环境浓度微塑料增强TDCIPP肝脏毒性及其分子响应机制.pdf

生态毒理学报Asian Journal of Ecotoxicology第 18 卷 第 4 期 2023 年 8 月Vol.18,No.4 Aug.2023 基金项目:国家自然科学基金资助项目(41907349,21906043);中国博士后面上项目(2019M662499);河南省科技攻关项目(222102320227);中国生态学学会青年人才托举工程(STQT2021C08)第一作者:张杏丽(1987),女,博士,主要研究方向为污染物的生态毒理与分子机制,E-mail: *通信作者(Corresponding author),E-mail:DOI:10.7524/AJE.1673-5897.20220929001张杏丽,史菁,赵静宜,等.环境浓度微塑料增强 TDCIPP 肝脏毒性及其分子响应机制J.生态毒理学报,2023,18(4):384-400Zhang X L,Shi J,Zhao J Y,et al.Promotion effects and molecular response mechanism of polyamide microplastics on hepatotoxicity of TDCIPP at envi-ronmental concentration J.Asian Journal of Ecotoxicology,2023,18(4):384-400(in Chinese)环境浓度微塑料增强 TDCIPP 肝脏毒性及其分子响应机制张杏丽,史菁,赵静宜,金彩霞,张国庆,邹威*河南师范大学环境学院,黄淮水环境污染与防治教育部重点实验室,河南省环境污染控制重点实验室,新乡 453007收稿日期:2022-09-29 录用日期:2022-12-02摘要:微塑料的生态环境及健康风险日益引起关注。为阐明微塑料对共存污染物毒性效应的影响,实验以斑马鱼为模式生物,探究环境相关浓度聚酰胺(PA;100 g L-1)微塑料与磷酸三(1,3-二氯异丙基)酯(TDCIPP;0.4、2 和 10 g L-1)复合暴露 4 个月对斑马鱼肝脏结构和功能的影响,并揭示其分子响应机制。结果显示,100 g L-1的 PA 处理对斑马鱼无明显不良影响,相比于 10 g L-1TDCIPP 处理组,PA 共暴露使斑马鱼体长、体质量和肝体指数分别降低 5.9%、11.7%、12.8%;单独 TDCIPP 处理组和 PA 与 TDCIPP 复合处理组肝脏内 TDCIPP 含量分别为 0.18 4.12 g g-1和 0.32 5.30 g g-1(以单位湿质量计),表明PA 可显著提高 TDCIPP 在斑马鱼肝脏内的富集含量;相比于空白和单一处理组,PA 和 TDCIPP 复合胁迫下肝脏活性氧、抗氧化酶活性、炎症因子水平显著升高,肝细胞核萎缩、胞质溶解和组织坏死等现象加剧。代谢组学分析发现,单一 PA 或 TDCIPP主要干扰肝脏糖类有氧代谢和三羧酸循环,复合暴露时肝脏 ATP 合成抑制进一步加剧,解毒和排泄功能相关的谷胱甘肽合成和精氨酸代谢过程显著下调,具有抗炎效应的不饱和脂肪酸合成过程上调。上述结果从酶活、炎症效应、组织损伤及内源代谢方面阐明环境浓度 PA 微塑料增强 TDCIPP 肝脏毒性的机制。关键词:微塑料;磷酸三(1,3-二氯异丙基)酯;斑马鱼;肝脏毒性;联合暴露文章编号:1673-5897(2023)4-384-17 中图分类号:X171.5 文献标识码:APromotion Effects and Molecular Response Mechanism of Polyamide Mi-croplastics on Hepatotoxicity of TDCIPP at Environmental ConcentrationZhang Xingli,Shi Jing,Zhao Jingyi,Jin Caixia,Zhang Guoqing,Zou Wei*Henan Key Laboratory of Environmental Pollution Control,Key Laboratory for Yellow River and Huai River Water Environment andPollution Control,Ministry of Education,College of Environment,Henan Normal University,Xinxiang 453007,ChinaReceived 29 September 2022 accepted 2 December 2022Abstract:The ecological environment and health risks of microplastics are of increasing concern.Herein,thisstudy investigated the effects of environmentally relevant concentrations of polyamide(PA;100 g L-1)microplas-tics combined with tris(1,3-dichloro-2-propyl)phosphate(TDCIPP;0.4,2,and 10 gL-1)on the structure andfunction of zebrafish liver after 4 months of co-exposure and the molecular mechanisms were revealed,aiming to e-lucidate the role of microplastics toward the toxic effects of co-existing pollutants.The results indicated that PA a-第 4 期张杏丽等:环境浓度微塑料增强 TDCIPP 肝脏毒性及其分子响应机制385 lone exhibited no significant negative effects on zebrafish.Compared with the individual TDCIPP(10 gL-1)group,the body length,body weight and hepatosomatic index of zebrafish in the PA co-exposed group decreasedby 5.9%,11.7%,and 12.8%,respectively.The TDCIPP contents in liver from individual TDCIPP and PA+TD-CIPP groups reached 0.18 4.12 g g-1and 0.32 5.30 g g-1(wet weight),respectively,signifying that PA sig-nificantly increased the TDCIPP enrichment in the liver.The levels of reactive oxygen species,antioxidant enzymeactivities,and inflammatory factors in the liver from the PA and TDCIPP co-exposure groups were obviously up-regulated relative to those individual groups,and the hepatocyte nuclear atrophy,cytosolysis and tissue necrosiswere aggravated.Metabolomic assays revealed that single PA or TDCIPP mainly interfered with hepatic carbohy-drate aerobic metabolism and tricarboxylic acid cycle,and the inhibition on hepatic ATP biosynthesis was furtherexacerbated upon co-exposure to PA and TDCIPP.Glutathione synthesis and arginine metabolism pathways in-volved in liver detoxification and pollutant excretion were down-regulated and the biosynthesis of unsaturated fattyacids with anti-inflammatory function was up-regulated.The above findings elucidated the mechanisms by whichenvironmentally relevant concentrations of PA microplastics elevate the hepatotoxicity of TDCIPP in terms of en-zyme activity,inflammation,tissue injury,and endogenous metabolism.Keywords:microplastics;TDCIPP;zebrafish;hepatotoxicity;co-exposure 2004 年Science杂志上报道海洋水体和沉积物?中的塑料碎片问题,首次提出微塑料(microplastics,MPs)的概念。MPs 通常指粒径98.0%)、对三联苯-d14(CAS No.1718-51-0,内标物质)、色谱纯二甲基亚砜(DMSO)、二氯甲烷、乙腈、正己烷和丙酮购于上海安谱实验科技股份有限公司;N-甲基-N-(三 甲 基 硅 烷)-三 氟 乙 酰 胺(MSTFA;CAS No.123746,纯度98.0%)和 O-甲基羟胺盐酸盐(Cas No.189571,纯度98.0%)购于北京百灵威科技有限公司;4%多聚甲醛固定液、分析纯乙醇和二甲苯购于阿拉丁试剂有限公司;苏木精-伊红(HE)染色试剂盒和磷酸盐缓冲液(PBS;pH 7.4)购于武汉赛维尔生物科技有限公司。活性氧(ROS)、总超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、还原型谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子(TNF-)、细胞白介素(IL-6)和三磷酸腺苷(ATP)含量分析生化试剂盒均从南京建成生物工程研究所购买。1.2 微塑料表征利用扫描电子显微镜(SEM;JSM-6390LV,日本株式会社日立高新技术公司)观察 MPs 形貌,使用激光粒度仪(S3500,麦奇克,美国)分析 MPs 粒径分布,利用傅里叶变换红外光谱仪(FTIR;Spectrum400F,Perkin Elmer,美国)分析 MPs 表面官能团,接触角测定仪(Theta Flex,百欧林,瑞典)确定 MPs 的疏水性。1.3 成年斑马鱼暴露与生长评估体长和体质量大致相同的野生型斑马鱼(3 个月龄,AB 品系)购自上海费曦生物科技有限公司,将成鱼置于装有控温装置和过滤系统的鱼缸中驯化培养 14 d 后进行暴露实验,实验分为空白对照组、PA单独暴露组(100 g L-1)、TDCIPP 单独暴露组(0.4、2 和 10 g L-1)、PA+TDCIPP 联合暴露组(100 gL-1PA+0.4、2 或 10 gL-1TDCIPP)。由于环境介质中 MPs 的检测技术所限,已有研究地表水中 MPs的含量几乎均用颗粒数表示,如 particles L-1和 par-ticles m-3。据报道29,中国、意大利、法国和日本等国家地表水中 MPs 的丰度为0.82 10 516 particles m-3,质量浓度约在 ngL-1到 mgL-1之间30;高污染区域海水中 MPs 的浓度可达 7 800 particlesL-1(质量浓度约为 4 500 gL-1),平均浓度在 3 23g L-1之间31-32;Goldstein 等33指出北太平洋亚热带环流中 MPs 浓度可达 300 gL-1。本实验使用PA MPs 的浓度为 100 gL-1,具有一定的环境相关性,也是目前许多毒理学实验中使用的最低浓度之一30,34。依据中国连云港水体(0.377 gL-1)35第 4 期张杏丽等:环境浓度微塑料增强 TDCIPP 肝脏毒性及其分子响应机制387 和日本固体废物处理场附近水体(6.18 g L-1)36中TDCIPP 检测浓度分别设置 TDCIPP 染毒低剂量和高剂量。因此本实验中 MPs 和 TDCIPP 染毒浓度均为环境相关浓度。染毒溶液使用含 60 mgL-1海盐的去离子水配制,空白和处理组中均加入 0.01%DMSO 为助溶剂,每个浓度设置 3 个平行鱼缸。实验过程中水体连续充气,并用玻璃棒不定时搅拌,以保持 MPs 悬浮状态,水体温度为(261),14 h 光照/10 h 黑暗,每天早晚各喂一次新鲜孵化的丰年虾,喂食 30 min 后清理剩余食物残渣,并定时清理鱼体排泄物,保持水体干净,2 d 更换 1/2 染毒液。经暴露 4 个月后,去离子水清洗鱼体,三卡因麻醉,滤纸吸干鱼体表面水分,测量其体长、体质量;冰浴解剖取出肝脏,称量质量,计算鱼的肝体指数(HIS)=肝质量(g)100%/体质量(g)。部分肝脏组织用4%多聚甲醛固定,4 保存,用于组织病理学分析;剩余肝脏组织,-20 保存,用于 TDCIPP 含量测定和生化指标分析。实验动物的培养、染毒、解剖和生物样品的收集严格按照国际经济合作组织中斑马鱼毒性测试的要求进行,严格遵循河南师范大学科研实验伦理规范和动物实验管理条例相关规定。1.4 肝脏组织内 TDCIPP 富集含量分析依据之前的研究方法进行肝脏内 TDCIPP 的提取与含量测定27。每组分别收集 6 尾斑马鱼(雌雄比为 11),取肝脏组织称量质量后,加入 4 mL 乙腈和 20 ng 对三联苯-d14内标物,机械匀浆后,冰浴超声萃取 40 min,离心收集上清液,残渣重复提取一次,合并提取液,旋转蒸发至 2 mL 后,转移到预先活化的 SPE(Bond Elut-PPL,200 mg,3 mL)固相小柱,4 mL 乙腈和2 mL 甲醇洗脱,洗脱物在温和氮气流中吹至近干,用 500 L 色谱纯正己烷重溶,转移至气质进样小瓶中,使用装载有 HP-5 MS Ultra Inert色谱柱(30 m 0.25 mm 0.25 m,安捷伦,美国)的气相色谱-三重四级杆质谱仪(GC-MS/MS,7890B-7000D,安捷伦,美国)测定 TDCIPP 的含量。进样量为 1 L,不分流模式,进样口温度 290。柱升温程序:50 恒温 2 min,10 min-1升温至 220,保留 0.5 min,4 min-1升温至 240,保留 1.5min。传输线温度为 300,离子源温度为 230,四级杆温度为 150。TDCIPP 和对三联苯-d14定性离子分别为 75m/z和224.2m/z,定量离子分别为98.9、190.9、209 和 224.2m/z。样品分析时设置溶剂?空白和肝脏空白样品作为对照监测实验过程的背景污染。肝脏样品中对三联苯-d14的回收率为(94.410.6)%,TDCIPP 的方法检出限为 0.37 gkg-1,数据处理中的 TDCIPP 最终浓度是样品浓度与空白样品 TDCIPP 最高检测值的差值。1.5 肝脏毒性指标分析1.5.1 组织病理学观察斑马鱼肝脏新鲜组织(雌雄=11)用 PBS 冲洗干净后,立即放入 4%多聚甲醛中 4 固定过夜,经酒精梯度脱水(50%、70%、85%、95%和 100%)和二甲苯透明后,石蜡包埋,制作超薄切片(4 m),HE 染色后,倒置荧光显微镜(Leica DMi8,德国)观察肝脏组织病理学损伤程度,每个处理组设置 3 个平行。1.5.2 氧化损伤及炎症因子分析每组称取3 份约30 mg 湿质量的肝脏组织样品(雌雄=11),按质量体积比 19 加入预冷 PBS,冰浴机械匀浆 5 min 后,1 500 rmin-1离心 10 min 收集上清液,按照试剂盒操作流程分别测定 ROS、SOD、GPx、GSH、MDA 和总蛋白的含量,评估肝脏氧化应激情况;另外,每组称取3 份约20 mg 湿质量的肝脏组织样本,按照上述步骤制备组织匀浆上清液,与 ELISA 试剂盒样品混合反应后,采用酶标仪(Synergy H1,BioTek,美 国)测 定 吸 光 度,采 用ELISACalc 软件对标准曲线进行 Logistic 拟合,计算样本中 TNF-和 IL-6 的绝对浓度,评估肝脏炎症水平,以上指标均用单位蛋白含量计算。1.6 肝脏代谢组学分析采用基于 GC-MS/MS 的非靶向代谢物组学分析方法鉴定污染胁迫下斑马鱼肝脏内源代谢物含量的变化。每组收集斑马鱼肝脏新鲜组织 50 mg,液氮快速冷冻,加入 2 mL 预冷的甲醇/氯仿/水混合提取液(体积比为 2.511)研磨成匀浆,40 微波萃取20 min,离心收集上清液,残渣重复萃取一次,合并2次提取液到 10 mL 离心管后加入 500 L 灭菌的高纯水,离心得到分层的样品溶液,取出下层的氯仿相氮吹至近干,与上层的甲醇/水相混合,氮吹后冷冻干燥,-80 密封保存。干燥的代谢物加入 50 L吡啶溶解的 O-甲基羟胺盐酸盐(20 mgmL-1),涡旋振荡混匀后,30 水浴 90 min,再加入 80 L 的MSTFA,37 水浴30 min。经两步衍生化后的代谢物样品 4 高速离心8 min(10 000 r min-1),收集上清液转移至气质进样小瓶,GC-MS/MS 上机检测,具体气相和质谱参数见我们前期研究报道37。数据采集 以 Scan 模 式 获 得 总 离 子 流 色 谱 图,利 用388 生态毒理学报第 18 卷NIST14.0 数据库对代谢物进行定性分析,生成包含化合物名称、保留时间、峰面积和匹配度等信息的文件。根据保留时间和匹配度筛选代谢物,以峰面积表示代谢物相对含量。使用 SIMCA-P 13.0 软件包对数据进行多元统计分析,通过主成分分析(PCA)得出处理组与空白组之间代谢物的离散趋势,利用 MetaboAnalyst 5.0 数据库对差异倍数1.5 的代谢物进行 KEGG 通路定位,找出显著富集的代谢通路。1.7 数据处理所有实验组均设置 3 个生物学重复,实验结果用平均值标准偏差表示。使用 SPSS 20.0 软件进行统计数据处理及单因素方差(ANOVA)分析,当P0.05),高浓度的 TDCIPP(10?g L-1)暴露导致斑马鱼体质量下降 14.9%;相比于空白组,100 gL-1PA 和 10 gL-1TDCIPP 复合处理组斑马鱼的体长和体质量分别降低 16.3%和24.8%(P0.05),表明 PA 和 TDCIPP 对斑马鱼生长表图 1 聚酰胺微塑料(PA MPs)的扫描电镜(a)、粒径分布(b)、傅里叶红外(c)和接触角(b)分析Fig.1 Scanning electron microscope(a),size distribution(b),Fourier transform infrared spectroscopy(c)and contact angleanalysis of polyamide microplastics(PA MPs)第 4 期张杏丽等:环境浓度微塑料增强 TDCIPP 肝脏毒性及其分子响应机制389 图 2 斑马鱼生长情况和肝脏磷酸三(1,3-二氯异丙基)酯(TDCIPP)含量分析注:*和#分别表示相对于空白组和单独 TDCIPP 处理组具有显著性差异(P0.05)。Fig.2 Growth assessment of zebrafish and tris(1,3-dichloro-2-propyl)phosphate(TDCIPP)content in fish liverNote:*and#represent significant differences compared with control and TDCIPP single group(PPA 暴露组高浓度 TDCIPP 暴露组中、低浓度 TDCIPP 暴露组空白对照组(图 3(b)和图 3(c);相应地,中、高浓度联合暴露组中斑马鱼肝脏 MDA 含量相比于空白和390 生态毒理学报第 18 卷TDCIPP 暴露组分别提高 18.9%35.8%和 12.5%16.2%(P0.05,图 3(d)。上述研究结果表明,单?一 PA 和 TDCIPP 暴露均一定程度上诱导斑马鱼肝脏组织 ROS 水平和抗氧化酶活性产生变化,二者联合暴露时肝脏 ROS 水平上调更为明显,抗氧化酶系统干扰程度加重,表现出更为显著的氧化损伤。进一步通过分析 TNF-和 IL-6 炎症因子水平变化,评估污染胁迫下斑马鱼肝脏的炎症响应。如图 3(e)和图3(f)结果显示,环境浓度 TDCIPP 暴露不会诱发斑马鱼肝脏出现明显的炎症反应,单一 PA 暴露时,IL-6 含量相对于空白增加 28.3%;PA 和 TDCIPP 联合暴露诱导最为显著的炎症反应,当 PA 和 TDCIPP 浓图 3 斑马鱼肝脏氧化损伤及炎症响应注:*和#分别表示相对于空白组和单独 TDCIPP 处理组具有显著性差异(P0.05)。Fig.3 Oxidative damage and inflammatory response of zebrafish liverNote:*and#represent significant differences compared with control and TDCIPP single group(P0.05).第 4 期张杏丽等:环境浓度微塑料增强 TDCIPP 肝脏毒性及其分子响应机制391 度分别为100 g L-1和10 g L-1时,相对于空白组和单 一 TDCIPP 暴 露 组,TNF-含 量 分 别 提 高50.3%和35.8%,IL-6 含量分别提高94.3%和63.5%(P0.05),表明复合暴露中 PA 显著增强 TDCIPP 诱?发的斑马鱼肝脏炎症效应。2.4 斑马鱼肝脏组织病理学损伤鉴于 PA 共存显著促进 TDCIPP 诱发的斑马鱼肝脏萎缩,并增强其氧化损伤和炎症效应,因此,进一步对空白组、TDCIPP(10 gL-1)、PA 和 PA+TD-CIPP(100 g L-1、10 gL-1)复合暴露组中斑马鱼肝脏组织进行病理学损伤分析。如图4(a)所示,空白组中斑马鱼的肝细胞分布均匀,索状结构清晰,细胞间分布着丰富的毛细血管,细胞核呈圆形,位于细胞中央,细胞膜结构完整。与空白组相比,TDCIPP 处理组中斑马鱼肝脏大部分胞核呈圆球形,位于细胞中央,细胞呈现清晰索状结构,无明显损伤(图 4(b);而PA 处理组中斑马鱼肝细胞基质变淡,部分区域细胞核萎缩变形(绿色箭头)、核溶解(黄色箭头),局部组织出现坏死情况(红色椭圆位置)(图 4(c)。PA MPs 和TDCIPP 联合暴露使斑马鱼肝脏结构损伤明显加重,细胞排列疏松、间隙增大、索状结构消失,细胞间质增加,出现大规模的核萎缩、溶解和胞质溶解现象,组织坏死形成空洞(图4(d)。上述观察结果与肝体指数下降、氧化损伤和炎症因子水平结果是一致的。2.5 斑马鱼肝脏代谢组学分析GC-MS/MS 分析共检测到60 种肝脏代谢物,主要包括糖类、脂肪酸、氨基酸、脂类、小分子酸和胆固醇等(表 1)。PCA 结果(图 5(a)显示,空白组(Con-trol)、PA、0.4 gL-1TDCIPP(T0.4)、2 gL-1TD-CIPP(T2)和 0.4 g L-1TDCIPP+PA(PA-T0.4)处理组呈现聚集趋势,而 10 g L-1TDCIPP(T10)、2 g L-1TDCIPP+PA(PA-T2)和 10 gL-1TDCIPP+PA(PA-T10)这 3 个处理组之间相关性较高,表明 PA 和低、中浓度 TDCIPP 单一暴露组斑马鱼肝脏代谢产物成分和含量与空白对照相似,而高浓度 TDCIPP及中、高浓度复合暴露组中代谢物成分和含量与空白存在明显差异,表明 PA 共存显著增强 TDCIPP 对斑马鱼肝脏内源代谢过程的干扰作用。图 4 斑马鱼肝脏组织病理学观察注:PA 和 TDCIPP 的浓度分别为 100 g L-1和 10 g L-1;绿色箭头表示胞核固缩、核变形,黄色箭头表示核溶解,红色椭圆区域表示组织局部坏死,空洞形成;比例尺为 20 m。Fig.4 Histopathological observation of zebrafish liverNote:The concentration of PA and TDCIPP was 100 g L-1and 10 g L-1,respectively;green arrows indicate cell nucleus pyknosis and nucleardeformation,yellow arrows indicate nuclear dissolution,red ovals indicate local tissue necrosis and cavity formation,and the scale bars were 20 m.392 生态毒理学报第 18 卷表 1 不同处理组斑马鱼肝脏代谢物的相对含量Table 1 Relative abundances of metabolites in zebrafish liver from different groups代谢物Metabolites空白对照ControlPAT0.4T2T10PA-T0.4PA-T2PA-T109,12-十八碳二烯酸9,12-octadecadienoic acid88703051166174261117952040148747956156411202169352468270283296552565263二十二碳六烯酸 Docosahexaenoic acid 3571510026789253432830111692976041562689326443099801126284254461136430373二十碳五烯酸 Eicosapentaenoic acid271640960503566417280390966 263868256.4 272103910516269493553604701.1 740589052亚麻酸 Linolenic acid8855467915077211099353784181922221181990221197822012325093529599174706十八碳烯酸 Octadecenoic acid11959690093053265155674072147260082214456722234551098310353784442260082亚油酸 Linoleic acid191469614306390815222041051260593961309668649310468429386804028680394009肉豆蔻酸 Myristic acid135116292111972140121545996164001008118572223130996972340940646236419273棕榈酸 Palmitic acid192434646150283679196749596147456605167034327167971307610462753706175086花生四烯酸 Arachidonic acid5498127848885972056689711216856549355980416816695959041238563282 6276436744十六碳烯酸 Hexadecenoic acid324760934954674934285264251361223930780499656822115609988148922221尸胺 Cadaverine2324788931 2317194611 22908871118980011111675267621600981121613011169260295323L-半胱氨酸 L-cysteine538015125559022111538900111221244588174349389453389000250390966181352969甘氨酸 Glycine605478478749337614717081168547456605526286447593995840233796923218310513异亮氨酸 Isoleucine363613203313884357286804028247309785129129032309603103241661228123072982氧化脯氨酸 5-oxoproline7437630835860445226190973665412552905047073315342440548514645882789965L-丙氨酸 L-alanine16423186110189452512842544612577612112655886210003174615201105668308639精氨酸 Arginine44762529444181592540980012137892564732518722235175967216489709553610051谷氨酸 Glutamate3272976283012622432836047012126010032096850572759895188507790725683825L-谷氨酰胺 L-glutamine26029532325911511220985563114250426810831519817253497911708116766419273L-亮氨酸 L-leucine234728381177421907157783211159332913126837432129003211230090578191469614L-赖氨酸 L-lysine468992631494088868640940646510419507218624335282598613364032725201741851L-蛋氨酸 L-methionine90535402.19631712010462275314154665335645843917709998853787780394010L-正亮氨酸 L-norleucine2309237572523967082280013111054057722089111418990032113628604884034138L-鸟氨酸 L-ornithine340692298379642533308563282290592347269157758301986153203001465151745086L-苯丙氨酸 L-phenylalanine1554196851945558461563099881879375621412498551087443219909736651916691L-脯氨酸 L-proline1646692401453955351325822891133260161117601411096962419728329676087975L-苏氨酸 L-threonine25414191830778170625858623814576077512037268722050942320842544658853490L-酪氨酸 L-tyrosine255749806281352969288759978141045156156114913284726332183604701108758249L-缬氨酸 L-valine23943957021831051320311084926489544514802343420046610516255090973849084腐胺 Putrescine310888022301741851307741298325237566242331906230324806170375072129582680丝氨酸 Serine55427510655875824951721666259209590438391581464553992448720588144225313延胡索酸 Fumaric acid2120181091207479562273713481821641391337714211564522417247609343218837阿拉伯糖 Arabinose117314790170166455116199368108992111989902111089451118959690075589669纤维二糖 Cellobiose2153271436 1620467862 1610952168 14769012113808637091469312246 1143045989234728381吡喃葡萄糖 Glucopyranose11983580912367696710636358812418840047631760980032112870305110092631酮戊二酸 2-oxoglutarate1704539393 1689001111 1404371167 1392616713 100660969087833633554981278490535402吡喃甘露糖 Mannopyranose2218096171760879751655533411366709111006567911510036389151667620923757甘露糖 Mannose246671903191096286195013207178055469880410821878816426595342255419685果糖 Fructose1873370159 1775424857 1700921111 1679002111 1110891132 1563200111604040428164669240半乳糖二酸 Galactaric acid1724263881690021111337969231209901341026513241334545928219406654141918半乳糖醇 Galactitol7639043654925393516612284893211142442515489002133327143625574980呋喃半乳糖 Galactofuranose27222020220249773019800156117446354510893321117365210111177372289439570第 4 期张杏丽等:环境浓度微塑料增强 TDCIPP 肝脏毒性及其分子响应机制393 续表1代谢物Metabolites空白对照ControlPAT0.4T2T10PA-T0.4PA-T2PA-T10半乳糖 Galactose70090112167526102258514645843746464123687767657225505511731479069631951山梨醇 Sorbitol2629556412969164262209811322099121111385245792490132116646322533572159葡萄糖酸 Gluconic acid3963058543175542024