基于NRF2_FPN1通路探究黄芪甲苷减轻糖尿病心肌梗死大鼠心肌损伤的作用机制.pdf

论著基于N R F 2/F P N 1通路探究黄芪甲苷减轻糖尿病心肌梗死大鼠心肌损伤的作用机制*邓长青 张京兰 金海涛(武汉市中医医院脑病科,湖北 武汉 4 3 0 0 1 4)【摘要】目的 探讨基于核因子E 2相关因子2(N R F 2)/膜铁转运蛋白1(F P N 1)通路对黄芪甲苷(A S)减轻糖尿病(DM)心肌梗死大鼠心肌损伤的作用机制。方法 通过高糖饲料及链脲佐菌素(S T Z)建立DM大鼠模型,将DM造模成功的5 0只大鼠通过结扎左冠状动脉前降支构建DM心肌梗死大鼠模型,将造模成功的5 0只大鼠随机分为梗死组、A S低剂量(A S-L,2 0 m g/k g A S)组、A S中剂量(A S-M,4 0 m g/k g A S)组、A S高剂量(A S-H,8 0 m g/k g A S)组、A S-H+N R F 2抑制剂(ML 3 8 5,8 0 m g/k g A S+3 0 m g/k g ML 3 8 5)组,同时以1 0只开胸大鼠设为假手术组。干预结束后,检测心功能 左心室射血分数(L V E F)、肌酸激酶同工酶-MB(C K-MB)、肌酸激酶(C K)指标;2,3,5-氯化三苯基四唑(T T C)检测心肌梗死体积比;试剂盒检测铁含量水平;HE染色检测大鼠心肌组织病理变化;q R T-P C R及W e s t e r n b l o t分析心肌组织中N R F 2、谷胱甘肽过氧化酶4(G P X 4)、F P N 1 mR NA及蛋白表达。结果 与假手术组相比,梗死组大鼠病理损伤严重,L V E F、N R F 2、G P X 4、F P N 1 mR NA及蛋白表达显著降低,梗死体积比、铁离子含量、C K-MB、C K显著增加(均P0.0 5);与梗死组相比,A S-L组、A S-M组、A S-H组大鼠病理损伤得到改善,L V E F、N R F 2、G P X 4、F P N 1 mR NA及蛋白表达显著增加,梗死体积比、铁离子含量、C K-MB、C K显著降低,呈现剂量依赖性(均P0.0 5);与A S-H组相比,A S-H+ML 3 8 5组病理损伤相对严重,L V E F、N R F 2、G P X 4、F P N 1 mR NA及蛋白表达显著降低,梗死体积比、铁离子含量、C K-MB、C K显著增加(均P0.0 5)。结论 A S可减轻DM心肌梗死大鼠心肌损伤,可能通过激活N R F 2/F P N 1通路抑制铁死亡实现。【关键词】N R F 2/F P N 1通路;黄芪甲苷;糖尿病心肌梗死;心肌损伤【中图分类号】R 5 8 7.1 【文献标志码】A D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.1 0.0 0 6 基金项目:武汉市医学科研项目(WZ 2 0 C 3 6)通讯作者:张京兰,副主任医师,E-m a i l:x k e 3 7 5 0 1 11 6 3.c o m引用本文:邓长青,张京兰,金海涛.基于N R F 2/F P N 1通路探究黄芪甲苷减轻糖尿病心肌梗死大鼠心肌损伤的作用机制J.西部医学,2 0 2 3,3 5(1 0):1 4 3 9-1 4 4 3,1 4 5 1.D O I:1 0.3 9 6 9/j.i s s n.1 6 7 2-3 5 1 1.2 0 2 3.1 0.0 0 6E x p l o r i n g t h e m e c h a n i s m o f a s t r a g a l o s i d e A i n a l l e v i a t i n g m y o c a r d i a l i n j u r y i n r a t s w i t h m y o c a r d i a l i n f a r c t i o n i n d i a b e t e s m e l l i t u s b a s e d o n N R F 2/F P N 1 p a t h w a yD E N G C h a n g q i n g,Z H A N G J i n g l a n,J I N H a i t a o(D e p a r t m e n t o f E n c e p h a l o p a t h y,W u h a n H o s p i t a l o f T r a d i t i o n a l C h i n e s e M e d i c i n e,W u h a n 4 3 0 0 1 4,C h i n a)【A b s t r a c t】O b j e c t i v e T o e x p l o r e t h e m e c h a n i s m o f a s t r a g a l o s i d e A(A S)i n a l l e v i a t i n g m y o c a r d i a l i n j u r y i n r a t s w i t h m y o c a r d i a l i n f a r c t i o n i n d i a b e t e s m e l l i t u s(DM)b a s e d o n n u c l e a r f a c t o r E 2-r e l a t e d f a c t o r 2(N R F 2)/f e r r o p o r t i n 1(F P N 1)p a t h w a y.M e t h o d s DM r a t m o d e l w a s e s t a b l i s h e d b y h i g h s u g a r d i e t a n d s t r e p t o z o t o c i n(S T Z).T h e 5 0 r a t s s u c c e s s f u l l y m o d e l i n g DM w a s g i v i n g l i g a t i n g t h e a n t e r i o r d e s c e n d i n g b r a n c h o f l e f t c o r o n a r y a r t e r y t o e s t a b l i s h t h e r a t m o d e l o f DM m y o c a r d i a l i n f a r c t i o n.T h e 5 0 r a t s w i t h s u c c e s s f u l m o d e l i n g w e r e r a n d o m l y d i v i d e d i n t o i n f a r c t i o n g r o u p,l o w d o s e A S(A S-L,2 0 m g/k g A S),m i d d l e d o s e A S(A S-M,4 0 m g/k g A S),h i g h d o s e A S(A S-H,8 0 m g/k g A S)g r o u p,a n d A S-H+N R F 2 i n h i b i t o r(ML 3 8 5,8 0 m g/k g A S+3 0 m g/k g ML 3 8 5)g r o u p.M e a n t i m e,1 0 o p e n c h e s t r a t s w e r e t a k e n a s t h e s h a m o p e r a t i o n g r o u p.A f t e r t h e i n t e r v e n t i o n,c a r d i a c f u n c t i o n l e f t v e n t r i c u l a r e j e c t i o n f r a c t i o n(L V E F),c r e a t i n e k i n a s e i s o e n z y m e-MB(C K-MB),c r e a t i n e k i n a s e(C K)i n d e x e s w e r e m e a s u r e d;2,3,5-t r i p h e n y l t e t-r a z o l i u m c h l o r i d e(T T C)w a s u s e d t o m e a s u r e t h e v o l u m e r a t i o o f m y o c a r d i a l i n f a r c t i o n.T h e k i t w a s u s e d t o d e t e c t t h e i-9341西部医学 2 0 2 3年1 0月 第3 5卷第1 0期 M e d J W e s t C h i n a,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 0r o n c o n t e n t l e v e l;HE s t a i n i n g w a s u s e d t o d e t e c t t h e p a t h o l o g i c a l c h a n g e s o f m y o c a r d i u m i n r a t s.mR NA a n d p r o t e n e x-p r e s s i o n o f N R F 2,g l u t a t h i o n e p e r o x i d a s e 4(G P X 4)a n d F P N 1 i n m y o c a r d i u m e v e a n a l y z e d b y q R T-P C R a n d W e s t e r n b l o t.R e s u l t s C o m p a r e d w i t h t h e s h a m o p e r a t i o n g r o u p,t h e p a t h o l o g i c a l i n j u r y o f r a t s i n t h e i n f a r c t i o n g r o u p w a s s e r i-o u s,t h e e x p r e s s i o n o f L V E F,mR NA a n d p r o t e i n e x p r e s s i o n o f N R F 2,G P X 4 a n d F P N 1 d e c r e a s e d o b v i o u s l y,t h e i n f a r c t v o l u m e r a t i o,i r o n i o n c o n t e n t,C K-MB a n d C K i n c r e a s e d o b v i o u s l y(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h t h e i n f a r c t i o n g r o u p,t h e p a t h o l o g i c a l i n j u r y o f r a t s i n A S-L g r o u p,A S-M g r o u p a n d A S-H g r o u p w a s i m p r o v e d,t h e e x p r e s s i o n o f L V E F,mR NA a n d p r o t e i n e x p r e s s i o n o f N R F 2,G P X 4 a n d F P N 1 i n c r e a s e d o b v i o u s l y,t h e i n f a r c t v o l u m e r a t i o,i r o n i o n c o n t e n t,C K-MB a n d C K d e c r e a s e d o b v i o u s l y,t h e y w e r e d o s e d e p e n d e n t(P0.0 5).C o m p a r e d w i t h t h e A S-H g r o u p,t h e p a t h o l o g i-c a l i n j u r y i n t h e A S-H+ML 3 8 5 g r o u p w a s r e l a t i v e l y s e r i o u s,t h e e x p r e s s i o n o f L V E F,mR NA a n d p r o t e i n e x p r e s s i o n o f N R F 2,G P X 4 a n d F P N 1 d e c r e a s e d o b v i o u s l y,t h e i n f a r c t v o l u m e r a t i o,i r o n i o n c o n t e n t,C K-MB a n d C K i n c r e a s e d o b v i-o u s l y(P0.0 5).C o n c l u s i o n A S c a n a l l e v i a t e t h e m y o c a r d i a l i n j u r y o f DM m y o c a r d i a l i n f a r c t i o n r a t s,w h i c h m a y b e a-c h i e v e d b y a c t i v a t i n g N R F 2/F P N 1 p a t h w a y t o i n h i b i t i r o n d e a t h.【K e y w o r d s】N R F 2/F P N 1 p a t h w a y;A s t r a g a l o s i d e A;M y o c a r d i a l i n f a r c t i o n i n d i a b e t e s m e l l i t u s;M y o c a r d i a l i n j u r y 糖尿病(D i a b e t e s m e l l i t u s,DM)的主要特征为胰岛素分泌不足、高血糖和高脂血症,属于一种代谢性疾病,其发病率逐渐上升,造成DM患者死亡的主要原因是患者发生心血管并发症,而心肌梗死是死亡率最高的 并 发 症,推 测 可 能 与DM心 肌 缺 血 损 伤 有关1-2,因此深入探索DM心肌梗死引发的心肌损伤机制有利于开发治疗方案。黄芪甲苷(A s t r a g a l o s i d e A,A S)是从黄芪中提取的黄酮类化合物,具有抗氧化、抗炎和抗肿瘤活性等广泛的药理活性,在缺血/再灌注(I s c h e m i a/r e p e r f u s i o n,I R)损伤中可发挥保护心脏的作用3。据报道4铁稳态失衡与多种疾病有关,如心脏病、神经退行性疾病、癌症和贫血等。膜铁转运蛋白1(F e r r o p o r t i n 1,F P N 1)是在哺乳动物中唯一被发现的与铁释放相关的跨膜蛋白,在系统性铁稳态中起关键作 用5。核 因 子E 2相 关 因 子2(N u c l e a r f a c t o r E 2-r e l a t e d f a c t o r 2,N R F 2)是抗氧化反应的关键调节因子,参与保护心肌免于铁死亡6。然而,A S能否通过N R F 2/F P N 1对DM心肌梗死心肌损伤产生影响尚不清楚。因此本研究通过建立DM心肌梗死大鼠模型,以不同浓度的A S干预,探索其对DM心肌梗死大鼠心肌损伤的影响。1 材料与方法1.1 实验动物 雄性S p r a g u e-D a w l e y大鼠(2 0 02 2 0 g,6周龄)购自博济医药科技股份有限公司,许可证号:S Y X K(粤)2 0 2 2-0 2 7 9。将大鼠饲养在标准实验室条件下,其中温度为(2 52),相对湿度为(6 01 5)%。所有实验程序均经动物护理和使用委员会批准,伦理批号:2 0 2 2-0 6-0 7 5。1.2 实验试剂 成都慕思生物科技有限公司购入A S(纯度9 8%);S i g m a C h e m i c a l提供链脲佐菌素(S t r e p t o z o t o c i n,S T Z)、2,3,5-氯化三苯基四唑(2,3,5-t r i p h e n y l t e t r a z o l i u m c h l o r i d e,T T C);M e d-C h e-m E x p r e s s公司提供ML 3 8 5;S e r v i c e b i o提供P r i m e-S c r i p t R T试剂盒、A b c a m公司提供N R F 2、F P N 1、谷胱甘肽过氧化酶4(G l u t a t h i o n e p e r o x i d a s e 4,G P X 4)一抗以及铁离子试剂盒。1.3 方法1.3.1 DM心肌梗死大鼠模型的制备及干预 所有大鼠适应性饲养5 d后,随机分为假手术组(1 0只)及造模组(5 3只),选取造模组大鼠参照刘宇等7方法进行制备DM大鼠模型,大鼠给予8周的高糖饲料喂养,随后腹腔注射6 5 m g/k g S T Z,假手术组给予等体积的柠檬酸钠缓冲液腹腔注射,并以普通饲料喂养。7 2 h后(禁食6 h),大鼠出现高血糖(血糖高于1 6.7 mm o l/L),并伴随多食、多饮、多尿症状,则认为DM大鼠造模成功。将DM造模成功的5 0只大鼠(3只失败)腹腔注射6 0 m g/k g戊巴比妥钠进行麻醉并进行心电图监测,将大鼠气管插管,在大鼠左锁骨中线第34肋间切开肋骨,完全暴露心脏,在距左心耳下缘2 mm,以6-0尼龙线结扎左冠状动脉前降支,当心尖区和左心室壁从红色变为白色,心电图S T段升高时,表明DM心肌梗死大鼠模型构建成功7,假手术组仅进行开胸,但不结扎。将5 0只造模成功的DM心肌梗死大鼠随机分为梗死组、A S低剂量(A S-L)组、A S中剂量(A S-M)组、A S高 剂 量(A S-H)组、A S-H+N r f 2抑制剂(ML 3 8 5)组。A S-L组、A S-M组、A S-H组分别以2 0 m g/k g A S、4 0 m g/k g A S、8 0 m g/k g A S灌胃干预8;A S-H+ML 3 8 5组以8 0 m g/k g A S灌胃,同时进行腹腔注射3 0 m g/k g M L 3 8 5干预9,其余各组进行等体积的生理盐水干预,1次/d,连续3 0 d。1.3.2 心功能指标检测 彩超采集数据计算大鼠左心 室 射 血 分 数(L e f t v e n t r i c u l a r e j e c t i o n f r a c t i o n,L V E F);麻醉大鼠静脉取血,全自动生化仪分析肌酸激酶同工酶-MB(C r e a t i n e k i n a s e i s o e n z y m e-MB,C K-0441西部医学 2 0 2 3年1 0月 第3 5卷第1 0期 M e d J W e s t C h i n a,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 0MB)、肌酸激酶(C r e a t i n e k i n a s e,C K)水平。1.3.3 T T C染色评估心肌梗死体积比 各组随机选取3只大鼠,麻醉并使大鼠安乐死,取出心脏,在-2 0 下冷冻3 0 m i n,然后制备组织2 mm厚切片,将切片在1%T T C缓冲液中孵育3 0 m i n,然后在1 0%甲醛溶液中固定2 4 h,对切片进行成像,I m a g e P r o P l u s 7.0软件测量心肌梗死体积,其百分比以梗塞体积与切片总体积的占比表示。1.3.4 样本采集 麻醉并处死各组剩余7只大鼠,取出心肌组织,一部分浸泡到甲醛溶液中;另一部分于-8 0 保存。1.3.5 HE检测心肌组织病理学变化 取出固定于甲醛溶液中的心肌组织,然后将组织在一系列乙醇和二甲苯溶液中脱水并包埋在石蜡中,切片机将心脏组织切成4 m厚的切片,使用苏木精和伊红染色检查组织病理学变化。1.3.6 试剂盒检测铁离子含量 取出-8 0 保存的心肌组 织,离 心 后 按 照 试 剂 盒 说 明 书 检 测 铁 离 子含量。1.3.7 实时荧光定量P C R(q R T-P C R)检测心肌组织中N R F 2、G P X 4、F P N 1 mR NA表达水平 T r i z o l试剂从心肌样品中提取总R NA。然后以P r i m e-S c r i p t R T试剂盒说明书将R NA逆转录成c D NA。以c D-NA为模板,通过B i o-R a d C F X C o n n e c t实时P C R检测系统进行q R T-P C R反应,使用2-C T方法分析基因的表达,其中-a c t i n为参照。引物序列,见表1。表1 q R T-P C R引物序列T a b l e 1 P r i m e r s e q u e n c e o f q R T-P C R引物名称方向序列(5-3)G P X 4FA GA GAT C AAA GA G T T C G C C GRT T G T C GA T GA G GAA C T G T G G-a c t i nFT G C T AT G T T G C C C T A GA C T T C GRG T T G G C A T A GA G G T C T T T A C G GF P N 1FA G C C T G C C A C C AA C C C G T A GART G G C T C C C A G GA C C A GAA CN R F 2FT T G G G G T AA G T C GAGAA G T G T T TRA T G T G G G C AA C C T G G GA G T A1.3.8 W e s t e r n b l o t检测心肌组织中N R F 2、G P X 4、F P N 1蛋白表达 取出1.3.4中保存的心肌组织,采用预冷的R I P A裂解缓冲液中提取蛋白,取上清液并添加到蛋白质缓冲液中。然后测量蛋白浓度并通过S D S-P AG E凝胶分离总蛋白,之后转移到P V D F膜上,于脱脂牛奶中孵育1 h。将一抗(G P X 4,1 1 0 0 0;N R F 2,1 1 0 0 0;F P N 1,1 1 0 0 0;-a c t i n,1 1 0 0 0)在4 下与膜一起孵育过夜。然后在室温下加入二抗(1 5 0 0 0)孵育1 h,I m a g e J分析N R F 2、G P X 4、F P N 1蛋白表达水平。1.4 统计学分析 采用S P S S 2 7.0软件分析实验数据,计量资料以均数标准差(xs)表示;单因素方差分析用于多组间比较,以s n k-q检验进一步比较。以P0.0 5为差异有统计学意义。2 结果2.1 A S对各组大鼠心功能指标的影响 与假手术组相比,梗死组大鼠L V E F显著降低,C K-MB、C K显著增加(P0.0 5);与梗死组相比,A S-L组、A S-M组、A S-H组大鼠L V E F显著增加,C K-MB、C K显著降低,呈现剂量依赖性(P0.0 5);与A S-H组相比,A S-H+ML 3 8 5组大鼠L V E F显著降低,C K-MB、C K显著增加(P0.0 5)。见图1。图1 各组大鼠L V E F、C K-MB、C K比较F i g u r e 1 C o m p a r i s o n o f L V E F,C K-MB a n d C K i n e a c h g r o u p 注:与假手术组比较,P 0.0 5;与梗死组比较,P 0.0 5;与A S-L组比较,P 0.0 5;与A S-M组比较,P 0.0 5;与A S-H组比较,P 0.0 5。2.2 A S对各组大鼠心肌梗死体积比的影响 心肌梗死体积比:梗死组较假手术组、A S-H+M L 3 8 5组较A S-H组均显著增加,A S-L组、A S-M组、A S-H组较梗死组显著降低,呈现剂量依赖性(均P 0.0 5),见图2。图2 各组大鼠心肌梗死体积比比较F i g u r e 2 C o m p a r i s o n o f m y o c a r d i a l i n f a r c t i o n v o l u m e r a t i o o f r a t s i n e a c h g r o u p注:与假手术组比较,P 0.0 5;与梗死组比较,P 0.0 5;与A S-L组比较,P 0.0 5;与A S-M组比较,P 0.0 5;与A S-H组比较,P 0.0 5。2.3 A S对各组大鼠心肌组织病理学的影响 假手术组大鼠无病理损伤出现;梗死组大鼠出现严重水肿、炎症发生并伴随心肌坏死;A S-L组、A S-M组、A S-H组干预后,各组大鼠病理损伤逐渐得到改善,以1441西部医学 2 0 2 3年1 0月 第3 5卷第1 0期 M e d J W e s t C h i n a,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 0A S-H组改善最为显著;A S-H+ML 3 8 5组水肿等病理现象较A S-H组加重。见图3。图3 心肌组织病理学变化(H E,4 0 0)F i g u r e 3 M y o c a r d i a l h i s t o p a t h o l o g i c a l c h a n g e s2.4 A S对各组大鼠铁离子含量的影响 铁离子含量:梗死组较假手术组显著增加,A S-H+ML 3 8 5组较A S-H组显著增加(均P0.0 5);A S-L组、A S-M组、A S-H组较梗死组显著降低,呈现剂量依赖性(P0.0 5)。见图4。图4 各组大鼠铁离子比较F i g u r e 4 C o m p a r i s o n o f i r o n i o n s i n e a c h g r o u p 注:与假手术组比较,P 0.0 5;与梗死组比较,P 0.0 5;与A S-L组比较,P 0.0 5;与A S-M组比较,P 0.0 5;与A S-H组比较,P 0.0 5。2.5 A S对 各 组 大 鼠 心 肌 组 织 中N R F 2、G P X 4、F P N 1 mR NA表达的影响 N R F 2、G P X 4、F P N 1 mR-NA表达:梗死组较假手术组,A S-H+ML 3 8 5组较A S-H组均显著降低(P0.0 5);A S-L组、A S-M组、A S-H组较梗死组显著增加,呈现剂量依赖性(均P0.0 5)。见图5。2.6 A S对各组大鼠心肌组织中N R F 2、G P X 4、F P N 1蛋白表达的影响 N R F 2、G P X 4、F P N 1蛋白表达:梗死组较假手术组,A S-H+M L 3 8 5组较A S-H组均显著降低(P 0.0 5);A S-L组、A S-M组、A S-H组较梗死组显著增加,呈现剂量依赖性(P 0.0 5)。见图6、表2。图5 心肌组织N R F 2、G P X 4、F P N 1 m R N A表达比较F i g u r e 5 C o m p a r i s o n o f m R N A e x p r e s s i o n s o f N R F 2,G P X 4 a n d F P N 1 i n m y o c a r d i a l t i s s u e注:与假手术组比较,P 0.0 5;与梗死组比较,P 0.0 5;与A S-L组比较,P 0.0 5;与A S-M组比较,P 0.0 5;与A S-H组比较,P 0.0 5。图6 心肌组织中N R F 2、G P X 4、F P N蛋白表达(W e s t e r n b l o t图)F i g u r e 6 E x p r e s s i o n s o f N R F 2,G P X 4 a n d F P N p r o t e i n s i n m y o c a r d i a l t i s s u e(W e s t e r n b l o t)注:A.假手术组;B.梗死组;C.A S-L组;D.A S-M组;E.A S-H组;F.A S-H+ML 3 8 5组。2441西部医学 2 0 2 3年1 0月 第3 5卷第1 0期 M e d J W e s t C h i n a,O c t o b e r 2 0 2 3,V o l.3 5,N o.1 0表2 心肌组织中N R F 2、G P X 4、F P N 1蛋白表达的比较(xs,n=7)T a b l e 2 C o m p a r i s o n o f N R F 2,G P X 4 a n d F P N 1 p r o t e i n e x p r e s s i o n s i n m y o c a r d i a l t i s s u e 组别N R F 2/-a c t i nG P X 4/-a c t i nF P N 1/-a c t i n假手术组1.1 50.1 21.0 90.1 10.9 30.1 0梗死组0.3 20.0 40.2 60.0 30.1 80.0 2A S-L组0.5 60.0 60.4 90.0 50.4 20.0 5A S-M组0.7 90.0 80.7 20.0 80.6 70.0 7A S-H组1.0 40.1 10.9 50.1 00.8 90.0 9A S-H+ML 3 8 5组0.7 40.0 80.6 90.0 70.6 50.0 7注:与假手术组比较,P0.0 5;与梗死组比较,P0.0 5;与A S-L组比较,P0.0 5;与A S-M组比较,P0.0 5;与A S-H组比较,P0.0 5。3 讨论心肌梗死严重威胁人们健康状况和生活质量,但对DM患者的威胁更大,是DM患者常见的并发症,且预后差,死亡率更高,且在全球范围内产生医疗费用较高,引起了人们的关注1 0-1 1。因此本研究通过高糖饲料及S T Z建立DM大鼠模型,当血糖高于1 6.7 mm o l/L时,并伴随三多症状(多食、多饮、多尿),则认为DM大鼠造模成功。将DM大鼠通过结扎左冠状动脉前降支,心电图显示S T段提高则表明DM心肌梗死大鼠模型构建成功,可进入下一步探究中。A S是一种从柿子叶或绿茶种子中提取的黄酮类化合物,具有多种药理特性,包括抗炎、抗氧化和抗病毒以及对皮炎和神经元损伤的保护作用1 2。吴红伟等1 3研究发现A S具有保护心脏的作用。除此之外,在对心肌梗死大鼠的研究中,A S可改善大鼠心功能及心室重构1 4-1 5。本研究发现梗死组大鼠病理损伤严重,梗死体积比增加,心功能受损,提示DM心肌梗死大鼠心肌严重受损。但经A S-L、A S-M、A S-H干预后,大鼠心功能及病理损伤得到改善,梗死体积比减少,提示A S可保护DM心肌梗死大鼠心肌受损。N R F 2是一种应激诱导的转录因子,许多负责预防脂质过氧化以及由此引发的铁毒性的蛋白质和酶均是N R F 2靶基因1 6。F P N 1是一种铁运转氨酶哺乳动物中发现的一种重要的铁输出物,受铁水平的影响,其水平不足以维持铁过载细胞中的铁稳态,可导致活性氧(R e a c t i v e o x y g e n s p e c i e s,R O S)过度循环产生,引发氧化应激损伤,导致铁死亡1 7。而铁死亡是一种新型的细胞死亡,与氧化应激密切相关,以产生R O S和脂质过氧化为特征,研究1 8表明,铁死亡是心肌梗死发展 的关键机制。在 谷胱甘肽过 氧化物酶(G l u t a t h i o n e p e r o x i d a s e,G P x)家 族 成 员 中,已 知G P X 4特异性催化脂质过氧化物的减少,从而清除脂质R O S,与铁死亡息息相关1 9。如柚皮素通过调节N R F 2/G P X 4轴抑制铁生死亡减轻心肌缺血/再灌注损伤2 0。本研究发现梗死组大鼠铁离子含量增加,N R F 2、G P X 4、F P N 1 mR NA及蛋白表达降低,提示DM心肌梗死大鼠心肌受损可能通过抑制N R F 2/F P N 1通路发生铁死亡实现。但经A S-L、A S-M、A S-H干预后,N R F 2、G P X 4、F P N 1 mR NA及蛋白表达上调,铁含量减少,推测A S可通过激活N R F 2/F P N 1信号通路保护DM心肌梗死大鼠心肌受损,可能和铁素相互作用,帮助蛋白质与药物结合,抑制铁死亡,以调节疾病的进展。为验证实验推测,以N R F 2抑制剂-ML 3 8 5回 复 验 证,结 果 显 示,A S-H+ML 3 8 5组L V E F、N R F 2、G P X 4、F P N 1 mR NA及蛋白表达显著降低,梗死体积比、铁离子含量、C K-MB、C K显著增加,推测A S-H可DM心肌梗死大鼠心肌受损,但由于N R F 2/F P N 1通路被ML 3 8 5阻断,致使DM心肌梗死大鼠心肌受损,逆转了A S-H对DM心肌梗死大鼠的保护作用,进一步表明A S可通过激活N R F 2/F P N 1通路抑制铁死亡保护DM心肌梗死大鼠心肌受损。4 结论A S通过激活N R F 2/F P N 1通路抑制铁死亡,改善DM心肌梗死大鼠受损,为DM心肌梗死治疗提供依据,但由于机制复杂,后续需开展细胞实验进一步核实。【参考文献】1GON G J,Z HOU F,WAN G S X X,e t a l.C a v e o l i n-3 p r o t e c t s d i a b e t i c h e a r t s f r o m a c u t e m y o c a r d i a l i n f a r c t i o n/r e p e r f u s i o n i n-j u r y t h r o u g h 2 A R,c AMP/P KA,a n d B D N F/T r k B s i g n a l i n g p a t h w a y sJ.A g i n g(A l b a n y NY),2 0 2 0,1 2(1 4):1 4 3 0 0-1 4 3 1 3.2P A L UMB O C,N I C O L A C I N,L A MANNA A A,e t a l.A s o c i a c i n d e d i a b e t e s i n s p i d a c e n t r a l y d i a b e t e s m e l l i t u s t i p o 2 A s s o c i a t i o n b e t w e e n c e n t r a l d i a b e t e s i n s i p i d u s a n d t y p e 2 d i a b e-t e s m e l l i t u s J.M e d i c i n a(B A i r e s),