DB42∕T 1698-2021 辣椒疮痂病抗性鉴定技术规程(湖北省).pdf

ICS65.020.20CCSB05DB42湖省地方标准卜匕.J.TDB42/T1698一2021辣椒疮痴病抗性鉴定技术规程Te c h n i c a lr e g u l a t i o nf o re v a l u a t i o no fp e p p e rr e s i s t a n c et ob a c t e r i a ls p o t2021一06一21发布2021一07一21实施湖d匕省市 场监督 管理局发布DB42/T1698一2021DB42/T1698一2021目次、，、目叮舀.1范围.2规范性引用文件.3术语和定义.4接种.5抗性鉴定接种操作.6病情调查方法.7抗病性评价.8记载表格.附录A（资料性）辣椒疮痴病病原菌和生理小种DB42/T1698一2021DB42/T1698一2021士一口前本文件按照GB/T1.1一2020标准化工作导则第1音日分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖北省农业科学院经济作物研究所提出。本文件由湖北省农业农村厅归口。本文件起草单位：湖北省农业科学院经济作物研究所、湖北省蔬菜办公室、华中农业大学。本文件主要起草人：李宁、尹延旭、王飞、高升华、余楚英、姚明华、袁尚勇、焦春海、张成、张余洋。本 文件实施应用中的疑问，可咨询 湖 北省农业农村厅，联系电话：027一87665821，邮箱：h b s n a b126.Co m。对本文件的有关修改意见建议请反馈至湖北省农业科学院经济作物研究所，联系电话：027一87380819，邮箱：798986546q q.c o m。DB42/T1698一2021DB42/T1698一2021辣椒疮痴病抗，生鉴定技术规程范围本文件规定了辣椒疮痴病抗性鉴定的术语和定义、接种、抗性鉴定接种操作、病情调查方法、抗病性评价以及记载表格。本文件适用于辣椒疮痴病的抗病性鉴定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。NY/T1858.5番茄主要病害抗病性鉴定技术规程第5部分：番茄抗疮痴病鉴定技术规程3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。感病对照d1s e a s e一s日s c e p t1bl e。o n t r o l为辣椒品种Ea rl yCa lWo l l d e r(ECW，感疮痴病品种），接种后的病情指数Dl)50。3.2抗病对照d1s e a,e一r e s1s t a n tc o n t r o l为辣椒材料ECW一乡少了含Bs Z基因），接种后的病情指数Dl蕊20。4接种4.1病原物的纯化与保存4.1.1病原物的纯化采集田间具有典型疮痴病症状的病叶，用常规组织平扳稀释八，从叶部病斑上分离病原物。分离物经过培养性状、菌体形态特征、生理生化反应、分子生物学鉴定等动认为贡单胞杆菌属细菌菌株，再进行分离物纯化和致病性测定。4.1.2接种体保存短期保存将新鲜菌落转移到保存培养基斜面上，28下培养48h后，置4下备用。长期保存将新鲜菌液加入己灭菌的脱脂牛奶中制成细菌悬浮液，经冷冻干燥抽真空后保存于密闭塑料管中，一20以下的冰箱中长期保存。4.2接种体繁殖和保存DB42/T1698一20214.2.1接种体繁殖用接种针挑取保存的疮痴病菌落，在NA培养基的平板上划线，置于28恒温培养箱中培养36h一48h，选取边缘清晰、有光泽、粘稠状的单菌落转移到培养基中28恒温震荡培养16h，加灭菌蒸馏水配制成浓度为2x108Cf u/m L的菌悬液。5抗性鉴定接种操作5.1鉴定室鉴定室应具备可调节温度、湿度和光照的条件，创造良好的发病环境。5.2设置对照设“ECW”辣椒为感病对照品种，ECW一20R”辣椒为抗病对照品种；接种菌株XCv 23一1为湖北省辣椒疮痴病优势菌株，鉴定为生理小种P0；辣椒一番茄疮痴病菌模式菌株Ic MP63（尤。a l n g e s分，s Pv,v os f c a t、f a）为对照菌株（参见附录A）。5.3育苗待鉴定的辣椒种子经10次氯酸钠溶液浸种8m i n一10m i n，灭菌水冲洗干净后置于28的恒温培养箱中催芽，露白后播种于育苗穴盘中。穴盘宜采用50孔穴盘，每穴播种1粒种子。育苗基质经121高温蒸汽灭菌40m i n。在20OC一30温室或大棚中育苗，幼苗应生长健壮、大小一致。5.4接种5.4.1接种时期在幼苗4片一6片真叶期进行接种。5.4.2接种体浓度宜为ZXIOSCf认。乞5.4.3鉴定设计鉴定材料随机排列，每份鉴定材术r重倪二人，每次重复10株。5.4.4接种方法5.4.4.1注射法接种用去针头的注射器将菌悬液注入待鉴定辣椒的第3片到第4) - - - - f.r卜背面每片叶接种一个点，形成直径为1Cm一2Cm的水浸区域。以接种辣椒一番茄疮痴病菌模式菌株ICMP63井，门照，接种灭菌水为空白对照。5.4.4.2喷雾法接种按照NY/T1858.5的方法执行。以喷洒辣椒一番茄疮痴病菌模式菌株ICMP63为对麒，喷洒灭菌水为空白对照。在鉴定材料数量较少情况下宜采用注射法，大量材料需鉴定情况下宜采用喷雾法。5.4.5接种后的管理DB42/T1698一2021采用注射接种法的，接种后在温度为28、相对湿度为75一90、光照强度为30,O00l x一40,000h条件下培养。采用喷雾法接种的，接种后的管理参照NY/T1858.5的方法执行。6病情调查方法6.1注射接种法病情调查6.1.1调查时间接种后l d一Zd开始调查。6.1.2病情分级O级，观察到的叶片有过敏坏死性症状；1级，观察到的叶片无坏死症状。6.2喷雾接种法病情调查6.2.1调查时间喷雾接种后7d开始调查。6.2.2病情分级参照NY/T1858.5的病情分级，病情分级的相关信息见表1。表1辣椒疮痴病的病情分级病情级别病情描述O全叶无病斑1病斑占叶片面积的10%3病斑占叶片面积的n一25%5病斑占叶片面积的26一50%了病斑占叶片面积的多51%6.2.3病情记载调查记载每一鉴定植株的病情级别，。寸咋病情指数（DISe a s ei n d e x:Dl)，并按照NY/T1858.5的方法执行。病情分级按公式（1）计算：、，Z,l了、气.DI处竺2x100.式中：Dl一一病情指数；S一一各病情级别的代表数值；n一一各病情级别的植株数值；N一一调查总植株数值；S一一最高病情级别的代表数值。DB42/T1698一20217抗病性评价7.1注射接种法抗性评价O级，为抗病；1级，为感病。7.2喷雾接种法抗性评价7.2.1抗病性评价标准依据鉴定材料3次重复的病情指数（Dl）的平均值确定其抗病水平，划分标准参照NY/T 1858.5，抗性评价标准的相关信息见表2。表2辣椒疮痴病的抗性评价标准病情指数（D工）抗性评价D工O免疫（工）OD工10高抗（HR)10延D工30抗病（R)30延D工50中抗（MR)50延D工70感病（S)D工多70高感（HS)7.2.2鉴定结果的有效性判别当感病对照的病情指数Dl妻50，该批次的抗疮痴病鉴定结果即为有效。8记载表格辣椒抗疮痴病鉴定结果记载表3、表4。表3编号品种种质名称来涯辣椒抗疮痴病鉴定记载表（注射法）重复毛弓病情分级抗性评价II工 工 工播种时间接种生育期生理小种类型技术负责人按种时问病原“与朗J号调查时间（签字）DB42/T1698一2021表4辣椒抗疮痴病鉴定记载表（喷雾法）病情分级编J万品种种质名称来源重复序号病情指数平均病指抗性评价播种时间接种生育期生理小种类型技术负责人接种时间病原物编号调查时间（签字）DB42/T1698一2021附录A（资料l生）辣椒疮痴病病原菌和生理小种A.1学名和形态描述A .1.1学名辣椒细菌性疮痴病病原菌为野油菜黄单胞杆菌辣椒斑点病致病变种众刀动二oDasc哪e s分zsPv.玲s,c a才二，a(Do1d g e)Dy e。A .1.2形态特征描述菌体短杆状，两端钝圆，大小为（1.0一1.5 )pm X(0.6一0.7 )p m；单极生鞭毛，能游动；菌体排列成链状，有荚膜、无芽胞；革兰氏染色阴性，好气；在YDC平板培养基上，菌落呈圆形，凸起，黄色，茹稠；病菌发育温度范围5OC一40，最适温度27一30，致死温度为5910m i n。A.1.3危害部位及症状叶片染病，初现许多圆形或不整齐水浸状斑点，黑绿色至黄褐色，有时出现轮纹，病部具不整齐隆起，呈疮痴状，病斑大小0.5m m一1.5m m，多时融合成较大斑点，引起叶片脱落；茎蔓染病，病斑呈不规则条斑或斑块，后木栓化或纵裂为疮痴状；果实染病，出现圆或长圆形病斑，稍 隆起，墨绿色，后期木栓化。A.2生理小种A.2.1采用的鉴别寄主国际上通用的辣椒疮痴病菌鉴别寄主谱，共包括5个鉴别寄主，分别为：Ea rl yCa l w o l l d e r(ECW,感疮痴病品种）、ECW一10R（含价1基因）、ECW一ZOR（含价多纂因）、ECW一3OR（含价男募因）。A.2.2生理小种鉴定病原菌分离物接种鉴别寄五后，根据鉴别寄主病情级别计算其病害严重等级从而确定抗性反应，以特定的反应组合划分生理小科（表了，1）。表A.辣探行傲病病原菌生理小种的鉴定鉴别寄主基因型生理小种NoRg e n eCW一IORECW一ZORECW一3OR,jg e n e Bs刃g e n e凡3g e n e辣椒生理小种O(P0)辣椒生理小种1(Pl)辣椒生理小种2(PZ)辣椒生理小种3(P3)辣椒生理小种4(P4)辣椒生理小种5(P5)辣椒生理小种6(P6)辣椒生理小种7(P7)DB42/T1698一2021生理小种辣椒生理小种8(P8)辣椒生理小种9(P9)辣椒生理小种10(PIO)番茄生理小种1(Tl)辣椒一番茄生理小种2(PTZ)辣椒一番茄生理小种3(PT3)辣椒一番茄生理小种4(PT4)辣椒一番茄生理小种5(PTS)鉴别寄主基因型SRSSSSRRRRSRSSSS