细菌涂片制备及染色.ppt

实验二实验二 细菌的涂片及染色细菌的涂片及染色1可编辑版可编辑版1.目的要求目的要求2.染色剂及染色原理染色剂及染色原理3.实验材料实验材料4.实验步骤实验步骤5.思考题思考题本次实验内容本次实验内容2可编辑版可编辑版一、目的要求一、目的要求学习细菌涂片的基本技术学习细菌涂片的基本技术掌握细菌的简单染色和革兰氏染色法掌握细菌的简单染色和革兰氏染色法3可编辑版可编辑版二、微生物染色的基本原理二、微生物染色的基本原理借助物理和化学因素的作用而进行借助物理和化学因素的作用而进行1、物理因素物理因素如：细胞及细胞物质对染料的毛细如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等。现象、渗透、吸附作用等。2、化学因素化学因素如：正负离子之间的相互吸引等如：正负离子之间的相互吸引等4可编辑版可编辑版染色剂，按其电离后所带电荷的性质分：染色剂，按其电离后所带电荷的性质分：1、酸性染料、酸性染料酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑2、碱性染料、碱性染料碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶紫、美兰、碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶紫、美兰、甲基紫等，细菌易被碱性染料染色甲基紫等，细菌易被碱性染料染色5可编辑版可编辑版3、中性染料：、中性染料：伊红、美兰等，伊红、美兰等，Wright染料和染料和Gimsa染料等染料等（常用于细胞核染色）（常用于细胞核染色）4、单纯染色：、单纯染色：这类染料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物，这类染料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类的染料。不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类的染料。6可编辑版可编辑版7可编辑版可编辑版三、实验材料三、实验材料菌种菌种 牙垢细菌；大肠杆菌牙垢细菌；大肠杆菌24 h培养液；培养液；枯草杆菌枯草杆菌12 h 培养液培养液载玻片载玻片、接种环、镊子、酒精灯、染色液、火柴、接种环、镊子、酒精灯、染色液、火柴显微镜显微镜、吸水纸、酒精乙醚溶剂、吸水纸、酒精乙醚溶剂8可编辑版可编辑版四、实验步骤四、实验步骤(一一)细菌染色方法细菌染色方法 1单染色法：用一种染色液染菌体后，就可以观察微单染色法：用一种染色液染菌体后，就可以观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物及它的特殊构造微生物及它的特殊构造 2复染色法：用两种或两种以上染色液进行，常用：复染色法：用两种或两种以上染色液进行，常用：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法、细胞染色法等色法、细胞染色法等染色技术：涂片染色技术：涂片 干燥干燥 固定固定 染色染色 媒媒染染 脱色脱色 复染复染水洗水洗 干燥干燥 镜检镜检9可编辑版可编辑版四、实验步骤四、实验步骤(二二)牙垢细菌单染色法牙垢细菌单染色法 菌种：牙垢细菌菌种：牙垢细菌涂片涂片干燥：自然气干或酒精灯高处微微加热干燥：自然气干或酒精灯高处微微加热固定固定染色：在整个涂面上滴加石碳酸复红，染色染色：在整个涂面上滴加石碳酸复红，染色1 min水洗：倾去染液，用自来水细流冲洗至流下水中无水洗：倾去染液，用自来水细流冲洗至流下水中无染料颜色为止染料颜色为止干燥：空气中自然干燥干燥：空气中自然干燥镜检：在油镜下观察牙垢中的各种细菌形态并绘图镜检：在油镜下观察牙垢中的各种细菌形态并绘图10可编辑版可编辑版示范照片示范照片11可编辑版可编辑版简单染色视频简单染色视频12可编辑版可编辑版四、实验步骤四、实验步骤(三三)革兰氏染色法革兰氏染色法 革兰氏染色是革兰氏染色是Gram发明的一种细菌鉴别染色法，发明的一种细菌鉴别染色法，通过染色，可将细菌分为两大类：一类被染成紫色，称通过染色，可将细菌分为两大类：一类被染成紫色，称为革兰氏阳性细菌，另一类被染成红色，称为革兰氏阴为革兰氏阳性细菌，另一类被染成红色，称为革兰氏阴性细菌。这种染色的结果主要与细菌的细胞壁结构和化性细菌。这种染色的结果主要与细菌的细胞壁结构和化学组成有关。学组成有关。13可编辑版可编辑版步骤步骤涂片涂片初染初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染染1 min，倾去染液，流水冲洗至无紫色，倾去染液，流水冲洗至无紫色媒染：先用新配的碘液冲去残水，而后用其覆媒染：先用新配的碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面盖涂面1 min，后水洗，后水洗脱色脱色：除去残水后，滴加：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约酒精进行脱色约30 sec，后立即用流水冲洗，后立即用流水冲洗复染复染：滴加番红染色液，染：滴加番红染色液，染1 min，水洗后用吸，水洗后用吸水纸吸干水纸吸干镜检镜检：观察染色结果并绘图：观察染色结果并绘图14可编辑版可编辑版15可编辑版可编辑版16可编辑版可编辑版17可编辑版可编辑版革兰氏染色视频革兰氏染色视频18可编辑版可编辑版思考题思考题1.要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些要得到正确的革兰氏染色结果必须注意哪些操作？操作？19可编辑版可编辑版注意事项注意事项革兰氏染色成败与否与许多因素有关革兰氏染色成败与否与许多因素有关 菌龄菌龄 涂片厚薄涂片厚薄 脱色时间（最为关键）脱色时间（最为关键）20可编辑版可编辑版