花旗松素调控内质网应激PERK-ATF4通路减轻高血压大鼠心肌肥厚的机制研究.pdf

2023 年 9 月第 33 卷 第 9 期中国比较医学杂志CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINESeptember,2023Vol.33 No.9余金玉,韩静,张营,等.花旗松素调控内质网应激 PERK-ATF4 通路减轻高血压大鼠心肌肥厚的机制研究 J.中国比较医学杂志,2023,33(9):54-62.Yu JY,Han J,Zhang Y,et al.Mechanism of taxifolin regulating endoplasmic reticulum stress via the PERK-ATF4 pathway to reduce myocardial hypertrophy in hypertensive rats J.Chin J Comp Med,2023,33(9):54-62.doi:10.3969/j.issn.1671-7856.2023.09.007基金项目武汉市医学科研项目(WX20Q10)。作者简介余金玉(1985),女,硕士,研究方向:冠心病、高血压、心力衰竭。E-mail:jinyuyu1985 通信作者余稳(1979),男,副主任医师,研究方向:冠心病、高血压。E-mail:toyuwen 花旗松素调控内质网应激 PERK-ATF4 通路减轻高血压大鼠心肌肥厚的机制研究余金玉,韩 静,张 营,侯 亮,余 稳(长江航运总医院,武汉 430000)【摘要】目的 探讨花旗松素(TAX)对自发性高血压大鼠(SHR)心肌肥厚的影响及分子机制。方法24只 SHR 分为 SHR 对照组(SHR 组)、TAX 组(20 mg/kg)、TAX+PERK 激活剂 CCT020312(CCT)组(20 mg/kg TAX+2 mg/kg CCT),每组 8 只;另选 8 只正常血压 Wistar-Kyoto(WKY)大鼠作为正常对照组(WKY 组),给予相应的药物持续干预 8 周。实验过程中观察大鼠血压变化,并于干预结束后超声心动图检测大鼠舒张期室间隔厚度(IVSd)、收缩期室间隔厚度(IVSs)、左心室射血分数(LVEF)判断心肌肥厚程度和心脏功能,计算心脏指数、左心室指数,苏木精-伊红(HE)染色、小麦胚芽凝集素(WGA)染色和 Masson 染色评估心肌组织病理学变化,实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)检测心肌组织中心房钠尿肽(ANP)、B 型利钠肽(BNP)、I 型胶原蛋白 1 链(COL1A1)和型胶原蛋白1 链(COL3A1)mRNA 表达,Western blot 检测心肌组织蛋白激酶 R 样内质网激酶(PERK)-转录激活因子 4(ATF4)通路相关蛋白表达。结果 干预结束后,与 WKY 组相比,SHR 组收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、IVSd、IVSs、心脏指数、左心室指数、心肌细胞横截面积、胶原容积分数(CVF)、心肌组织 ANP、BNP、COL1A1 和 COL3A1 mRNA 表达、葡萄糖调节蛋白 78(GRP78)、ATF4、C/EBP 同源蛋白(CHOP)蛋白水平和 p-PERK/PERK 比值升高(均 P0.05),LVEF 降低(P0.05);与 SHR 组相比,TAX 组 SBP、DBP、IVSd、IVSs、心脏指数、左心室指数、心肌细胞横截面积、CVF、心肌组织 ANP、BNP、COL1A1 和 COL3A1 mRNA 表达、GRP78、ATF4、CHOP 蛋白水平和 p-PERK/PERK 比值降低(均 P0.05),LVEF 升高(P0.05);CCT020312 可部分逆转 TAX 对心脏功能和心肌肥厚的保护作用。结论 TAX 可通过抑制内质网应激(ERS),改善高血压心肌肥厚,其作用机制可能与抑制 PERK-ATF4 通路有关。【关键词】高血压;心肌肥厚;花旗松素;内质网应激;蛋白激酶 R 样内质网激酶;转录激活因子 4【中图分类号】R-33 【文献标识码】A 【文章编号】1671-7856(2023)09-0054-09Mechanism of taxifolin regulating endoplasmic reticulum stress via the PERK-ATF4 pathway to reduce myocardial hypertrophy in hypertensive ratsYU Jinyu,HAN Jing,ZHANG Ying,HOU Liang,YU Wen(General Hospital of the Yangtze River Shipping,Wuhan 430000,China)【Abstract】ObjectiveTo investigate the effect and molecular mechanism of taxifolin(TAX)on myocardial hypertrophy in spontaneously hypertensive rats(SHRs).MethodsTwenty-four SHRs were divided into an SHR control group(SHR group),TAX group(20 mg/kg),and TAX+PERK activator CCT020312(CCT)group(20 mg/kg TAX+2 mg/kg CCT)with eight SHRs per group.Eight Wistar-Kyoto(WKY)rats with normal blood pressure were used as the normal control group(WKY group).All animals were administered corresponding drugs for 8 weeks of continuous treatment.During the experiment,changes in blood pressure were observed.After the treatments,the thickness of the diastolic ventricular septum(IVSd),the thickness of the systolic ventricular septum(IVSs),and the left ventricular ejection fraction(LVEF)were measured by echocardiography to determine the degree of myocardial hypertrophy and cardiac functions.The cardiac index and left ventricular index were calculated.Hematoxylin-eosin(HE),wheat germ agglutinin(WGA),and Masson staining were performed to evaluate pathological changes of myocardial tissue.Real-time quantitative PCR(qRT-PCR)was performed to measure the mRNA expression of atrial natriuretic peptide(ANP),B-type natriuretic peptide(BNP),type I collagen 1 chain(COL1A1),and type collagen 1 chain(COL3A1)in myocardial tissues.Western blot was performed to detect expression of protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase(PERK)-activator of transcription 4(ATF4)pathway-related proteins in cardiac muscle.Results After the treatments,compared with the WKY group,systolic blood pressure(SBP),diastolic blood pressure(DBP),IVSd,IVSs,cardiac index,left ventricular index,myocardial cell cross-sectional area,collagen volume fraction(CVF),myocardial tissue ANP,BNP,COL1A1 and COL3A1 mRNA expression,glucose-regulated protein 78(GRP78),ATF4,and C/EBP homologous protein(CHOP)protein levels and the p-PERK/PERK ratio were increased in the SHR group(all P0.05),and LVEF was decreased(P0.05).Compared with the SHR group,SBP,DBP,IVSd,IVSs,cardiac index,left ventricular index,myocardial cell cross-sectional area,CVF,myocardial tissue ANP,BNP,COL1A1,and COL3A1 mRNA expression,GRP78,ATF4,CHOP protein levels,and the p-PERK/PERK ratio were decreased in the TAX group(all P0.05),and LVEF was increased(P0.05).CCT020312 partially reversed the protective effects of TAX on cardiac functions and hypertrophy.Conclusions TAX improves hypertensive myocardial hypertrophy by inhibiting endoplasmic reticulum stress,and its mechanism may be related to inhibiting the PERK-ATF4 pathway.【Keywords】hypertension;cardiac hypertrophy;taxifolin;endoplasmic reticulum stress;protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase;activating transcription factor 4Conflicts of Interest:The authors declare no conflict of interest.左心室肥厚(left ventricular hypertrophy,LVH)是高血压性心脏病的一个重要特征,主要涉及心肌细胞肥大和心肌成纤维细胞增殖引起的纤维化1。LVH 是多种心血管不良事件的诱发因素,例如心律失常、心力衰竭、心肌梗塞,甚至猝死2-3。逆转高血压 LVH,降低心血管并发症的发生率和患者死亡率是高血压治疗的重点4。花旗松素(taxifolin,TAX)又名二氢槲皮素,是一种植物黄酮类化合物,可用于预防和治疗心血管疾病5,具有抗高血压作用6。最近的研究显示,TAX 可呈浓度依赖性地抑制血管紧张素 II(Ang II)诱导的心肌细胞肥大,并可减轻压力负荷诱导的小鼠心肌肥厚及心肌纤维化7-8,是治疗心肌肥厚和纤维化的潜在候选药物。然而,关于 TAX 对心肌肥厚的调控机制知之甚少。内 质 网 应 激(endoplasmic reticulum stress,ERS)可促进高血压期间的心肌细胞凋亡,与心肌肥厚的发病机制有关9-10。据报道,ERS 抑制可减轻高血压患者的心脏损伤和压力超负荷诱导的心脏肥大11-12。因此,ERS 可能是改善病理性心肌肥厚的重要干预靶点。蛋白激酶 R 样内质网激酶(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)-转录激活因子 4(activating transcription factor 4,ATF4)通路是 ERS 的主要转导通路,其激活可促进心肌细胞肥大和心肌成纤维细胞活化13;而抑制 PERK-ATF4 通路可减轻心肌肥厚14。在肿瘤中,TAX 被报道可通过调控 ERS 抑制非小细胞肺癌细胞增殖并促进细胞凋亡15。然而,TAX 对心肌肥厚的保护作用是否与 ERS 有关尚未见报道。因此,本研究旨在确定 PERK-ATF4 通路介导的 ERS是否参与了 TAX 在高血压心肌肥厚中的保护作用。1 材料和方法1.1 实验动物SPF 级 雄 性 15 周 龄 自 发 性 高 血 压 大 鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)(n=24,体重260300 g),SPF 级雄性 15 周龄正常血压 Wistar-Kyoto(WKY)大鼠(n=8,体重 280320 g),由北京维通利华实验动物技术有限公司SCXK(京)2019-0009提供,在武汉大学人民医院动物实验中心SYXK(鄂)2020-0027饲养。保持在恒温(23 24)恒湿(50%60%)的环境中,光照时间为 12 h/12 h 光暗循环,可自由获取水和食物。本研究经武汉大学人民医院动物伦理委员会批准(IACUC-202103005),并符合实验动物使用的 3R 原则。1.2 主要试剂与仪器 TAX(纯度85%,美国 Sigma-Aldrich 公司,批55中国比较医学杂志 2023 年 9 月第 33 卷第 9 期 Chin J Comp Med,September 2023,Vol.33,No.9号 78666);PERK 激活剂 CCT020312(CCT,纯度98.97%,美 国 MedChemExpress 公 司,批 号 HY-119240);小麦胚芽凝集素(WGA)溶液(美国 Sigma-Aldrich 公司,批号 L4895);苏木精伊红(hematoxylin eosin,HE)染色试剂盒、Masson 三色染色试剂盒(北京 Solarbio 公司,批号 G1120、G1340);兔源一抗葡萄糖 调 节 蛋 白 78(glucose regulatory protein 78,GRP78)(批号#3183)、p-PERK(批号#3179)、PERK(批号#3192)、ATF4(批号#11815)、C/EBP 同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)(批 号#3082)、-肌动蛋白(-actin)(批号#4970)均购自美国 Cell Signaling Technology 公司。BP-2010A 智能无创血压计(北京 Softron 科技有限责任公司);Vevo 2100 超高分辨率小动物彩色多普勒超声实时影像系统(加拿大 VisualSonics 公司);Eclipse C1 Plus 共聚焦显微镜(日本 Nikon 公司);SmartSpec Plus 分光光度计、ChemiDocTM XRS 凝胶成像分析仪(美国Bio-Rad 公司);ABI 7500 实时荧光定量 PCR 仪(美国 Applied Biosystems 公司)。1.3 实验方法1.3.1 动物分组及干预 适应性饲养 1 周后,将 24 只 SHR 随机分为 3组(n=8):SHR 组(SHR 对照组)、TAX 组(20 mg/kg TAX)6、TAX+CCT 组(20 mg/kg TAX+2 mg/kg CCT)16。8 只同龄 WKY 大鼠作为 WKY 组(正常对照组)。TAX 组灌胃给予 20 mg/kg TAX,TAX+CCT 组在给予等量 TAX 灌胃的同时腹腔注射2 mg/kg CCT,SHR 和 WKY 组每天给予相同体积的生理盐水灌胃和腹腔注射。每天 1 次,共给药 8 周。1.3.2 血压测量 分别于治疗前和治疗后 2、4、8 周用 BP-2010A智能无创血压计采用尾套法测量收缩压(systolic blood pressure,SBP)和 舒 张 压(diastolic blood pressure,DBP)。在测量前将每只大鼠置于加热管(38)中 10 min 以提高其体温。每组大鼠平行测定,每只大鼠测量 3 次,取平均值。1.3.3 超声心动图 治疗 8 周后,通过腹腔注射戊巴比妥钠(40 mg/kg)麻醉大鼠,使用小动物超声成像系统检测大鼠舒张期室间隔厚度(diastolic interventricular septum,IVSd)、收缩期室间隔厚度(systolic interventricular septum,IVSs)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)判断心肌肥厚程度和心脏功能。1.3.4 心脏指数、左心室指数 心脏功能检测结束后,称量大鼠体重,然后取出心脏,用冰冷的生理盐水冲洗。滤纸吸干表面残留液体后,称取心脏总重量,随后解剖分离左心室并称重,计算心脏指数和左心室指数。心脏指数=心脏总重量(mg)/体重(g)左心室指数=左心室重量(mg)/体重(g)1.3.5 HE 染色、WGA 染色和 Masson 染色评估心肌组织病理学变化 从左心室心尖切下部分心肌组织,立即用冰冷的磷酸盐缓冲液清洗,用 4%多聚甲醛固定过夜,然后包埋在石蜡中。随后,制备左心室的横向切片(约 5 m 厚)并放置在载玻片上。接下来,用苏木精和伊红以及 Masson 三色试剂对切片进行染色,显微镜下观察染色结果,并在 Masson 三色试剂染色的切片中测量纤维化面积(蓝色胶原沉积),计算胶原容积分数(collagen volume fraction,CVF)。CVF=(胶原面积/心肌总面积)100%。为了确定心肌细胞横截面积,将心肌组织切片脱蜡、再水化,并用 EDTA 抗原修复溶液进行抗原修复处理。洗涤后,将切片与用 FITC 标记的 WGA 溶液(1 200)在 37 避光孵育 30 min,然后与 DAPI在室温下放置 10 min。最后,用抗褪色封固剂封固载玻片,使用荧光显微镜观察染色的细胞,每张切片随机选择 5 个非重复视野,拍摄图像。使用Image-Pro Plus 6.0 软件分析心肌细胞横截面积。1.3.6实时荧光定量 PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测心肌组织中心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、B 型 利 钠 肽(B-type natriuretic peptide,BNP)、I 型胶原蛋白 1 链(collagen I 1 chain,COL1A1)和型胶原蛋白 1 链(collagen 1 chain,COL3A1)mRNA 表达 使用 TRIzol 试剂从冷冻的左心室心肌组织中提取总 RNA。通过 SmartSpec Plus 分光光度计使用A260/A280 比 率 对 RNA 纯 度 进 行 测 定。使 用Transcriptor First Strand cDNA 合成试剂盒将总 RNA(每份样品 2 g)逆转录成 cDNA。使用 LightCycler 480 SYBR-Green I Master mix 进行 qRT-PCR。在95初始变性 5 min 后,总共进行了 42 个引物延伸循环,每个循环包括 95 10 s 变性、60 20 s 退火、72 20 s 延伸。使用 2-Ct方法进行基因相对65中国比较医学杂志 2023 年 9 月第 33 卷第 9 期 Chin J Comp Med,September 2023,Vol.33,No.9表达分析。将结果标准化为甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)的 mRNA 表达。引物序列见表 1。1.3.7Western blot 检测心肌组织 PERK-ATF4 通路相关蛋白表达 在 RIPA 裂解缓冲液中提取大鼠左心室心肌组织总蛋白,并通过在 4 下以 12 000 r/min 离心 10 min 去除碎片获得上清液。使用二辛可宁酸测定法测定样品中的蛋白质浓度。通过 10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离提取的蛋白质。然后,将蛋白质转移到聚偏二氟乙烯膜上。将膜在5%脱脂奶粉中封闭 2 h。然后按照 Marker 标记的分子量将膜水平切割,并在 4 下与相应的一抗(GRP78(1 1000)、p-PERK(1 1000)、PERK(1 1000)、ATF4(1 500)、CHOP(1 1000)、-actin(1 4000)孵育过夜。将膜用 TBST 洗涤后与辣根过氧化物酶偶联的二抗(1 2000)在室温下孵育 2 h。ECL 试剂显色并使用 ChemiDoc XRS 凝胶成像分析仪扫描印迹。使用 Image J 软件测定蛋白质条带的灰度值,并使用-actin 作为内部对照,计算目的蛋白的相对表达量。1.4 统计学方法 实验数据用平均数标准差(xs)表示。使用GraphPad Prism 8.0 软件,通过单因素方差分析和SNK-q 检验来评估多组之间的统计显著性。P 0.05 为差异具有统计学意义。2 结果2.1 各组大鼠血压变化比较治疗前,各组 SHR 大鼠 SBP、DBP 显著高于WKY 组(P0.05)。治疗 2、4、8 周后,与SHR 组相比,TAX 组大鼠 SBP、DBP 显著降低(均 P0.05);与 TAX 组相比,TAX+CCT 组在治疗 4、8 周后 SBP、DBP 显著升高(均 P0.05)(表 2、表 3)。2.2 各组大鼠心脏功能比较 与 WKY 组相比,SHR 组大鼠 IVSd、IVSs 显著增加,LVEF 显著降低(均 P0.05);与 SHR 组相比,TAX 组大鼠 IVSd、IVSs 显著降低,LVEF 显著升高(均 P0.05);与 TAX 组相比,TAX+CCT 组大鼠IVSd、IVSs 显著增加,LVEF 显著降低(均 P0.05)(图 1,表 4)。2.3 各组大鼠心脏指数、左心室指数比较 与 WKY 组相比,SHR 组大鼠心脏指数、左心室指数显著升高(均 P0.05);与 SHR 组相比,TAX组大鼠心脏指数、左心室指数显著降低(均 P 0.05);与 TAX 组相比,TAX+CCT 组大鼠心脏指数、左心室指数显著升高(均 P0.05)(表 5)。表 1 qRT-PCR 引物序列Table 1 qRT-PCR primer sequences基因Gene物种Specie正向引物(5-3)Forward primer(5-3)反向引物(5-3)Reverse primer(5-3)ANPRatGAGCAAATCCCGTATACAGTGCATCTTCTACCGGCATCTCCTCCBNPRatGCTGCTGGAGCTGATAAGAGAAGTTCTTTTGTAGGGCCTTGGTCCOL1A1RatTCAAGATGGTGGCCGTTACTCATCTTGAGGTCACGGCATGCOL3A1RatTGGGATGCAACTACCTTGGTAGGTGTAGAAGGCTGTGGACGAPDHRatGGCACAGTCAAGGCTGAGAATGATGGTGGTGAAGACGCCAGTA表 2 各组大鼠 SBP 比较(xs,n=8)Table 2 Comparison of SBP of rats in each group组别Groups收缩压(mmHg)SBP治疗前Before treatment治疗 2 周Treatment for 2 weeks治疗 4 周Treatment for 4 weeks治疗 8 周Treatment for 8 weeksWKY 组WKY group121.5015.78124.1614.35125.7213.89122.4314.60SHR 组SHR group187.6320.42192.0525.84203.1427.60209.2523.74TAX 组TAX group189.1423.56160.4321.35#154.5320.17#143.0118.96#TAX+CCT 组TAX+CCT group185.2521.70186.5922.42190.2621.58&194.6025.15&注:与 WKY 组相比,P0.05;与 SHR 组相比,#P0.05;与 TAX 组相比,&P0.05。Note.Compared with WKY group,P0.05.Compared with SHR group,#P0.05.Compared with TAX group,&P0.05.75中国比较医学杂志 2023 年 9 月第 33 卷第 9 期 Chin J Comp Med,September 2023,Vol.33,No.9表 3 各组大鼠 DBP 比较(xs,n=8)Table 3 Comparison of DBP of rats in each group组别Groups舒张压(mmHg)DBP治疗前Before treatment治疗 2 周Treatment for 2 weeks治疗 4 周Treatment for 4 weeks治疗 8 周Treatment for 8 weeksWKY 组WKY group87.4210.3685.5911.0790.1413.2584.7612.49SHR 组SHR group129.5015.25133.2616.32140.6817.12137.8015.62TAX 组TAX group126.3814.40112.1515.08#106.3214.54#98.2313.27#TAX+CCT 组TAX+CCT group127.6116.19129.0413.65135.1918.05&130.4517.10&注:与 WKY 组相比,P0.05;与 SHR 组相比,#P0.05;与 TAX 组相比,&P0.05。Note.Compared with WKY group,P0.05.Compared with SHR group,#P0.05.Compared with TAX group,&P0.05.图 1 各组大鼠超声心动图代表性图像Figure 1 Representative echocardiographic images of rats in each group表 4 各组大鼠 IVSd、IVSs 和 LVEF 比较(xs,n=8)Table 4 Comparison of IVSd,IVSs and LVEF of rats in each group组别Groups舒张期室间隔厚度(mm)IVSd收缩期室间隔厚度(mm)IVSs左心室射血分数(%)LVEFWKY 组WKY group1.480.151.960.2076.588.13SHR 组SHR group1.900.172.510.2354.396.40TAX 组TAX group1.570.16#2.160.19#68.427.25#TAX+CCT 组TAX+CCT group1.840.19&2.450.22&55.906.31&注:与 WKY 组相比,P0.05;与 SHR 组相比,#P0.05;与 TAX 组相比,&P0.05。Note.Compared with WKY group,P 0.05.Compared with SHR group,#P0.05.Compared with TAX group,&P0.05.表 5 各组大鼠心脏指数、左心室指数比较(xs,n=8)Table 5 Comparison of cardiac index and left ventricular index of rats in each group组别Groups心脏指数(mg/g)Cardiac index左心室指数(mg/g)Left ventricular indexWKY 组WKY group3.260.392.380.25SHR 组SHR group4.150.443.040.32TAX 组TAX group3.500.41#2.520.29#TAX+CCT 组TAX+CCT group4.070.42&2.930.30&注:与 WKY 组相比,P0.05;与 SHR 组相比,#P0.05;与 TAX 组相比,&P0.05。Note.Compared with WKY group,P 0.05.Compared with SHR group,#P0.05.Compared with TAX group,&P0.05.85中国比较医学杂志 2023 年 9 月第 33 卷第 9 期 Chin J Comp Med,September 2023,Vol.33,No.92.4 各组大鼠心肌细胞横截面积、CVF 比较 心肌组织学分析结果显示,WKY 组心肌细胞结构正常,与 WKY 组相比,SHR 组心肌细胞肿胀变性、排列稀疏,心肌细胞横截面积、CVF 显著升高(均 P0.05);与 SHR 组相比,TAX 组心肌细胞肿胀程度下调,心肌细胞横截面积、CVF 显著降低(均 P0.05);与 TAX 组相比,TAX+CCT 组心肌细胞横截面积、CVF 显著升高(均 P0.05)(图 2,表 6)。2.5各组大鼠心肌组织 ANP、BNP、COL1A1 和COL3A1 mRNA 表达比较 与 WKY 组相比,SHR 组 ANP、BNP、COL1A1 和COL3A1 mRNA 表达显著升高(均 P0.05);与 SHR组相 比,TAX 组 ANP、BNP、COL1A1 和 COL3A1 mRNA 表达显著降低(均 P0.05);与 TAX 组相比,TAX+CCT 组 ANP、BNP、COL1A1 和 COL3A1 mRNA表达显著升高(均 P0.05)(表 7)。2.6 各组大鼠心肌组织 PERK-ATF4 通路相关蛋白表达比较 与 WKY 组相比,SHR 组 GRP78、ATF4、CHOP蛋白水平和 p-PERK/PERK 比值显著升高(均 P0.05);与 SHR 组相比,TAX 组 GRP78、ATF4、CHOP蛋白水平和 p-PERK/PERK 比值显著降低(均 P0.05);与 TAX 组相比,TAX+CCT 组 GRP78、ATF4、CHOP 蛋白水平和 p-PERK/PERK 比值显著升高(均 P0.05)(图 3,表 8)。表 6 各组大鼠心肌细胞横截面积、CVF 比较(xs,n=8)Table 6 Comparison of cardiomyocyte cross-sectional area and CVF of rats in each group组别Groups心肌细胞横截面积(m2)Myocardial cell cross-sectional area胶原容积分数(%)CVFWKY 组 WKY group436.8552.963.120.40SHR 组 SHR group1152.7094.2512.791.53TAX 组 TAX group788.4261.34#6.800.72#TAX+CCT 组 TAX+CCT group1094.1585.67&11.451.38&注:与 WKY 组相比,P0.05;与 SHR 组相比,#P0.05;与 TAX 组相比,&P0.05。Note.Compared with WKY group,P0.05.Compared with SHR group,#P0.05.Compared with TAX group,&P0.05.图 2 心肌 HE 染色、WGA 染色和 Masson 染色的代表性组织学图像Figure 2 Representative histological images of myocardial HE,WGA and Masson staining95中国比较医学杂志 2023 年 9 月第 33 卷第 9 期 Chin J Comp Med,September 2023,Vol.33,No.9表 7 各组大鼠心肌组织 ANP、BNP、COL1A1 和 COL3A1 mRNA 表达比较(xs,n=8)Table 7 Comparison of the expressions of ANP,BNP,COL1A1 and COL3A1 mRNA in myocardial tissue of rats in each group组别Groups心房钠尿肽ANPB 型利钠肽BNPI 型胶原蛋白 1 链COL1A1型胶原蛋白 1 链COL3A1WKY 组WKY group1.000.001.000.001.000.001.000.00SHR 组SHR group2.860.324.750.513.600.392.540.30TAX 组TAX group1.450.20#2.160.28#1.520.21#1.390.18#TAX+CCT 组TAX+CCT group2.670.29&4.580.46&3.430.35&2.270.25&注:与 WKY 组相比,P0.05;与 SHR 组相比,#P0.05;与 TAX 组相比,&P0.05。Note.Compared with WKY group,P0.05.Compared with SHR group,#P0.05.Compared with TAX group,&P0.05.表 8 各组大鼠心肌组织 GRP78、PERK、p-PERK、ATF4 和 CHOP 蛋白水平比较(xs,n=8)Table 8 Comparison of GRP78,PERK,p-PERK,ATF4 and CHOP protein levels in myocardial tissue of rats in each group组别GroupsGRP78p-PERK/PERKATF4CHOPWKY 组WKY group0.180.030.120.020.230.040.130.02SHR 组SHR group0.570.060.410.050.670.070.380.04TAX 组TAX group0.340.04#0.240.03#0.400.06#0.210.03#TAX+CCT 组TAX+CCT group0.520.05&0.370.04&0.610.07&0.340.05&注:与 WKY 组相比,P0.05;与 SHR 组相比,#P0.05;与 TAX 组相比,&P0.05。Note.Compared with WKY group,P0.05.Compared with SHR group,#P0.05.Compared with TAX group,&P0.05.图 3 各组大鼠心肌组织 PERK-ATF4 通路相关蛋白表达Figure 3 Expression of PERK-ATF4 pathway-related proteins in myo