海洋放线菌Actinoplanes sp.M4I6化学成分研究.pdf

热带海洋学报 JOURNAL OF TROPICAL OCEANOGRAPHY 2023 年 第 42 卷 第 5 期:3844 doi:10.11978/2022225 http:/ 海洋放线菌 Actinoplanes sp.M4I6 化学成分研究 王子鹏1,李芬发2,谢晴宜2,马青云2,杨理2,戴好富2,罗都强1,赵友兴2 1.河北大学生命科学学院,河北省微生物多样性研究与应用重点实验室,河北 保定 071002;2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所海口市热带天然产物研究与利用重点实验室,海南热带农业资源研究院海南省热带农业生物资源保护与利用重点实验室,海南 海口 571101 摘要:对海洋放线菌 Actinoplanes sp.M4I6 的次生代谢产物进行分离鉴定,并评价了其生物活性。采用正相硅胶柱色谱、反相 C18柱色谱、Sephadex LH-20 凝胶柱色谱和高效液相色谱等技术进行分离纯化,运用核磁共振波谱技术对分离所得化合物进行结构鉴定。对分离得到化合物进行了抗枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ATCC 6633)和抑制乙酰胆碱酯酶活性评价。共分离得到 9 个化合物,经鉴定为(E)-prop-1-enyl-2-hydroxypropanoate(1)、cyclo-(R-Pro-R-Phe)(2)、cyclo-(L-Val-L-Leu)(3)、cyclo-(L-Phe-L-Val)(4)、cyclo-(L-Leu-L-Phe)(5)、lumichrome(6)、2-(4-hydroxyphenyl)ethylacetate(7)、4-hydroxysattabacin(8)、3-hydroxybutan-2-yl 2-phenylacetate(9),其中化合物 1 为新天然产物。化合物 5、6、8、9 对 Bacillus subtilis ATCC 6633有一定的抑制活性,化合物 4、6 对乙酰胆碱酯酶有较弱的抑制活性。关键词:海洋放线菌;游动放线菌属;化学成分;乙酰胆碱酯酶抑制活性;抗枯草芽孢杆菌活性 中图分类号:P734.5 文献标识码:A 文章编号:1009-5470(2023)05-0038-07 Study on the chemical constituents from the marine-derived actinomycete Actinoplanes sp.M4I6 WANG Zipeng1,LI Fenfa2,XIE Qingyi2,MA Qingyun2,YANG Li2,DAI Haofu2,LUO Duqiang1,ZHAO Youxing2 1.College of Life Science,Key Laboratory of Microbial Diversity Research and Application of Hebei Province,Hebei University,Baoding 071002,China;2.Haikou Key Laboratory for Research and Utilization of Tropical Natural Products,Institute of Tropical Bioscience and Biotechnology,Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences,Hainan Key Laboratory for Protection and Utilization of Tropical Bioresources,Hainan Academy of Tropical Agricultural Resource,Haikou 571101,China Abstract:The secondary metabolites of marine actinomycete Actinoplanes sp.M4I6 were isolated and identified,moreover their biological activities were evaluated.The compounds were separated and purified by Silica gel,C18,Sephadex LH-20 column chromatography and high performance liquid chromatography(HPLC),and their structures were identified by NMR spectroscopic method.These compounds were evaluated for anti-Bacillus subtilis(ATCC 6633)and inhibition of acetylcholinesterase activity.Nine compounds were separated and identified as(E)-prop-1-enyl-2-hydroxypropanoate(1),cyclo-(R-Pro-R-Phe)(2),cyclo-(L-Val-L-Leu)(3),cyclo-(L-Phe-L-Val)(4),cyclo-(L-Leu-L-Phe)(5),lumichrome(6),2-(4-hydroxyphenyl)ethylacetate(7),4-hydroxysattabacin(8),3-hydroxybutan-2-yl 2-phenylacetate(9),compound 1 is a new natural product.Compounds 5,6,8 and 9 收稿日期：2022-10-23;修订日期：2022-12-01。殷波编辑 基金项目：海南省自然科学基金项目(821RC643);财政部和农业农村部国家现代农业产业技术体系专项(CARS-21);农业农村部财政专项(NFZX2021)作者简介：王子鹏(1997),男,河北省保定市人,硕士研究生,研究方向为海洋天然产物。email: 通信作者：罗都强。email:;赵友兴。email: Received date:2022-10-23;Revised date:2022-12-01.Editor:YIN Bo Foundation item:Natural Science Foundation of Hainan Province(821RC643);Special Project of the Ministry of Finance and the Ministry of Agriculture and Rural Affairs on the National Modern Agricultural Industrial Technology System(CARS-21);Special Finance Project of Ministry of Agriculture and Rural Affairs(NFZX2021)Corresponding author:LUO Duqiang.email:;ZHAO Youxing.email: 王子鹏等:海洋放线菌 Actinoplanes sp.M4I6 化学成分研究 39 1 showed certain inhibitory activities against Bacillus subtilis(ATCC 6633).Compounds 4 and 6 showed weak inhibitory activities against acetylcholinesterase.Key words:marine-derived actinomycetes;Actinoplanes sp.;chemical composition;acetylcholinesterase inhibitory activity;Anti-Bacillus subtilis activity 海洋具有高盐度、高压、低光照或无光照、异乎寻常的高温或者低温等特殊环境,生物资源极其丰富,多样性显著(Newman et al,2007),海洋微生物代谢途径独特,可产生结构新颖的活性分子(Goodfellow et al,2013)。海洋放线菌是海洋微生物的重要组成部分,其次级代谢产物的结构多样,活性独特,是海洋微生物新颖活性天然产物的主要来源之一(李越中 等,2000),可为药物创制提供先导化合物(吕佩帅 等,2021)。2020年,从海洋来源稀有放线菌小单孢菌的发酵液中分离得到抗真菌新药 Turbinmicin,缓解了全球多重耐药病原体威胁的局面(Zhang et al,2020)。游动属(Actinoplanes)是稀有小单孢菌科的第二大属,在 1950年由 Couch首次提出(Couch,1950)。治疗型糖尿病的药物阿卡波糖,最早就是由游动放线菌Actinoplanes sp.SE50/110 的代谢产物中分离得到的寡糖改造而成(Schaffert et al,2019)。目前从该属放线菌分离出代谢产物的类型有肽类、大环内酯、氨基糖苷类、萘醌类等,具有抗菌、抗肿瘤、抗病毒、抗寄生虫等活性(李群 等,1976;Chu et al,1997;Singh et al,2002;Zhang et al,2009;Xiang et al,2010;Schaffert et al,2019;Baglioni et al,2022)。本实验室主要从海洋微生物挖掘活性天然产物,前期已从海洋放线菌Streptomyces sp.KFD18(Zhou et al,2019)和海洋真菌Penicillium sp.KFD28(Kong et al,2019)中发现一些具有抗肿瘤和抗糖尿病的活性分子。本研究从海洋游动属放线菌 M4I6 的代谢产物中分离鉴定了 9 个化合物,并对其测定了抗枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ATCC 6633)活性和抑制乙酰胆碱酯酶活性,为该放线菌药用价值的挖掘提供基础。1 试验部分 1.1 仪器与材料 Bruker AV-500 型超导核磁共振波谱仪,TMS(Tetramethylsilane,四甲基硅烷)为内标和 Autospec-3000 质谱仪(美国 Bruke 公司);SUMMIT p680A 戴安半制备型高效液相色谱仪(美国 DIONEX 公司);安捷伦高效液相色谱仪(美国 Agilent Technologies);Waters C18半制备柱(10mm250mm,5m)(日本 Nacalai Tesque公司);反相材料 C-18(FU-JI公司);Sephadex LH-20凝胶(GE 公司);薄层层析硅胶板;200300 目柱层析硅胶(青岛海洋化工厂);乙酰胆碱酯酶(北京 Solarbio 公司);碘化硫代乙酰胆碱、氨苄、二硫代硝基苯甲酸(DTNB)和他克林(Sigma 公司);ELX-800 酶标仪(美国宝特公司);WRX-4 熔点测定仪(上海易测仪器设备有限公司);JASCO P-1020旋光仪(日本 Jasco公司)。1.2 方法 1.2.1 菌种来源与发酵 海洋沉积物采集自希腊锡罗斯岛,从中分离得到放线菌菌株 M4I6,经 ITS 序列分析鉴定为游动属(Actinoplanes sp.)放线菌。将菌株接种于平板培养基ATCC172,在 28下培养 10d。挑取平板上孢子适量,接种到装有 200mL 液体 ATCC172 培养基的 500mL锥形瓶中,28,180rmin1培养 7d得到种子液。配制21L改良 ATCC172 培养基:可溶性淀粉 20.0g,葡萄糖10.0g,水解干酪素 5.0g,酵母膏 5.0g,细菌学蛋白胨 5.0g,KH2PO4 0.5g,CaCO3 0.1g,微 量 元 素 溶 液Na2B4O710H2O 1.0g,ZnCl22H2O 4.0g,FeC136H2O 20.0g,(NH4)6Mo7O244H2O 1.0g,CuCl22H2O 1.0g,MnC124H2O 1.0g,ddH2O 1L 1mL,pH 7.5,去离子水1L。分装于 500mL 三角瓶中,每瓶 200mL,经高压灭菌 锅 121灭 菌 25min。将 种 子 液 接 种 到 改 良ATCC172 培养基中,每瓶接种 20mL 种子液,28,180rmin1培养 7d。1.2.2 提取与分离 发酵结束后采用发酵液 2 倍体积的乙酸乙酯将其萃取 3 次后,使用旋转蒸发仪对所得到的浸提液进行减压浓缩得到浸膏 15.9g。粗浸膏经正相硅胶柱色谱(石油醚:乙酸乙酯)以10:1 1:2(v/v)的梯度进行洗脱,分段收集,并通过薄层层析和高效液相色谱仪进行检测,将相同的部分合并,得到 5 个组分(Fr.1 Fr.5)。Fr.2 经过反相 C18柱色谱甲醇:水,20%100%(v/v)梯度洗脱后,经过凝胶柱Sephadex LH-20(100%甲 醇)纯 化 得 到 化 合 物 1(1.0mg),经过凝胶柱 Sephadex LH-20(100%甲醇),结合 半 制 备HPLC(High Performance Liquid Chromatography,高效液相色谱仪)C18半制备柱,甲醇:水=40:60(v/v),流速 4mLmin1纯化得到化合物 2(1.6mg,tR=9.8min)、3(1.5mg,tR=15.6min)。Fr.3经过40 热 带 海 洋 学 报 Vol.42,No.5/Sep.,2023 1 反相 C18柱色谱(甲醇:水,20%100%(v/v)梯度洗脱后,采用正相硅胶柱色谱以石油醚:乙酸乙酯(8:1 5:1)梯度洗脱,结合半制备 HPLC C18半制备柱,甲醇:水=40:60(v/v),流速 4mLmin1纯化得到化合物 4(3.0mg,tR=19.5min)、6(1.4mg,tR=20.8min)。采用凝胶柱 Sephadex LH-20(氯仿:甲醇=1:1),结合半制备HPLC C18半制备柱,甲醇:水=30:70(v/v),流速4mLmin1纯化得到化合物 5(9.0mg,tR=13.0min)。Fr.4 经过反相 C18柱色谱甲醇:水,20%100%(v/v)梯度洗脱后,采用凝胶柱 Sephadex LH-20(氯仿:甲醇=1:1),结合半制备 HPLC C18半制备柱,甲醇:水=40:60(v/v),流速 4mLmin1纯化得到化合物 7(1.0mg,tR=16.2min)。采用正相硅胶柱色谱以石油醚:乙酸乙酯(6:1 3:1)梯度洗脱和凝胶柱 Sephadex LH-20(100%甲醇),结合半制备 HPLC C18半制备柱,甲醇:水=20:80(v/v),流速 4mLmin1纯化得到化合物 8(1.5mg,tR=14.0min)。采用凝胶柱 Sephadex LH-20(100%甲醇),结合半制备 HPLC C18半制备柱,甲醇:水=30:70(v/v),流速 4mLmin1纯化得到化合物 9(1.5mg,tR=14.1min)。1.2.3 生物活性测定 1)抑制乙酰胆碱酯酶活性 化合物均用 DMSO(dimethyl sulfoxide,二甲基亚砜)进行溶解,制成待测样品(4mmolL1)。取 675L配置好的 PBS(phosphate buffered saline,磷酸盐缓冲盐)(pH=8.0)溶液于离心管中,取待测化合物 45L 的该溶液加至离心管中,最后吸取 90L 乙酰胆碱酯酶溶液(0.2UmL1),摇匀,取 180L 混合均匀的待测溶液于 96 孔板中,做 4 组平行。阳性药为他克林,阴性与空白:取 675L 配好的 PBS 溶液于离心管中,再取45L的 DMSO 溶液加至离心管中,最后吸取 90L乙酰胆碱酯酶溶液,摇匀,取 180L 混合均匀的待测溶液于 96孔板中,做 4组平行。将 96 孔板于 37放置 15min 后,除空白组外各组 均 加 入20L 底 物 5mmolL1 AICI(Acetyl-thiocholine iodide,硫代乙酰胆碱)10L 1mmolL1 DTNB 5,5-Dithiobis-(2-nitrobenzoic acid),5,5-二硫代双(2-硝基苯甲酸)10L;空白组:加入 PBS 缓冲液10L+1mmolL1 DTNB 溶液 10L。将 96 孔板于37放置 30min,设置酶标仪于 412nm 波长下测量每孔的 OD值吸光度(张宇 等,2017;王昊 等,2020)。计算化合物对乙酰胆碱酯酶的抑制率采用公式(1):()()nncODOD100%ODOD(1)式中:ODn为阴性对照平均吸光值,OD 为待测样品平均吸光值,ODc为空白对照平均吸光值。2)抗枯草芽孢杆菌活性 化 合 物 均 用 甲 醇 进 行 溶 解,制 成 待 测 样 品(2.56mgmL1)。配制 LB(Luria-Bertani)液体培养基10mL 置于试管中,灭菌后将活化好的枯草芽孢杆菌株(Bacillus subtilis ATCC6633)挑取绿豆大的单菌落于试管中,摇床上培养 12h。取 200L 菌液于 96 孔板,测量 OD600,若 OD600大于 0.1,则用 LB 培养基稀释到OD600为 0.1后,再稀释 100倍得到测试用菌液。取无菌 96 孔板,试验组加入 10L 待测样品和190L菌液;阴性对照加入 10L甲醇和 190L菌液;阳性药为氨苄;空白对照组加入 10L 甲醇和 190L 培养基。操作完毕后置于培养箱中培养 12h后测量 OD600。采用公式(1)计算化合物对枯草芽孢杆菌的抑制率。2.结果与讨论 2.1 化合物结构鉴定 从该放线菌的代谢产物中共分离得到了 9 个化合物,根据1H、13C-NMR 和 MS 数据鉴定了化合物 19的结构(图 1)。化合物 1:无色油状,20D10(c 0.2,MeOD),ESI-MS 给出分子量为 130(m/z:153 M+Na+),分子式C6H10O3。1H-NMR(500MHz,CD3OD)H:6.31(1H,m,H-1),5.71(1H,m,H-2),5.25(1H,q,J=6.0Hz,H-2),2.06(3H,dd,J=7.3,1.8Hz,H-3),1.25(3H,d,J=6.0Hz,H-3);13C-NMR(125MHz,CD3OD)C:167.4(C,C-1),146.0(CH,C-1),121.8(CH,C-2),69.7(CH,C-2),20.3(CH3,C-3),15.5(CH3,C-3)。该结构已被文献报道,结合1H-NMR、13C-NMR、MS 数据鉴定化合物为(E)-prop-1-enyl-2-hydroxypropanoate(Huse et al,2006)。化合物 2:无色油状,20D+67(c 0.3,MeOD),ESI-MS给出分子量为 244(m/z:267 M+Na+),分子式C14H16N2O2。1H-NMR(500MHz,CD3OD)H:7.387.22(5H,m,H-2/3/4/5/6),4.47(1H,t,J=5.3Hz,H-6),4.09(1H,dd,J=10.9,6.5Hz,H-9),3.56(1H,m,H-3a),3.41(1H,m,H-3b),3.21(2H,m,H-10),2.11(1H,m,H-5a),1.82(2H,m,H-4),1.81(1H,m,H-5b);13C-NMR(125MHz,CD3OD)C:170.9(C,C-7),166.9(C,C-1),137.3(C,C-1),131.1(CH,C-3/C-5),129.4(CH,C-2/C-6),128.1(CH,C-4),60.1(CH,C-6),57.7(CH,C-9),46.0(CH2,C-3),38.2(CH2,C-10),29.4(CH2,C-5),22.7(CH2,C-4)。以上数据与文献报道基本一致,故鉴定化合物为 cyclo-(R-Pro-R-Phe)(Adamczeski et al,1995)。王子鹏等:海洋放线菌 Actinoplanes sp.M4I6 化学成分研究 41 1 图 1 化合物 19 的结构 Fig.1 The chemical structures of compounds 19 化合物 3:白色晶体,熔点:180182,20D 14(c 0.3,MeOD),ESI-MS 给出分子量为 212(m/z:235 M+Na+),分 子 式C11H20N2O2。1H-NMR(500MHz,CD3OD)H:3.90(1H,dd,J=9.3,4.4Hz,H-6),3.73(1H,d,J=4.4Hz,H-3),2.18(1H,m,H-11),1.83(1H,m,H-8),1.71(1H,m,H-7a),1.57(1H,m,H-7b),1.01(3H,d,J=7.0Hz,H-12),0.94(3H,d,J=6.9Hz,H-9),0.93(3H,d,J=7.0Hz,H-13),0.92(3H,d,J=6.9Hz,H-10);13C-NMR(125MHz,CD3OD)C:171.3(C,C-1),169.6(C,C-4),61.5(CH,C-6),54.3(CH,C-3),46.0(CH2,C-7),33.7(CH,C-11),25.3(CH,C-8),23.7(CH3,C-9),21.8(CH3,C-10),19.3(CH3,C-12),17.8(CH3,C-13)。以上数据与文献报道基本一致,故鉴定化合物为cyclo-(L-Val-L-Leu)(Ding et al,2013)。化合物 4:黄色粉末,熔点:175177,20D+68(c 0.3,MeOD),ESI-MS 给出分子量为 246(m/z:269 M+Na+),分 子 式 为 C14H18N2O2。1H-NMR(500MHz,CD3OD)H:7.257.16(5H,m,H-5/6/7/8/9),4.27(1H,dd,J=5.3,4.5Hz,H-2),3.60(1H,d,J=4.5Hz,H-11),3.20(1H,dd,J=13.7,5.3Hz,H-3a),2.99(1H,dd,J=13.7,4.5Hz,H-3b),1.60(1H,dq,J=7.1,4.5Hz,H-12),0.75(3H,d,J=7.1Hz,H-13),0.37(3H,d,J=7.1Hz,H-14);13C-NMR(125MHz,CD3OD)C:169.4(C,C-1/10),137.0(C,C-4),131.5(CH,C-6/8),129.6(CH,C-5/9),128.2(CH,C-7),61.2(CH,C-2),57.2(CH,C-11),40.0(CH2,C-3),33.3(CH,C-12),19.1(CH3,C-13),17.0(CH3,C-14)。以上数据与文献报道基本一致,故鉴定化合物为 cyclo-(L-Phe-L-Val)(刘志国 等,2018)。化合物 5:黄色粉末,熔点:177179,20D 33(c 0.4,MeOD),ESI-MS 给出分子量为 260(m/z:283 M+Na+),分子式为 C15H20N2O2。1H-NMR(500MHz,CD3OD)H:7.287.13(5H,m,H-5/6/7/8/9),4.27(1H,t,J=4.0Hz,H-2),3.62(1H,dd,J=13.8,4.3Hz,H-3a),3.24(1H,d,J=4.0Hz,H-11),2.90(1H,dd,J=13.8,5.8Hz,H-3b),1.81(2H,m,H-12),1.60(1H,m,H-13),0.96(3H,d,J=6.6Hz,H-14),0.64(3H,d,J=7.1Hz,H-15);13C-NMR(125MHz,CD3OD)C:170.6(C,C-10),168.9(C,C-1),136.7(C,C-4),131.8(CH,C-6/8),129.6(CH,C-5/9),128.5(CH,C-7),57.4(CH,C-11),54.0(CH,C-2),45.2(CH2,C-12),40.2(CH2,C-3),24.6(CH,C-13),23.4(CH3,C-14),21.3(CH3,C-15)。以上数据与文献报道基本一致,故鉴定化合物为 cyclo-(L-Leu-L-Phe)(Lopez et al,1997)。化合物 6:黄色油状,ESI-MS 给出分子量为 242(m/z:265 M+Na+),分子式为 C12H10N4O2。1H-NMR(500MHz,DMSO)H:7.85(1H,s,H-6),7.65(1H,s,H-9),2.43(3H,s,H-11),2.41(3H,s,H-12);13C-NMR(125MHz,DMSO)C:160.9(C,C-4),150.4(C,C-2),146.9(C,C-10a),144.7(C,C-9a),141.8(C,C-5a),138.8(C,C-8),138.3(C,C-7),130.4(C,C-4a),128.7(CH,C-6),126.0(CH,C-9),20.3(CH3,C-11),19.7 42 热 带 海 洋 学 报 Vol.42,No.5/Sep.,2023 1(CH3,C-12)。以上数据与文献报道基本一致,故鉴定化合物为 lumichrome(陈玉英 等,2014)。化合物 7:黄色油状,ESI-MS 给出分子量为 180(m/z:203 M+Na+),分子式为 C10H12O3。1H-NMR(500MHz,CD3OD)H:7.00(2H,d,J=8.5Hz,H-4/8),6.66(2H,d,J=8.5Hz,H-5/7),4.15(2H,t,J=7.1Hz,H-1),2.77(2H,t,J=7.1Hz,H-2),1.96(3H,s,H-2);13C-NMR(125MHz,CD3OD)C:172.9(C,C-1),157.1(C,C-6),130.9(CH,C-4/8),129.9(C,C-3),116.2(CH,C-5/7),66.6(CH2,C-1),35.2(CH2,C-2),20.8(CH3,C-2)。以上数据与文献报道基本一致,故 鉴 定 化 合 物 为 2-(4-hydroxyphenyl)ethylacetate (王鸿 等,2014)。化合物 8:黄色油状,20D+15(c 0.3,MeOD),ESI-MS 给出分子量为 222(m/z:245 M+Na+),分子式为 C13H18O3。1H-NMR(500MHz,CD3OD)H:7.01(2H,d,J=8.4Hz,H-2/6),6.65(2H,d,J=8.4Hz,H-3/5),4.16(1H,dd,J=8.1,4.7Hz,H-2),2.88(1H,dd,J=13.9,4.7Hz,H-1-a),2.66(1H,dd,J=13.9,8.1Hz,H-1-b),2.33(2H,d,J=6.5Hz,H-4),2.03(1H,m,H-5),0.85(3H,d,J=2.6Hz,H-6),0.83(3H,d,J=2.6Hz,H-7);13C-NMR(125MHz,CD3OD)C:214.4(C,C-3),157.1(C,C-4),131.5(CH,C-2/6),129.2(C,C-1),116.0(CH,C-3/5),79.3(CH,C-2),49.6(CH2,C-4),40.1(CH2,C-1),25.1(CH,C-5),23.0(CH3,C-6),22.9(CH3,C-7)。以上数据与文献报道基本一致,故鉴定化合物为 4-hydroxysattabacin(Kim et al,2017)。化合物 9:黄色油状,20D 10(c 0.2,MeOD),ESI-MS 给出分子量为 208(m/z:231 M+Na+),分子式为 C12H16O3。1H-NMR(500MHz,CD3OD)H:7.22 7.17(5H,m,H-1/2/3/4/5),4.67(1H,m,H-1),3.62(1H,m,H-2),3.55(2H,s,H-7),1.06(3H,d,J=6.5Hz,H-4),1.00(3H,d,J=6.5Hz,H-3);13C-NMR(125MHz,CD3OD)C:173.2(C,C-8),135.8(C,C-6),130.4(CH,C-1/5),129.5(CH,C-2/4),128.0(CH,C-3),75.8(CH,C-2),70.0(CH,C-1),42.2(CH2,C-7),18.8(CH3,C-4),15.9(CH3,C-3)。以上数据与文献报道基本一致,故鉴 定 化 合 物 为 3-hydroxybutan-2-yl 2-phenylacetate (李云海 等,2017)。2.2 化合物生物活性评价 对分离得到的 9 个化合物测试了其抗枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ATCC 6633)和乙酰胆碱酯酶抑制活性,结果显示化合物 4、6 对乙酰胆碱酯酶有较弱的抑 制 活 性,在 终 浓 度 200molL1时 抑 制 率 为(45.11.6)%、(38.02.6)%阳性对照组他克林在终浓度 2.5molL1时抑制率为(83.71.2)%。化合物 5、6、8、9 对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ATCC 6633)有一定的抑制活性,在终浓度 128gmL1时抑制率分别为(42.72.5)%、(52.31.0)%、(52.13.9)%、(44.6 2.0)%阳性对照组氨苄在终浓度 8gmL1时抑制率为(92.62.5)%。3.讨论 海洋游动属放线菌是海洋活性天然产物的重要来源之一,对于其次级代谢产物的研究可为药物先导化合物的发现提供思路。肽类化合物是游动放线菌代谢产物的主要类型之一,如从游动放线菌 PDF-1 代谢产物中分离鉴定的诺西肽(李子强 等,2021)和济南游动放线菌中发现的创新霉素(李群 等,1976)。肽类结构的生物活性主要有抗菌、抗肿瘤、抗病毒、抗炎和免疫抑制等活性(王优 等,2008)。抗菌肽替考拉宁和雷莫拉宁均是从游动属放线菌代谢产物中分离得到,并且已经应用于临床(Pallanza et al,1984;李丹 等,2019)。本文从海洋放线菌 Actinoplanes sp.M4I6 中分离得到 9 个单体化合物(19),代谢产物的类型主要有环二肽类以及小分子酚性成分,发现该菌在本试验条件下主要代谢产生该属报道的肽类成分,该放线菌是否会代谢其他类型化合物后续有待改变发酵条件进一步挖掘。根据文献报道,化合物 7 对肿瘤细胞 PC-3 有一定的抑制活性(王鸿 等,2014)。化合物 8 对黑色素的生成有显著的抑制作用(Kim et al,2017)。本文对分离得到的 9 个化合物测试了其抗枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ATCC 6633)和乙酰胆碱酯酶抑制活性,测试结果显示 2 个化合物(4、6)对乙酰胆碱酯酶有较弱的抑制活性,4 个化合物(5、6、8、9)对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis ATCC 6633)有一定的抑制活性。这些鉴定的化合物是否具有其他生物活性还需要对化合物进行富集和进一步评价。参考文献 References陈玉英,彭飞,林如,等,2014.海绵共附生疣孢菌 FIM060022抑菌活性代谢产物的研究J.中国抗生素杂志,39(9):641664.CHEN YUYING,PENG FEI,LIN RU,et al,2014.Studies on the antimicrobial metabolites produced by the sponge-associated Verrucosispora sp.FIM060022J.Chinese Journal of Antibiotics,39(9):641664(in Chinese with 王子鹏等:海洋放线菌 Actinoplanes sp.M4I6 化学成分研究 43 1 English abstract).李丹,李倩,段爱红,等,2019.替考拉宁高效液相色谱手性固定相的制备研究J.化学研究,30(6):593598.LI DAN,LI QIAN,DUAN AIHONG,et al,2019.Preparation of chiral teicoplanin stationary phase for HPLCJ.Chemical Research,30(6):593598(in Chinese with English 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