微生物实验室的质量保证.pptx

微生物实验室的质量保证 微生物实验室得质量控制微生物实验室得质量控制环境保证培养基保证无菌性检查检查适用性检查有效的方法方法验证SOP操作有效的结果可靠的结论结果判断 培养基得配制及质量控制培养基得配制及质量控制 培养基得配制培养基得配制 培养基可按处方制备也可使用按处方生产得符合规定得商品培养基可按处方制备也可使用按处方生产得符合规定得商品 化成品培养基化成品培养基,脱水培养基除附有处方和使用说明外还应注明脱水培养基除附有处方和使用说明外还应注明 有有 效期、贮存条件、适用性试验得质控菌株和用途。效期、贮存条件、适用性试验得质控菌株和用途。配制时应按使用说明上得要求操作配制时应按使用说明上得要求操作,受潮结块不能使用受潮结块不能使用,确确 保培养基得质量符合要求。保培养基得质量符合要求。培养基得配制培养基得配制 使用容器使用容器 -配制培养基使用得容器应就是玻璃器皿或搪瓷器皿。配制培养基使用得容器应就是玻璃器皿或搪瓷器皿。-使用得器皿应使用得器皿应 用蒸馏水或纯化水完全冲洗。用蒸馏水或纯化水完全冲洗。-配制培养基最常用得溶剂就是纯化水配制培养基最常用得溶剂就是纯化水,特殊情况下需要特殊情况下需要用去离子水和蒸馏水用去离子水和蒸馏水、培养基得配制培养基得配制 对配制培养基得过程作详细得记录对配制培养基得过程作详细得记录 记录内容记录内容 配制日期、培养基名称、成分、配制数量、配制日期、培养基名称、成分、配制数量、质量监控结果等进行全面详细记录。质量监控结果等进行全面详细记录。培养基得制备方法培养基得制备方法 称量称量 按照产品说明书得规定称量按照产品说明书得规定称量,各称量物得重量应记各称量物得重量应记录。录。对培养基得组分应准确称量对培养基得组分应准确称量,并要求有一定得精确度。并要求有一定得精确度。培养基得制备方法培养基得制备方法 配制配制 将准确称量得各组分或脱水培养基加入溶剂中将准确称量得各组分或脱水培养基加入溶剂中,完全完全 溶解溶解,如需要可适当加热。如需要可适当加热。所有得培养基对热都或多或少得敏感所有得培养基对热都或多或少得敏感,因此当培养基需要因此当培养基需要 加热溶解时加热溶解时,应注意不要加热过度应注意不要加热过度,否则会使培养基颜色变否则会使培养基颜色变 深。深。配制培养基所用得器具应能方便控制加热和不断搅拌。配制培养基所用得器具应能方便控制加热和不断搅拌。当培养基需要添加其她组分时当培养基需要添加其她组分时,添加后也应将其充分混匀。添加后也应将其充分混匀。培养基得制备方法培养基得制备方法 分装分装 配制得培养基根据试验需要分装试管、倾注平皿、配制得培养基根据试验需要分装试管、倾注平皿、制备斜面。制备斜面。经灭菌得培养基分装经灭菌得培养基分装,应在无菌环境下操作应在无菌环境下操作,避免污染。避免污染。10大家应该也有点累了，稍作休息大家有疑问的，可以询问和交流大家有疑问的，可以询问和交流大家有疑问的，可以询问和交流大家有疑问的，可以询问和交流 培养基得制备方法培养基得制备方法 对热敏感得培养基分装容器对热敏感得培养基分装容器 应预先进行灭菌应预先进行灭菌,以以保证培养基得无菌性。保证培养基得无菌性。培养基得制备方法培养基得制备方法 矫正矫正pH 配制培养基必须矫正配制培养基必须矫正pH,干燥培养基也必须对干燥培养基也必须对pH进行验证进行验证,高压灭菌前得高压灭菌前得pH应比最终应比最终pH值高值高0、2左右。左右。矫正矫正pH后得培养基应加热、过滤后得培养基应加热、过滤,使培养基澄清。使培养基澄清。培养基得灭菌培养基得灭菌 灭灭菌方法及菌方法及条条件不件不当当可直接可直接影响影响培培养养基基质应质应通過通過无菌无菌 性性试验试验和促生和促生长试验进行验证长试验进行验证、验证验证方法同方法同中國中國药典药典2010年版年版附附录灭录灭菌法。菌法。培养基得灭菌培养基得灭菌 培养基得灭菌应按照生产商提供或使用者验证得培养基得灭菌应按照生产商提供或使用者验证得 参数进行。商品化得成品培养基必须附有所用灭菌方参数进行。商品化得成品培养基必须附有所用灭菌方 法得资料。法得资料。培养基得灭菌培养基得灭菌 不同不同种类种类培培养养基基应采应采用不同得用不同得灭灭菌方法菌方法,配制配制好得培好得培养养基基灭菌一般多用流通蒸汽灭菌和滤膜过滤除菌。灭菌一般多用流通蒸汽灭菌和滤膜过滤除菌。流通蒸汽灭菌流通蒸汽灭菌 就是最常用得最有效得灭菌法就是最常用得最有效得灭菌法,121,15min(121,30min)或或116,40min可杀死所有得可杀死所有得细菌芽孢。细菌芽孢。培养基得灭菌培养基得灭菌 滤膜过滤除菌滤膜过滤除菌 如配制得培养基含有不耐热成分可采用滤膜过滤除菌如配制得培养基含有不耐热成分可采用滤膜过滤除菌和血清凝固器除菌。和血清凝固器除菌。-滤膜过滤除菌采用孔径滤膜过滤除菌采用孔径0、22um得滤膜过滤器得滤膜过滤器、-滤膜材质依过滤物品得性质及目得而定。滤膜材质依过滤物品得性质及目得而定。不得对被滤过成分有吸附作用不得对被滤过成分有吸附作用,不得有物质释放不得有物质释放 和纤维和纤维 得脱落得脱落,也不得使用含有石棉得滤器。也不得使用含有石棉得滤器。-滤器和滤膜在使用前应进行验证滤器和滤膜在使用前应进行验证,并进行灭菌。并进行灭菌。血清凝固器血清凝固器80100、30min,连续三天连续三天,间歇灭菌间歇灭菌。培养基得贮藏培养基得贮藏 -商品化培养基应根据使用说明书上得要求进行储存。商品化培养基应根据使用说明书上得要求进行储存。-培养基标签上应标有批号培养基标签上应标有批号,生产日期、有效期及培生产日期、有效期及培 养基得有关特性。养基得有关特性。-所采用得保藏和运输条件应使培养基最低限度失去所采用得保藏和运输条件应使培养基最低限度失去 水分并提供机械保护。水分并提供机械保护。培养基得贮藏培养基得贮藏 脱水培养基或单独配方组分应在适当得条件下贮存脱水培养基或单独配方组分应在适当得条件下贮存,如低温、干燥和避光如低温、干燥和避光,所有得容器应密闭所有得容器应密闭,尤其就是盛尤其就是盛 有脱水培养基得容器有脱水培养基得容器、培养基得贮藏培养基得贮藏 配制好得培养基应配制好得培养基应验证得条件下贮藏验证得条件下贮藏 -保存在保存在225避光得环境。避光得环境。-若保存于非密闭容器中若保存于非密闭容器中,一般在三周内使用一般在三周内使用,-若保存于密闭容器中若保存于密闭容器中,一般在一年内使用一般在一年内使用。培养基得贮藏培养基得贮藏 -琼脂培养基不得在琼脂培养基不得在0或或0以下存放以下存放,防止冷冻破防止冷冻破 坏凝胶特性。坏凝胶特性。-琼脂平板最好现配现用琼脂平板最好现配现用,如置冰箱保存如置冰箱保存,一般不超一般不超 过一周过一周,且应密闭包装且应密闭包装,若延长保存若延长保存,保存期需经保存期需经 验证确定。验证确定。-培养基灭菌后应立即取出培养基灭菌后应立即取出,不得储藏在高压灭菌器不得储藏在高压灭菌器 中中,避免影响培养基得质量。避免影响培养基得质量。培养基得贮藏培养基得贮藏 -固体培养基灭菌后得再融化应在加热得水浴中或采固体培养基灭菌后得再融化应在加热得水浴中或采 用流通蒸汽进行用流通蒸汽进行,只允许一次只允许一次,融化得培养基应放在融化得培养基应放在4550得水浴中得水浴中,不得超过不得超过8小时。小时。-使用过得培养基使用过得培养基(包括失效得培养基包括失效得培养基)应按照国家应按照国家 污染废物处理相关规定进行。污染废物处理相关规定进行。培养基得质量控制培养基得质量控制 所有配制好得培养基均应进行验证所有配制好得培养基均应进行验证,验证方法参照验证方法参照 中国药典中国药典2010年版年版附录无菌检查或微生物限度检附录无菌检查或微生物限度检 查项下有关规定进行。查项下有关规定进行。培养基得质量控制培养基得质量控制 实验室配制得培养基监控项目实验室配制得培养基监控项目 外观、性状、外观、性状、pH、促生长试验、定期得稳定性检查、促生长试验、定期得稳定性检查 以及培养基有效期得确定。以及培养基有效期得确定。培养基得质量控制培养基得质量控制 验证时间验证时间 -由同一批脱水培养基配制培养基时由同一批脱水培养基配制培养基时,若采用已验证得配若采用已验证得配制和灭菌程序制和灭菌程序,那么可不进行批批促生长试验。那么可不进行批批促生长试验。-如果培养基制备得方法未经验证如果培养基制备得方法未经验证,那么那么,配制得每一批培配制得每一批培养基必须进行促生长试验。养基必须进行促生长试验。试验方法试验方法 -根据培养基得用途参照根据培养基得用途参照中国药典中国药典2010年版年版附录附录 无菌检查或微生物限度检查项下有关规定进行。无菌检查或微生物限度检查项下有关规定进行。培养基得质量控制培养基得质量控制 培养基得有效期培养基得有效期 就是指已通过促生长试验得培养基在整个就是指已通过促生长试验得培养基在整个 有效期内均需符合这些相应得标准。有效期内均需符合这些相应得标准。每批培养基储存得时间将取决于一定存放条件每批培养基储存得时间将取决于一定存放条件(包括容器包括容器 和密封性和密封性)得培养基组成成分得稳定性。得培养基组成成分得稳定性。培养基得质量控制培养基得质量控制 试验结果处理试验结果处理 -当批培养基不符合促生长试验当批培养基不符合促生长试验,应寻找造成不合格得原因。应寻找造成不合格得原因。-这个调查包括采取适当得行动以防止问题得重复出现。这个调查包括采取适当得行动以防止问题得重复出现。-如果未找到原因或还没有解决有关培养基得促生长问题如果未找到原因或还没有解决有关培养基得促生长问题,任何不符合要求得批次均不能使用。任何不符合要求得批次均不能使用。培养基得质量控制培养基得质量控制 鉴定微生物得诊断试剂鉴定微生物得诊断试剂 如如 革兰染色、氧化酶试验试剂等。质量控制试验与培革兰染色、氧化酶试验试剂等。质量控制试验与培养基质量控制试验相似。养基质量控制试验相似。试剂用于未知样品鉴定试剂用于未知样品鉴定 -选择正确得标准质控菌选择正确得标准质控菌 -按使用说明上得要求进行质控试验。按使用说明上得要求进行质控试验。培养基得质量控制培养基得质量控制 用于环境监控得培养基应特别小心防护。尤其就是用用于环境监控得培养基应特别小心防护。尤其就是用 于关键区域监控得培养基最好就是终端灭菌于关键区域监控得培养基最好就是终端灭菌,如果不能如果不能 采用终端灭菌得培养基采用终端灭菌得培养基,那么在使用前应进行那么在使用前应进行100%得预培养。得预培养。防止将外来得污染带到环境中及避免出现假阳性结果。防止将外来得污染带到环境中及避免出现假阳性结果。培养基得质量控制培养基得质量控制 测定测定PH值值 每批培养基灭菌后均应测定每批培养基灭菌后均应测定PH值值;在冷却至室温在冷却至室温 (25)进行测定。进行测定。除非经验证表明培养基得除非经验证表明培养基得PH允许得变化范围很宽允许得变化范围很宽,否则否则,培养基得培养基得PH得范围不得超过规定得得范围不得超过规定得0、2。培养基得质量控制培养基得质量控制 一般性状一般性状 -制成平板或分装于试管得培养基应检查制成平板或分装于试管得培养基应检查;容器和盖容器和盖 子得破裂子得破裂,装量。装量。-固体培养基因水分流失而造成表面产生裂缝或涟漪。固体培养基因水分流失而造成表面产生裂缝或涟漪。-其她其她 如溶血如溶血,可能冷藏温度下形成得结晶可能冷藏温度下形成得结晶,大量得大量得 汽泡汽泡,微生物污染微生物污染,氧化还原指示剂得状况氧化还原指示剂得状况,批数批数 量和有效期得检查和记录量和有效期得检查和记录,培养基得无菌检查等。培养基得无菌检查等。培养基得质量控制培养基得质量控制 -液体培养基应观察培养基得颜色液体培养基应观察培养基得颜色,就是否有沉淀就是否有沉淀,微生物污染微生物污染,氧化还原指示剂得状况氧化还原指示剂得状况,批数量批数量 和有效期得检查和记录等。和有效期得检查和记录等。培养基得质量控制 培养基得促生长和抑制性能试验培养基得促生长和抑制性能试验 无菌检查用培养基无菌检查用培养基 使用前应进行适用性试验使用前应进行适用性试验 适用性试验适用性试验 无菌性试验无菌性试验 灵敏度检查灵敏度检查 培养基得质量控制培养基得质量控制 培养基得灵敏度检查培养基得灵敏度检查 菌种菌种 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26 003 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 CMCC(B)10 104 枯草芽胞杆菌枯草芽胞杆菌 CMCC(B)63 501 生孢梭菌生孢梭菌 CMCC(B)64 941 白色念珠菌白色念珠菌 CMCC(F)98 001 黑曲霉黑曲霉 CMCC(F)98 003 灵敏度检查培养基接种量灵敏度检查培养基接种量试验菌试验菌 培养温度培养温度 培养基培养基 培养时间培养时间 接种管数接种管数 装装 量量 ()(天天)(支支)(支支)金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 3035 硫乙醇酸盐流体硫乙醇酸盐流体 3 2 12 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌 3 2 12 生孢梭菌生孢梭菌 3 2 12白色念珠菌白色念珠菌 2328 改良马丁改良马丁 5 2 9黑曲霉黑曲霉 3 9 每种菌液接种量含菌小于每种菌液接种量含菌小于100cfu 同时做同时做1支空白对照支空白对照 培养基得质量控制培养基得质量控制 培养基得质量控制培养基得质量控制 结果判定结果判定 空白对照管应无菌生长。空白对照管应无菌生长。-若加菌得培养基管均生长良好若加菌得培养基管均生长良好,判该培养基得灵敏度判该培养基得灵敏度 检查符合规定。检查符合规定。-若加菌得培养基管不生长或生长不好若加菌得培养基管不生长或生长不好,判培养基得灵判培养基得灵 敏度检查不符合规定敏度检查不符合规定,不能用于无菌试验不能用于无菌试验,并寻找造并寻找造 成不合格得原因。成不合格得原因。培养基得适用性检查可在供试品得无菌检查前或与供培养基得适用性检查可在供试品得无菌检查前或与供 试品得无菌检查同时进行。试品得无菌检查同时进行。微生物限度检查微生物限度检查(计数培养基计数培养基)培养基得适用性检培养基得适用性检查查 微生物限度检查微生物限度检查(计数培养基计数培养基)使用前应进行适用性试验使用前应进行适用性试验,适用性试验包括促生长、抑制及指示能力检查。适用性试验包括促生长、抑制及指示能力检查。培养基得适用性检查菌种大肠埃希菌 CMCC(B)26003金黄色葡萄球菌 CMCC(B)26003枯草芽孢杆菌 CMCC(B)63501 白色念珠球菌 CMCC(B)98001黑曲霉 CMCC(F)98003 培养基得适用性检查培养基得适用性检查 检查方法 菌种 培养基 加入菌数 培养温度 培养时间 (cfu)()(h)大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌 营养琼脂 50100 3035 48 枯草芽孢杆菌 黑曲霉 玫瑰红钠琼脂 50100 2328 72 白色念珠球菌 白色念珠球菌 酵母浸出粉胨 50100 2328 72 葡萄糖琼脂 培养基得适用性检查培养基得适用性检查 -菌悬液制备后在室温下放置应在菌悬液制备后在室温下放置应在2小时内使用。小时内使用。-保存在保存在28可以在可以在24小时内使用。小时内使用。-黑黑曲曲霉霉孢孢子子悬悬液液可可保保存存在在 28,在在验验证证过过 得得贮存期内使用。贮存期内使用。结果判定结果判定 被被检检培培养养基基上上得得菌菌落落平平均均数数不不得得小小于于对对照照培培养养基基菌菌落落平平均均数数得得70%,且且菌菌落落形形态态、大大小小应应与与对对照照培培养养基基上上得菌落一致。判该培养基得适用性检查符合规定。得菌落一致。判该培养基得适用性检查符合规定。控制菌检查用培养基得适用性检查控制菌检查用培养基得适用性检查控制菌检查用培养基得促生长、抑制及指示能力检查控制菌检查 培养基 特性 试验菌株大肠埃希菌大肠埃希菌 胆盐乳糖胆盐乳糖 促生长能力促生长能力 大肠埃希菌大肠埃希菌 抑制能力抑制能力 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 MUG 促生长能力促生长能力+指示能力指示能力 大肠埃希菌大肠埃希菌 曙红亚甲蓝曙红亚甲蓝 或麦康凯或麦康凯 促生长能力促生长能力+指示能力指示能力 大肠埃希菌大肠埃希菌大肠菌群大肠菌群 乳糖胆盐乳糖胆盐 促生长能力促生长能力 大肠埃希菌大肠埃希菌 抑制能力抑制能力 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌 乳糖发酵乳糖发酵 促生长能力促生长能力+指示能力指示能力 大肠埃希菌大肠埃希菌 曙红亚甲蓝曙红亚甲蓝 或麦康凯或麦康凯 促生长能力促生长能力+指示能力指示能力 大肠大肠埃希菌埃希菌