DB37∕T 4039-2020 鸡肉中氟虫腈及其代谢物残留量的测定 液相色谱－串联质谱法.doc

ICS11.220B 41DB37山东省地方标准DB37/T 40392020鸡肉中氟虫腈及其代谢物残留量的测定液相色谱串联质谱法Determination of fipronil and its metabolite residues in chicken by liquid chromatography tandem mass spectrometry2020 - 07 - 09发布2020 - 08 - 09实施山东省市场监督管理局发布目次前言II1范围12规范性引用文件13试验原理14试剂或材料15仪器设备26试样的制备27试验步骤27.1提取27.2净化27.3标准曲线的制备27.4测定28数据处理49检测方法的准确度和精密度49.1准确度49.2精密度4附录A（资料性附录）氟虫腈及其代谢物参考质量色谱图5前言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。本标准主要起草单位：山东省兽药质量检验所、威海市畜牧业发展中心。本标准主要起草人：尹伶灵、陈玲、李有志、杨修镇、刘少宁、魏秀丽、牛华星、张呈军、陈志强、赵国清。鸡肉中氟虫腈及其代谢物残留量的测定液相色谱串联质谱法1 范围本标准规定了鸡肉中氟虫腈及其代谢物（氟甲腈、氟虫腈硫醚和氟虫腈砜）残留量检测的液相色谱串联质谱测定方法。本标准适用于鸡肉中氟虫腈及其代谢物残留量的检测。本方法检出限为0.5 g/kg，定量限为2.0 g/kg。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法。3 试验原理鸡肉中的氟虫腈及其代谢物经乙腈提取后，加入氯化钠进行分层，经PRiME HLB固相萃取柱净化后，液相色谱-串联质谱负离子模式测定，基质匹配外标法定量。4 试剂或材料除非另有规定，所用试剂均为分析纯。4.1 水：符合国标GB/T 6682一级水的规定。4.2 乙腈：色谱纯。4.3 氯化钠。4.4 20 %乙腈水溶液：准确量取乙腈（4.2）20 mL，加水稀释至100 mL。4.5 氟虫腈对照品、氟虫腈砜对照品、氟虫腈硫醚对照品和氟甲腈对照品，含量95 %。4.6 氟虫腈及其代谢物标准储备液：分别准确称取氟虫腈对照品、氟虫腈砜对照品、氟虫腈硫醚对照品和氟甲腈对照品（4.5）各10 mg，分别置于100 mL容量瓶中，用乙腈（4.2）配制成标准储备液(100 g/mL)，转移至棕色试剂瓶中后，避光储存于冰箱中(-20 )备用，有效期一年。4.7 氟虫腈及其代谢物混合标准工作液：分别精密吸取氟虫腈和3种代谢物标准储备液（4.6）各100 L，置于同一10 mL容量瓶中，用20 %乙腈水溶液（4.4）稀释至刻度摇匀，配制成浓度均为1 g/mL的混合标准工作液，避光0 4 保存，有效期2周。4.8 PRiME HLB固相萃取柱1) 非商业性声明：本试验是利用此固相萃取柱做的净化处理，此处列出的固相萃取柱仅是为了提供参考，并不涉及商业目的，鼓励标准使用者尝试不同型号的固相萃取柱。)或性能相当。4.9 有机滤膜：0.22 m。5 仪器设备5.1 液相色谱-串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。5.2 分析天平：感量0.000 01 g、0.01 g。5.3 均质机。5.4 涡旋混合器。5.5 离心机：转速不低于4 000 r/min。6 试样的制备取适量新鲜或冷藏的鸡肉，均质机搅碎，-20 以下保存。7 试验步骤7.1 提取称取试样2 g（精确至0.01 g），置于50 mL离心管内，加水10 mL，涡旋1 min。再加乙腈（4.2）10 mL，振荡10 min。然后加入氯化钠4 g（4.3），剧烈振摇1 min，4 000 r/min离心5 min。 7.2 净化取上清液0.5 mL淋洗HLB固相萃取柱，流出液弃去。再加入上清液1.5 mL，过HLB固相萃取柱，收集流出液备用。精密吸取上述流出液0.5 mL加水定容至1.0 mL，0.22 m滤膜过滤后，供液相色谱-串联质谱测定。7.3 标准曲线的制备用基质液分别制备成系列浓度为：0.1 g/L、0.2 g/L、0.5 g/L、1.0 g/L、2.0 g/L、5.0 g/L、10.0 g/L的标准工作液，供液相色谱-串联质谱测定。7.4 测定7.4.1 色谱参考条件色谱柱：C18 50 mm2.1 mm，粒径1.7 m，或相当者。流动相：流动相A：乙腈；流动相B：水。流速：0.2 mL/min。进样量：2 L。柱温：35 。流动相梯度洗脱条件见表1。表1 流动相梯度洗脱条件时间min流速mL/minA相%B相%00.220802.00.27030表1流动相梯度洗脱条件（续）时间min流速mL/minA相%B相%3.50.290104.50.220806.00.220807.4.2 质谱参考条件离子源：电喷雾离子源。扫描模式：负离子扫描。检测方式：多反应离子检测（MRM）。脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮或其他合适气体。锥孔电压、碰撞能量等应优化至最优灵敏度。监测离子参数情况见表2。表2 氟虫腈及其代谢物的定性定量离子对以及锥孔电压、碰撞能量药 物定性离子对m/z定量离子对m/z锥孔电压V碰撞能量eV氟虫腈435.1329.9435.1329.9818435.1249.926氟虫腈砜451281.7451281.7263245141524氟虫腈硫醚419.1262419.1262834419.1383.116氟甲腈387350.9387350.92014387281.9487.4.3 定性测定通过试样色谱图的保留时间与相应标准品的保留时间、各色谱峰的特征离子与相应浓度标准溶液各色谱峰的特征离子相对照定性。试料与标准品保留时间的相对偏差不大于2.5 %；试料特征离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度偏差不超过表3的规定，则可判断试料中存在氟虫腈及其代谢物残留。表3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度（%）5020 至 5010 至 2010允许的相对偏差（%）202530507.4.4 定量测定取基质匹配标准对照溶液和试料溶液，按外标法，以峰面积定量，标准对照溶液及试料溶液中的待测物响应值均应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱-质谱条件下，标准对照溶液中特征离子参考质量色谱图参见附录A。8 数据处理试料中待测物的残留量（g/kg）按式（1）计算：(1)式中：X 供试试料中待测物残留量，单位为微克每千克（g/kg）；CS 基质标准工作液中待测物的浓度，单位为微克每升（g/L）；A 供试试料中待测物的色谱峰面积；AS 基质标准工作液中待测物的色谱峰面积；V 试料溶液定容体积，单位为毫升（mL）；m 供试试料质量，单位为克（g）；20样品的稀释倍数。注： 测定结果用平行测定的算术平均值表示，结果保留三位有效数字。9 检测方法的准确度和精密度9.1 准确度本方法在2.0 g/kg100 g/kg添加浓度水平上的回收率为70 %110 %。9.2 精密度在重复性条件下，两次独立测定结果的绝对差值不超过算数平均值的15 %。AA附录A （资料性附录）氟虫腈及其代谢物参考质量色谱图图A.1 氟虫腈参考质量色谱图图A.2 氟虫腈砜参考质量色谱图图A.3 氟虫腈硫醚参考质量色谱图图A.4 氟甲腈参考质量色谱图_