肌管蛋白MTM1抑制肝癌细胞迁移及侵袭的作用研究.pdf

现代肿瘤医学2 0 2 3年11月第31卷第2 2 期mun,2020,11(1):5424.12 YANG WS,SRIRAMARATNAM R,STOCKWELL BR,et al.Reg-ulation of ferroptotic cancer cell death by GPX4 J.Cell,2014,156(1-2):317-331.13 程峰,张庸,王祥,等.谷胱甘肽过氧化物酶GPX4 在铁死亡中的作用与机制研究进展J.现代肿瘤医学,2 0 2 1,2 9（7)：1254 1258.CHENG F,ZHANG Y,WANG X,et al.Research progress on therole and mechanism of CPX4 in ferroptosis J.Modern Oncology,2021,29(7):1254-1258.14 ZHANG X,SUI S,ZHENG X,et al.Inhibition of tumor propellantglutathione peroxidase 4 induces ferroptosis in cancer cells andenhances anticancer effect of cisplatin J.J Cell Physiol,2020,235(4):3425 3437.15 KONOWAKI Y,KURATA M,YAMAMOTO K,et al.Glutathioneperoxidase 4 overexpression inhibits ROS-induced cell death inMODERN ONCOLOGY,Nov.2023,VOL.31,No.2216LI S,HE Y,LI Q,et al.RSL3 drives ferroptosis through NF-kBpathway activation and GPX4 depletion in glioblastoma J.OxidMed Cell Longev,2021,2021:2915019.17ZHANG X,MA Y,LV G,et al.Glutathione peroxidase 4 as a ther-apeutic target for anti-colorectal cancer drug-tolerant persistercells J.Front Oncol,2022,12:913669.18 蓝炜强，陈光文，杨依昂，等.结肠癌中铁死亡相关蛋白CPX4的表达及其与预后的相关性J.临床与实验病理学杂志，2022,38(9):1035 1041,LAN WQ,CHEN GW,YANG YA,et al.Expression of ferroptosis-related protein GPX4 and its correlation with prognosis in coloncancer J.Chinese Journal of Clinical and Experimental Patholo-gy,2022,38(9):1035-1041.(编校：谈静）.4109.diffuse large B-cell lymphoma J.Lab Invest,2018,98(5):609-619.肌管蛋白 MTM1 抑制肝癌细胞迁移及侵袭的作用研究寇雪英,张格,周晓榕，熊兰,刘国晨,刘丹,吕卓敏31空军军医大学第二附属医院疼痛科；血液科；烧伤整形科，陕西西安7 10 0 38【摘要】目的：探讨肌管蛋白MTM1（my o t u b u l a r i n 1)在调控肝癌转移中的作用。方法：分别用生物信息学方法与免疫组化染色实验,对肝癌中MTM1的表达及临床意义进行分析。上调肝癌细胞中MTM1表达后，用细胞划痕与 Transwell迁移实验检测对细胞迁移运动能力的影响。上调肝癌细胞中 MTM1表达后,用 Tr-answell侵实验检测对细胞侵袭能力的影响。上调肝癌细胞中MTM1表达后，用实时荧光定量PCR与Westermblot实验检测对细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）标志分子表达的影响，从而分析MTM1在肝癌细胞上皮间质转化中的调控作用。上调肝癌细胞中MTM1表达后,用裸鼠肺转移实验分析对肝癌细胞体内转移能力的影响。结果：生物信息分析与免疫组化实验证实,MTM1在肝癌组织中的表达显著低于正常肝组织,且MTM1在转移性肝癌组织中的表达显著低于原发性肝癌组织。利用公共数据对预后进行分析后发现，与MTM1高表达患者相比,MTM1 低表达肝癌患者预后更差。细胞划痕与Transwell迁移实验均证实，上调MTM1表达显著抑制了肝癌细胞的迁移运动能力。Transwell侵袭实验发现,上调MTM1表达显著降低了肝癌细胞的侵袭能力。上调肝癌细胞中MTM1表达后，上皮细胞标志蛋白E-cadherin与ZO-1表达显著上调，而间质细胞标志蛋白N-cadherin与Vimentin表达显著下调,表明上调MTM1表达具有逆转肝癌细胞上皮间质转化的作用。上调MTM1显著抑制裸鼠体内肝癌细胞的转移能力。结论：MTM1表达下调可能通过诱导上皮间质转化促进肝癌细胞的迁移与侵袭。【关键词】MTM1；迁移；侵袭；上皮间质转化；肝癌【中图分类号】R735.7【文章编号】16 7 2-4992-(2 0 2 3)2 2 -410 9-0 6The role of myotubularin 1 in the migration and invasion of liver cancer cellsKOU Xueying,ZHANG Ge,ZHOU Xiaorong,XIONG Lan,LIU Guochen,LIU Dan,LYU ZhuominDepartment of Pain Treatment;Department of Hematology;Department of Burn and Plastic Surgery,the Second Afiliated Hospital,Air-force Military Medical University,Shaanxi Xian 710038,China.Abstract Objective:To explore the expression and biological functions of MTM1(myotubularin 1)in the【收稿日期】2023.03 02【基金项目】国家自然科学基金面上项目（编号：8 2 17 2 92 2）【作者简介】寇雪英（198 8），女，陕西商洛人，护师，主要从事肝癌发病分子机理研究。E-mail：4114152 0 1 q q.c o m【通信作者】吕卓敏（197 8 一），女，陕西西安人，副主任医师，博士，主要从事烧伤整形方面的工作。Em a i l：z h u o m i n l v h o t m a i l.c o m【文献标识码】A【修回日期】2 0 2 3-0 7-0 2D0I:10.3969/j.issn.1672-4992.2023.22.003:4110:promotion of liver cancer metastasis.Methods:Bioinformatic analysis and immunohistochemistry staining assay wereapplied to determine the expression and prognostic significance of MTM1 in liver cancer.The effect of forced MTM1expression on migration of liver cancer cells was determined by wound healing and Transwell migration assays.Theeffect of forced MTM1 expression on invasion of liver cancer cells was determined by Transwell invasion assay.Theeffect of forced MTM1 expression on the expressions of epithelial-mesenchymal transition(EMT)markers was deter-mined by real-time-PCR and Western blot analysis.The effect of forced MTM1 expression on the in vivo metastasisof liver cancer cells was determined by nude mice lung metastasis model.Results:Bioinformatic analysis and immuno-histochemistry staining assay revealed that MTM1 expression was markedly decreased in tumor tssues of liver com-pared non-tumor tissues,especially in metastatic tumor tissues.In addition,patients with low MTM1 expression hadsignificant poorer survival than patients with high MTM1 expression.The migration ability of liver cancer cells was sig-nificantly suppressed when MTM1 was overexpressed.The invasion ability of liver cancer cells was significantly de-creased when MTM1 was overexpressed.The progress of EMT was inhibited by MTM1 overexpression,as evidenced byincreased expressions of epithelial marker(E-cadherin and ZO-1)and decreased expressions of mesenchymalmarker(N-cadherin and Vimentin).Forced MTM1 expression significantly impaired the in vivo metastasis of livercancer cells.Conclusion:MTM1 downregulation promotes the progression of EMT and thus migration and invasion inliver cancer cells.Key words MTM1,migration,invasion,EMT,liver cancer内质网与线粒体是真核细胞内调控蛋白质合成与转运、钙信号稳态与代谢等生物学过程的重要细胞器1-2 。越来越多的研究表明，内质网及线粒体功能紊乱与多种慢性疾病的发生密切相关,如神经退行性疾病、糖尿病与肿瘤等3-4 近年来，随着细胞亚显微结构研究的深入，内质网与线粒体间的相互作用被逐步揭示，二者间互作在调控线粒体多方面的功能中发挥重要作用3.5-6 ,包括线粒体分裂融合、生物发生与代谢等7 。二者互作异常已被证实与包括神经退行性疾病与肿瘤在内多种疾病的发生相关8-1肌管蛋白 MTM1（m y o t u b u la r in 1）是一种酪氨酸和丝氨酸双特异性磷酸酶,在肌肉分化中发挥重要作用,其基因突变已被证实与一种罕见的遗传性肌疾病（X一连锁中央核肌病)发生密切相关12-131。近期有研究发现,MTM1通过调控内质网与线粒体相互作用而调控细胞的脂肪酸氧化4,，表明MTM1 在细胞代谢中发挥重要的调控作用。然而,MTM1在肿瘤中表达、临床意义及生物学作用均尚不清楚。本研究将分别用生物信息学分析与免疫组化、体外肿瘤转移相关实验，分析肝癌中MTM1的表达是否发生异常改变,并同时探讨MTM1表达异常在肝癌转移中的调控作用。1材料和方法1.1实验材料肝癌细胞SNU-739购自中科院上海细胞库,细胞常规保存于液氮罐内，复苏后用含10%血清的DMEM培养液培养,细胞培养箱内环境温度为37,CO,浓度为5%。细胞总RNA提取与反转录试剂盒均购自takara生物公司,实时荧光定量PCR反应酶购自Thermal生物公司。Tran-swell 小室购自Corning生物公司,所有一抗和二抗均购自武汉三鹰生物公司，免疫组化试剂盒购自福州迈新生物公司。1.2实验方法1.2.1生物信息分析肝癌中 MTM1 的表达与临床意义MTM1表达分析采用在线UALCAN分析工具（http:/ualcan.path.uab.edu/index.html)15,MTM1 表达与患者预后相关性分析采用在线KMplotter分析工具（http:/ 对非配对肝癌原发灶与转移灶组织样本,所有临床标本均来自2 0 12 年至2 0 19 年间在我院普通外科进行肝癌根治性手术切除的患者,患者均在术前签署了知情同意书并在术后被病理科确诊为肝细胞肝癌。将收集到的组织标本保存于液氮中,取出后用福尔马林固定2 4h,随后用石蜡包埋并切片。将切片在实验前需置于65温箱内加热30 min使组织与玻片贴合牢固，随后将切片依次浸没于三个二甲苯、无水乙醇、8 5%乙醇、7 0%乙醇与PBS溶液中,用3%浓度的H,0,浸泡去除组织中内源性过氧化物酶后用柠檬酸溶液加热修复损伤抗原,BSA封闭非特异性抗原后滴加MTM1抗体并在4冰箱内反应10 h，加入PBS并在摇床上清洗3次，依次加人组化试剂盒中的二抗、三抗。最后,加人DAB与苏木精染色，切片经脱水与透明后封片，通风橱中晾干后在显微镜下对组织细胞中MTM1染色强度进行观察。1.2.3转染MTM1真核表达载体上调肝癌细胞中MTM1表达将对数生长的肝癌SNU-739细胞用胰蛋白酶消化、加人PBS重悬后接种至6 孔板内，待细胞贴壁后即可进行真核表达载体转染，操作步骤为：首先，分别用无血清DMEM培养液稀释lipofectamine3000与MTM1真核表达载体，随后将二者混合并加人细胞培养板中,于培养箱中培养2 4h即可进行后续实验。1.2.4实时荧光定量PCR实验首先,按RNA提取试剂盒说明书中步骤，提取不同MTM1表达组细胞中的总RNA,随后用反转录试剂盒将所提RNA反转录合成cDNA。最后，以cDNA为模板通过实时荧光定量PCR检测目的基因的表达。PCR扩增引物序列分别为:MTM1:F-5-GTTTGAGATCCTCACGAGATA-3;R-5-GTCCATCCATCCACGTTAAAC-3E-cadherin:F-5-ATTTTTCCCTCGACACCCGAT-3;R-5-TCCCAGGCGTAGACCAAGA-3 N-cadherin:F-5-AGCTCCATTCCGACTTAGACA-3;R-5-CAGCCTGAGCACGAAGAGTG-3。ZO -肌管蛋白MTM1抑制肝癌细胞迁移及侵袭的作用研究Modern Oncology 2023,31(22):4109-4114现代肿瘤医学2 0 2 3年11月第31卷第2 2 期1:F-5-CGACCAGATCCTCAGGGTAA-3;R-5-TCCATAGGGAGATTCCTTCTCA-3。V im e n t in:F-5-G A C G C C A T C AACACCGAGTT-3;R-5-CTTTGTCGTTGGTTAGCTGGT-3。内参-actin:F-5-TCGCCTTTGCCGATCCG-3;R-5-ATGATCTGGGTCATCTTCTCG-3最后，用2-AC公式计算目的基因在不同组细胞中的相对表达水平。1.2.5Western blot 实验弃去肝癌细胞培养上清，加入RIPA裂解液在冰上裂解40min,用移液器反复吹打并将裂解液转移至1.5mL的离心管内，用离心机在4条件下离心2 0 min，小心收集上清中的蛋白后加人含SDS的上样缓冲液，混匀后置于沸水中煮5min,冷却后上样并在聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳分离,将凝胶中的蛋白转印至PVDF膜,5%脱脂牛奶封闭1h后加入一抗、二抗孵育,最后加入发光液对各组细胞内目的蛋白的相对表达（特异性条带灰度强度）进行分析。1.2.6划痕实验将不同MTM1表达组肝癌细胞用胰蛋白酶消化并加入PBS溶液重悬,将310 个细胞接种至6 孔板内,次日待细胞贴壁并生长至培养板底面8 0%90%时，用枪头进行划线，随后在显微镜下对各组细胞的划痕进行拍照，将6 孔板细胞置于培养箱中继续培养48 h后取出，显微镜下再次对划痕进行拍照。最后，比较不同MTM1表达组肝癌细胞划痕愈合的百分比。1.2.7Transwell 小室检测细胞迁移与侵袭将不同MTM1表达组肝癌细胞用胰蛋白酶消化，并加入PBS溶液重悬,分别用不含基质胶与含基质胶的 Transwell 小室检测细胞的迁移与侵袭能力。将0.2 mL合计310*个A3721-1-2-3-Normal(n=165)A:MTM1 在正常肝组织与肝癌组织中的表达分析（*P0.05);B:MTM1表达与肝癌患者总体生存的关系;C:MTM1表达与肝癌患者无疾病进展生存的关系。Fig.1 Bioinformatics analysis of the expression and prognostic significance of MTM1 in liver cancerA:MTM1 expression in normal liver tissues and primary liver cancer tissues(*P0.05).B:The prognostic significance of MTM1 expression for over-all survival of patients with liver cancer.C:The prognostic significance of MTM1 expression for disease free survival of patients with liver cancer.复发转移是影响肿瘤患者预后的最主要因素,为进一步分析MTM1是否与肝癌转移相关,我们又用免疫组化检测了36对原发灶与转移灶肝癌组织中MTM1的表达,结果如图2所示：与原发灶相比,MTM1在转移灶中的表达水平显著下调(primary vs metastasis=7.50 0.43 vs 4.57 0.25,P0.05)。2.2上调MTM1表达抑制了肝癌细胞的迁移MODERN ONCOLOGY,Nov.2023,VOL.31,No.22细胞加人Transwell小室，小室下部加人0.5mL的DMEM培养液,其中上室培养液中不含血清，而下室培养液中含10%的血清。分别培养2 4 h(检测迁移)或48 h(检测侵袭)后将小室取出，用棉签擦去上室内未发生穿膜的细胞，穿过小室膜的细胞用4%多聚甲醛固定2 0 min,结晶紫染色2 0 min,PBS清洗后即可在显微镜下对各组发生迁移与侵袭的细胞进行计数与拍照。1.2.8裸鼠肺转移实验将12 只4周龄的雄性BALB/c裸鼠随机分为两组,其中一组经尾静脉注射对照SNU-739细胞，另一组经尾静脉注射MTM1稳定过表达SNU-739细胞，每只动物注射细胞量为510 个，14天后处死动物并取出肺组织，组织固定、包埋切片后进行HE染色并在显微镜下对转移灶数目进行统计。1.3统计学分析所有实验均进行3次独立重复，实验结果分析采用SPSS17.0统计软件,数据用均数标准误表示，不同分组间的差异比较用t检验，当P0.05时认为组间差异具有统计学意义。2结果2.1MTM1 在肝癌组织中的表达显著下调首先,用UALCAN分析网站,对MTM1在正常肝与肝癌组织中的蛋白表达进行分析,结果如图1A所示：MTM1在肝癌组织中的蛋白表达水平显著低于正常肝组织。进一步,用在线KM plotter预后分析工具对MTM1表达下调在肝癌中的潜在临床意义进行分析,结果如图1B与1C 所示：与 MTM1高表达肝癌患者相比，MTM1低表达肝癌患者具有更差的总体生存与无疾病进展生存。B1.0C*HR=0.58(0.410.82)logrankP=0.00170.80.60.40.2ExpressionLowPrimarytumor0High(n=165)020406080100120Time(months)图1生物信息学分析MTM1在肝癌组织中的表达与临床意义过表达MTM1后,分别用体外划痕、Transwell迁移与侵袭实验,检测了对肝癌细胞迁移与侵袭能力的影响。首先,实时荧光定量PCR与Westernblot实验结果表明（图3）：与对照组（EV)相比,转染MTM1真核表达载体2 4h后,肝癌SNU-739细胞中MTM1的表达在mRNA（图3A）与蛋白（图3B）水平均显著上调(EV vs MTM1-OE=1.000.49vs2.32.4111:1.0HR=0.69(0.510.93)logrankP=0.0140.80.6-+0.2-ExpressionLow0High0204060800100120Time(months)为探讨MTM1 在肝癌转移中的作用,我们在肝癌细胞内+:4112:0.99,P0.05），表明所构建MTM1表达上调肝癌细胞模型可用于后续功能研究。分别用划痕实验与Transwell 迁移实验,分析MTM1在肝癌细胞迁移中的调控作用。划痕实验结果表明（图4）：与对照组（EV）相比,MTM1表达上调组（MTM1-OE）细胞划痕的相对愈合程度明显较低EVvsMTM1-OE=（32.330.198)%vs(13.330.8)%,P0.05,表明上调MTM1表Metastasis寇雪英，等达抑制了肝癌 SNU-739细胞的迁移运动能力。Transwell 迁移实验得到了与划痕实验相似的结果,如图5所示：与对照组（EV）相比,MTM1表达上调组（MTM1-OE)肝癌细胞由小室上侧迁移至下侧的细胞数显著变少(EVvs MTM1-0E=38.00 2.65 vs 19.33 1.76,P 0.05),表明上调MTM1抑制了肝癌SNU-739细胞的迁移。Primary15肌管蛋白MTM1抑制肝癌细胞迁移及侵袭的作用研究*IWLWJO10-5-0PrimaryMetastasis图2 免疫组化检测36 对肝癌原发与转移灶中MTM1的表达（原图40 0;局部放大图10 0 0)（*P0.05）Fig.2 Immunohistochemistry analysis for MTM1 expression in primary and metastatic tumor tissues of liver cancer(primary ABC x400,partial enlarge-ment ABC 1 000)(*P0.05)AB3-21图3荧光定量PCR(A)与Westernblot(B）实验检测MTM过表达效率(*P0.05)Fig.3 Real-time PCR(A)and Western blot(B)analysis for the effi-ciency of MTM1 overexpression in SNU-739 cells(*P0.05)2.3上调MTM1表达抑制了肝癌细胞的侵袭随后,用Transwell侵袭实验检测了上调MTM1表达对肝癌SNU7 39细胞侵袭的影响，结果如图6 所示：与对照组(EV)相比,MTM1表达上调组（MTM1-OE）肝癌细胞由基质胶上侧侵袭至下侧的数目显著变少（EVvsMTMI-OE=59.672.60vs27.001.73,P0.05）,表明下调MTM1同样抑制了肝癌细胞的侵袭能力。2.4上调MTM1表达可抑制肝癌细胞的上皮间质转化上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是肿瘤细胞获得迁移与侵袭能力的主要机制之一，为初步探MTM1-OE讨MTM1是否通过影响上皮间质转化调控肝癌细胞转移，我们分别用实时荧光定量PCR与Westernblot实验，检测了上MTMI调MTM1对上皮间质转化标志蛋白表达的影响，结果如图7-actin所示：与对照组（EV）相比，MTM1表达上调组（MTM1-OE）肝癌细胞中上皮细胞标志蛋白E-cadherin（EV v s M T M 1-0E=1.00 0.03 vs 2.07 0.12,P 0.05)与 Z0-1(EV vsMTMI-OEMTM1-0E=1.000.05vs1.480.04,P0.05)的表达显著上调,而间质细胞标志蛋白N-cadherin（EV v s M T M l-0E=1.00 0.05 vs 0.55 0.03,P0.05)与 Vimentin(EVvs MTM1-0E=1.00 0.05 vs 0.21 0.01,P0.05)的表达显著下调,表明上调MTM1可能通过抑制上皮间质转化而抑制肝癌细胞的迁移与侵袭。2.5上调 MTM1显著抑制裸鼠体内肝癌细胞的转移能力用裸鼠体内肺转移实验对MTM1功能进行验证,结果发现（图8）：与体外细胞结果一致,与注射对照组SNU-739细胞的裸鼠相比,注射MTM1过表达 SNU-739细胞的裸鼠肺内发生转移的比例与转移灶数目均显著减少，进一步表明MTM1 具有抑制肝癌细胞转移的能力。EVMTMI-OE40*(%)ainsoropunom0h30-20-10-48h0图4划痕实验检测上调MTM1对肝癌SNU-739 细胞迁移的影响（*P0.05)Fig.4 Scratch wound healing assay for the effect of MTM1 overexpression on the migration of SNU-739 cells(*P0.05)现代肿瘤医学2 0 2 3年11月第31卷第2 2 期EVMODERN ONCOLOGY,Nov.2023,VOL.31,No.22MTM1-OE:4113:60-40-20MTM1-OE图5Transwell 迁移实验检测上调MTM1对肝癌SNU-739细胞迁移的影响（结晶紫染色40 0)（*P0.05）Fig.5 Transwell migration assay for the effect of MTMI overexpression on the migration of SNU-739 cells(Crystal violet staining 400)(*P0.05)604080-EVMTM1-OE20图6 Transwell 侵袭实验检测上调MTM1对肝癌SNU-739细胞侵袭的影响（结晶紫染色40 0)（*P0.05）Fig.6 Transwell invasion assay for the effect of MTM1 overexpression on the invasion of SNU-739 cells(Crystal violet staining 400)(*P0.05)AE-cadherinB口EVMTMI-OE32E-cadherinZo-1N-cadherinT-OZVimentinVimentin-actin图7 荧光定量PCR(A)与Westernblot(B)实验检测上调MTMl对肝癌SNU-739细胞中上皮间质转化标志蛋白表达的影响（*P0.05)Fig.7 Real-time PCR(A)and Western blot(B)analysis for the effect of MTM1 overexpression on the expressions of EMT markers(*P0.05)EVMTM1-OE20EV图8 裸鼠体内肺转移实验检测上调MTM1对肝癌细胞体内转移能力的影响(HE染色,原图40 0;局部放大图10 0 0)（*P0.05)Fig.8 In vivo lung metastasis study for the effect of MTM1 overexpression on metastasis of HCC cells(HE staining,primary 400,partial enlargement x1.000)(*P0.05)3讨论内质网与线粒体均是细胞内参与重要细胞生物学过程调控的细胞器17 。研究表明,内质网膜与线粒体膜可通过形成物理连接，进而调控二者的生物学功能18-2 0 1。内质网MTM1-OE膜与线粒体膜之间的物理连接主要由多个定位于内质网与线粒体膜上蛋白质的相互作用所介导5.2 1。以往研究表明，内质网与线粒体物理连接结构及功能异常与多种神经退行性疾病密切相关，包括帕金森氏病、阿尔兹海默症与亨廷顿:4114:病等2 0,2-3。肌管蛋白 MTM1(myotubularin 1)是一种酪氢酸和丝氨酸双特异性磷酸酶,在肌肉分化中发挥重要作用。近期有研究发现,MTM1通过调控内质网与线粒体相互作用而调控细胞的脂肪酸氧化14,表明MTM1 在细胞代谢中发挥重要的调控作用，但其在肿瘤中的作用尚不十分清楚。本研究首次在肝癌中发现,肝癌组织中MTM1表达显著低于正常肝组织,且MTM1在转移性肝癌组织中的表达同样显著低于原发灶肝癌组织，提示MTM1可能发挥抑制肝癌转移的作用。对MTM1表达的临床意义分析发现,MTM1表达下调与肝癌患者较差的总体生存与无疾病进展生存均显著相关，提示MTM1是潜在的肝癌预后判定标志物。复发转移是恶性肿瘤致死的最主要原因2 4,MTM1 表达的异常上调及其与患者不良预后的关系均强烈提示,MTM1可能参与肝癌转移的调控。据此，我们进一步分别用体外细胞划痕、Transwell迁移与侵袭实验，检测了MTM1在调控肝癌体外转移中的作用。结果发现，上调MTM1显著抑制了肝癌细胞的迁移与侵袭能力。上皮间质转化是肿瘤细胞获得迁移侵袭能力的主要机制之一2 5-2 6 ,为初步探讨上皮间质转化在MTM1 调控的肝癌转移中的作用,我们检测了上调MTM1对肝癌细胞上皮间质标志蛋白表达的影响,结果发现上调MTM1表达显著抑制了肝癌细胞的上皮间质转化,提示MTM1表达下调可能通过诱导肝癌细胞发生上皮间质转化而促进肝癌的转移。本研究首次发现,肌管蛋白MTM1在肝癌中表达显著下调并与患者不良预后显著相关,MTM1 表达下调促进了肝癌细胞的迁移与侵袭,提示 MTM1 是肝癌中潜在的抑癌基因，有望成为肝癌预后判定与治疗的分子靶标。1 SMITH M,WILKINSON S.ER homeostasis and autophagy J.Es-says in Biochemistry,2017,61(6):625-635.2CHAN DC.Mitochondrial dynamics and its involvement in diseaseJ.Annual Review of Pathology,2020,15(2):235-259.3LONKE J,KAASIK A,BEZPROZVANNY I,et al.Balancing ER-mitochondrial Ca(2+)fluxes in health and disease J.Trends inCell Biology,2021,31(7):598-612.4SORRENTINO V,MENZIES KJ,AUWERX J.Repairing mitochon-drial dysfunction in disease J.Annual review of Pharmacologyand Toxicology,2018,58(4):353-389.5 CSORDAS G,WEAVER D,HAJNOCZKY G.Endoplasmic reticu-lum-mitochondrial contactology:Structure and signaling functionsJ.Trends in Cell Biology,2018,28(7):523-540.6 BULOW MH,SELLIN J.New discoveries in ER-mitochondriacommunication J.Biochemical Society Transactions,2023,51(2):571-577.7 SASSANO ML,FELIPE-ABRIO B,AGOSTINIS P.ER-mito-chondria contact sites;a multifaceted factory for Ca(2+)signa-ling and lipid transport J.Frontiers in Cell and DevelopmentalBiology,2022,10(5):22-34.8WU H,CHEN W,CHEN Z,et al.Novel tumor therapy strategiestargeting endoplasmic reticulum-mitochondria signal pathwaysJ.Ageing Research Reviews,2023,13(6):10-19.9JJIANG RQ,LI QQ,SHENG R.Mitochondria associated ER mem-branes and cerebral ischemia:Molecular mechanisms and therapeu-tic strategies J.Pharmacological Research,2023,191(5):57-67.寇雪英，等10 HE Q,QU M,SHEN T,et al.Control of mitochondria-associatedendoplasmic reticulum membranes by protein S-palmitoylation:Novel therapeutic targets for neurodegenerative diseases J.Age-ing Research Reviews,2023,87(1):10-20.11 DENTONI G,CASTRO-ALDRETE L,NAIA L,et al.The poten-tial of small molecules to modulate the mitochondria-endoplasmicreticulum interplay in alzheimers disease J.Frontiers in Celland Developmental Biology,2022,10(8):20-28.12WANG N,WANG C,ZHAO H,et al.The MAMs structure and itsrole in cell death J.Cells,2021,10(3):22-30.13 BARRETO-MOTA R,FIGUEIRINHA J,QUENTAL R,et al.X-linked myotubular myopathy:a clinical report and a re