剂杀虫和灭鼠，以避免害虫、鸟和鼠类的危害。使用的化学药剂应获得批准许可，并允许其在谷物的最终产品上使用。卸货时，应当清空运输容器内的货物并及时进行清理。8.5在食品生产、流通过程中的运输环节应符合 GB 14881 的相关要求。9加工9.1接收农户贮存的小麦时，应了解小麦的来源和贮存情况，并检查运输车辆的清洁程度。卸货过程中应进行感官检验，发现小麦较湿时，应单独存放，并尽快进行干燥处理。9.2原料进厂前应进行检验，小麦水分宜在 12.5%以下，霉变粒应符合国家相关规定。9.3应严格把控食品加工过程前原材料的呕吐毒素污染，防止呕吐毒素污染严重的材料进入到加工过程中。9.4应根据原料的质量状况和终产品需要合理设计生产工艺。9.5应采取适当的措施剔除发霉粒，进一步降低呕吐毒素的污染。有效去除异物和霉粒。9.6以小麦为原料的食品加工过程应符合相关 GB 13122 的要求。10检验10.1应制定合理的呕吐毒素检验计划，使用可行的方法对不同样品进行检验。快检时，应定期进行验证和校准。10.2采样时应进行多位点采样监测，避免在外界环境的干扰（如恶劣天气）下进行，同时保证采样工具应清洁、保养良好。11基于降解酶制剂的小麦籽粒及小麦糖浆污染处置11.1处置范围呕吐毒素降解酶制剂降解小麦籽粒及小麦糖浆中的呕吐毒素的用法与用量、以及降解酶制剂使用过程中的保存要求。11.2降解酶制剂使用过程中注意事项11.2.1降解酶制剂反应过程中需要有水参与反应。11.2.2降解酶制剂适宜工作温度 373，适宜的 pH 酸碱度 310。11.2.3降解酶制剂反应中需提供持续的混匀。11.2.4拆开使用完毕后应立即封口密闭保存，注意防潮。11.2.5制剂应采用铝箔袋密封贮存在阴凉，干燥、通风的库房中，避免 40 以上的高温，拆开使用完毕后应立即封口密闭保存。如果贮存在低温环境下，取出制剂等彻底恢复至室温后再打开。11.2.6蛋白酶与吸附剂会对本制剂产生影响。11.3 小麦糖浆及小麦籽粒原料呕吐毒素检测参考 GB 5009.111 或附录 A.2。11.4降解酶制剂的添加量11.4.1降解酶制剂无结块、霉变、生虫现象。T/XAASS 0052022611.4.2降解酶制剂添加量：根据上述 11.3 中检测结果确定降解酶制剂添加量，当呕吐毒素检测结果3 mg/kg 时，以每吨原料添加 10 g 降解酶制剂的比例量添加；当原料呕吐毒素含量3 mg/kg 时，以每吨原料添加 100 g 降解酶制剂的比例添加。11.5降解酶制剂添加方法11.5.1当原料为颗粒状时，首先以原料与水以质量比为 1：4 的比例加入水，再按照11.4.2 中的用量添加降解酶至溶液中，此时保持原料温度为 37，pH 值尽量保持中性，同时需配合搅拌，反应 4 小时，使降解酶与毒素充分反应，反应完成后捞出小麦籽粒或沥干水分。11.5.2当原料为小麦糖浆时，原料就不必再加入水，直接按 11.4.2 中的用量添加降解酶，此时保持原料温度为 37，pH 值尽量保持中性，同时需配合搅拌，反应 4 小时，使降解酶与毒素充分反应。11.6降解效果检测11.6.1取反应完成后的小麦籽粒，粉碎，按 11.3 检测反应后的小麦籽粒中呕吐毒素含量。11.6.2小麦糖浆样品可混匀直接取样按 11.3 检测反应后的小麦糖浆中呕吐毒素含量。T/XAASS 00520227附录 A（资料性）小麦及发酵制品中呕吐毒素的主要检测方法A.1原理试验中的呕吐毒素用乙腈提取后，经无水硫酸镁分层、正己烷脱脂后，用液相色谱-串联质谱仪进行测定和确证，外标法定量。A.2试剂和材料除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。A.2.1乙腈，分析纯。A.2.2无水硫酸镁，分析纯。A.2.3正己烷，分析纯。A.2.4甲醇，色谱醇。A.2.5乙腈-水溶液（4+1，体积比）：量取 400 mL 乙腈与 100 mL 水混合均匀。A.2.6乙腈-水溶液（1+4，体积比）：量取 20 mL 乙腈与 80 mL 水混合均匀。A.2.7乙酸铵溶液（1 mol/L）：称取 77.08 g 乙酸铵，用水溶解并稀释至 1 000 mL，摇匀。A.2.82.5%氢氧化铵溶液：量取 1 mL 质量分数为 25.0%的氢氧化铵与 9 mL 水混合均匀。A.2.9乙酸铵缓冲液（5 mmol/L，pH8.0）：量取 5 mL 乙酸铵溶液（A.2.7），用 LC-MS级水溶解并稀释至 1 000 mL，摇匀，用 2.5%氢氧化铵（A.2.8）调节 pH 值在 7.95 至 8.05之间。A.2.10脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准物质（DON，C15H20O6，CAS 号：51481-10-8）：纯度大于等于 99.0%。A.2.113-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准物质（3-ADON，C17H22O7，CAS 号：50722-38-8）：纯度大于等于 99.0%。A.2.1215-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准物质（15-ADON，C17H22O7，CAS 号：88337-96-6）：纯度大于等于 99.0%。A.2.13标准储备溶液：根据说明书中所示的浓度和不确定度，制备含浓度分别为 100g/mL 的 DON、3-ADON 和 15-ADON 标准溶液，-18 密封保存，有效期 1 年。A.2.14混合标准工作溶液：准确吸取 100 g/mL 的 DON、3-ADON 和 15-ADON 标准溶液各 1.0 mL 于同一 10 mL 容量瓶中，加甲醇定容。-18 密封保存，有效期 1 年。A.2.15标准系列工作溶液：准确吸取适量混合标准工作溶液，用初始流动相配置成 62.5ng/mL、125 ng/mL、250 ng/mL、500 ng/mL、1 000 ng/mL 的混合标准系列工作溶液。4 密封保存，有效期 7 d。A.3仪器和设备A.3.1液相色谱-串联质谱仪：配有 ESI 电离源、串联四级杆质量分析器。A.3.2pH 计。A.3.3分析天平：感量 0.01 g、0.0001 g。A.3.4振荡器。A.3.5粉碎机。A.3.6离心机：转速不低于 3 000 r/m。A.3.7漩涡混合器。A.3.8氮吹仪。T/XAASS 00520228A.4分析步骤A.4.1提取称取 1 g（准确至 0.01 g）过 40 目筛网的小麦籽粒原料（或小麦糖浆原料）于 50 mL离心管中，加入 10 mL 乙腈-水溶液（A.2.5），立即涡旋振荡 30 s，超声 30 min 后，3 000rpm 离心 5 min，取 2 mL 上清液转移至新的 10 mL 离心管，加入 150 mg 无水硫酸镁，涡旋振荡后取上清液至新的 10 mL 离心管。加入 1 mL 正己烷脱脂后，剧烈涡旋离心后去除正己烷层，剩余上清液氮气吹干后，用乙腈-水溶液（A.2.6）定容至 1 mL。涡旋 30 s 后，过 0.22m 尼龙滤膜，供液相色谱-串联质谱测定和确证。A.4.2测定A.4.2.1液相色谱参考条件a）色谱柱：YMC CHIRALART Cellulose-SC 手性色谱柱，长 250 mm，内径 3.0 mm，粒径 3.5 m，或相当者；b）流动相：75%甲醇（A.2.4）-25%乙酸铵缓冲液（A.2.9）等度洗脱；c）柱温：30；d）进样体积：10 L；e）洗脱时间：16 min。A.4.2.2质谱参考条件a）离子化模式：正负离子切换模式下的电喷雾电离；b）喷雾电压：3.5 kV；c）毛细管温度：350；d）雾化温度：250；e）鞘气压力：30 psi；f）辅助气压力：20 psi；g）质谱参数如下所示:化合物加合离子母离子（m/z）产物离子（m/z）保留时间min碰撞能量eVDONDON+CH3COO-355.1295.01247.026.381715-ADON15-ADON+NH4+356.1320.91136.928.81123-ADON3-ADON+CH3COO-397.0307.11173.1210.12161，定性离子2，定量离子