癌侵袭与转移机理.ppt

癌侵袭和转移机理癌侵袭和转移机理研究进展研究进展东南大学医学院病理学系概述肿瘤（Tumor）是当前危害人类健康最严重的常见病、多发病之一。全世界现患者3710万，700万人死于肿瘤/年.我国约90万。在欧美一些国家，恶性肿瘤的死亡率仅次于心血管疾病而居第二位。2019年资料报道，肿瘤已成为我国城市人口死亡的第一原因。肿瘤的侵袭和转移是肿瘤发生肿瘤的侵袭和转移是肿瘤发生和演进过程中最危险阶段和演进过程中最危险阶段。临床肿瘤患者约临床肿瘤患者约80%以上死于侵以上死于侵袭和转移。侵袭和转移是肿瘤的袭和转移。侵袭和转移是肿瘤的恶性标志，侵袭多发生于肿瘤晚恶性标志，侵袭多发生于肿瘤晚期（早期也可见侵袭现象），而期（早期也可见侵袭现象），而转移往往是肿瘤发展到最终阶段转移往往是肿瘤发展到最终阶段。肿瘤转移与肿瘤转移与微生态系统微生态系统转移（转移（metastasis）是由多步骤侵袭发展而形）是由多步骤侵袭发展而形成的。当在肿瘤转移的每一步骤，所到达该成的。当在肿瘤转移的每一步骤，所到达该部位的瘤细胞都要开始建立新的微生态系统部位的瘤细胞都要开始建立新的微生态系统（icroecosystem）,这种微生态系统对肿瘤这种微生态系统对肿瘤侵袭起框架作用。在侵袭的微生态系统中涉侵袭起框架作用。在侵袭的微生态系统中涉及到多种成分的相互作用。及到多种成分的相互作用。肿瘤细胞的侵袭和转移过程是一个多步骤、肿瘤细胞的侵袭和转移过程是一个多步骤、多因素、多功能相互作用的连续或断续的复多因素、多功能相互作用的连续或断续的复杂过程。杂过程。癌细胞侵袭和转移的相关概念癌细胞侵袭和转移的相关概念（一）癌细胞具有独特的生物学特征（一）癌细胞具有独特的生物学特征 癌细胞生长的自主性（癌细胞生长的自主性（autonomy）；）；可移植性（可移植性（transplantability）；）；侵袭性和转移性（侵袭性和转移性（invasiveness/metastazis）去分化或异常分化（去分化或异常分化（dediferentiation）；）；细胞接触抑制（细胞接触抑制（contact inhibition）丧失；）丧失；细胞密度依赖性（细胞密度依赖性（density-dependent）抑制丧失）抑制丧失 贴壁依赖性贴壁依赖性（anchoragedependent）生长丧）生长丧失失癌细胞侵袭和转移的相关概念癌细胞侵袭和转移的相关概念（二二）什什么么叫叫癌癌细细胞胞侵侵袭袭？癌癌细细胞胞离离开开其其原原发发灶灶组组织织而而侵侵犯犯至至邻邻近近组组织织 ，并并在在该该处处继继续续繁繁殖殖生生长长，这这个个过过程程成成为为侵侵袭袭。其其包包括三个方面内容：括三个方面内容：侵侵袭袭的的癌癌细细胞胞占占据据邻邻近近组组织织，但但并并未未与与原原瘤瘤灶脱离；灶脱离；癌癌细细胞胞占占据据邻邻近近组组织织的的同同时时使使宿宿主主组组织织发发生生破坏；破坏；占占据据和和宿宿主主组组织织的的变变化化在在时时间间和和空空间间上上均均是是进行性的。进行性的。癌细胞侵袭和转移的相关概念癌细胞侵袭和转移的相关概念（三三）什什么么叫叫癌癌细细胞胞转转移移？癌癌细细胞胞从从原原发发灶灶扩扩散散至至继继发发部部位位，并并在在该该处处形形成成继继发发瘤瘤，这这个个过过程程成成为为转移转移。其包括三个内容：。其包括三个内容：癌细胞在远隔部位形成与原发瘤相同的肿瘤癌细胞在远隔部位形成与原发瘤相同的肿瘤 继发瘤继续长大继发瘤继续长大 继发瘤可继续再转移或再浸润，即癌细胞呈继发瘤可继续再转移或再浸润，即癌细胞呈 不连续性扩散不连续性扩散 肿瘤转移过程，即癌细胞进入淋巴管和肿瘤转移过程，即癌细胞进入淋巴管和血管后血管后，如何在淋巴流和血流中运行？如何在淋巴流和血流中运行？如何与如何与淋巴淋巴/血管内皮黏附？血管内皮黏附？如何穿过管壁的基底膜？如何穿过管壁的基底膜？如何在远隔距离部位或器官内形成继发如何在远隔距离部位或器官内形成继发瘤等瘤等？肿瘤细胞浸润和转移相关因素及肿瘤细胞浸润和转移相关因素及其作用机制的研究其作用机制的研究肿肿瘤瘤实实体体内内存存在在异异质质性性（hetorogeneous）已已被被证证实实，即即 在在 同同 一一 瘤瘤 内内 不不 同同 潜潜 能能 的的 癌癌 细细 胞胞 亚亚 群群（subpopulation），包包括括具具有有不不同同侵侵袭袭和和转转移移潜潜能能的的亚亚群群存存在在。侵侵袭袭和和转转移移潜潜能能的的癌癌细细胞胞也也与与一一般般瘤瘤细细胞胞有有明明显显差差别别，这这些些变变化化也也可可称称为为相相关关的的生生物物学学特特征征或或称称为为与与侵侵袭袭和和转转移移相相关关的的特特征征。目目前前，对对这这些相关特征研究有以下几方面：些相关特征研究有以下几方面：相当复杂的过程，受多种因素的影响相当复杂的过程，受多种因素的影响。瘤细胞侵袭、转移的过程 瘤细胞同质型粘附，瘤细胞同质型粘附，瘤细胞从原发灶脱离瘤细胞从原发灶脱离 瘤细胞与细胞外基质发生异质型粘附增加瘤细胞与细胞外基质发生异质型粘附增加细胞外基质降解。细胞外基质降解。肿瘤细胞运动性增强。肿瘤细胞运动性增强。在循环中运行，并逃避免疫系统识别与破坏在循环中运行，并逃避免疫系统识别与破坏到达继发部位后，新生血管形成、增殖到达继发部位后，新生血管形成、增殖 转移灶形成转移灶形成肿瘤细胞浸润和转移相关因素肿瘤细胞浸润和转移相关因素 及其作用机制的研究（一）及其作用机制的研究（一）肿瘤细胞表面电荷含量的研究肿瘤细胞表面电荷含量的研究肿瘤细胞表面电荷密度增高，可使癌细胞之间相关黏附力降低，即增加细胞间的静电排斥力，促使瘤细胞从瘤母体脱离的因素之一。细胞黏附机制与侵袭和转移关系黏附可分为黏附可分为:同质型黏附同质型黏附 异质型黏附异质型黏附 肿瘤肿瘤细胞浸润和转移相关因素及其作用机制的研究（二）细胞浸润和转移相关因素及其作用机制的研究（二）同质型黏附与癌细胞侵袭同质型黏附与癌细胞侵袭和转移的关系：和转移的关系：同质型同质型（homotypic）黏附黏附 指瘤细胞与瘤细胞之间的黏附，其主指瘤细胞与瘤细胞之间的黏附，其主要由细胞表面黏附分子（要由细胞表面黏附分子（Cell adhesion molecule，CAM）所介导。）所介导。CAM是维持是维持 细胞正常发育、生长及组织器官正常结构和功能的细胞正常发育、生长及组织器官正常结构和功能的一类重要分子。一类重要分子。细胞与细胞、细胞与细胞与细胞、细胞与ECM的规律性结合是形成正常的规律性结合是形成正常组织器官的必要条件。组织器官的必要条件。CAM：受体受体 配体配体 同质型粘附下降促使肿瘤细胞从瘤体同质型粘附下降促使肿瘤细胞从瘤体上脱落，所以上脱落，所以CAMCAM在肿瘤浸润和转移中在肿瘤浸润和转移中起重要作用起重要作用。E-cadherin（E-钙黏附素）钙黏附素）钙粘蛋白钙粘蛋白(cadherins)是钙依赖性跨膜糖蛋白，是一组是钙依赖性跨膜糖蛋白，是一组依赖细胞外依赖细胞外Ca2+的的CAM，通过同类或同分子亲和反，通过同类或同分子亲和反应相结合，介导应相结合，介导Ca2+依赖性细胞间的粘附，是依赖性细胞间的粘附，是细胞细胞细胞间细胞间的粘附分子。的粘附分子。钙粘蛋白家族分为钙粘蛋白家族分为3个亚类：个亚类：E-Cad：见于成熟上皮细胞（也称：见于成熟上皮细胞（也称L-CAM）N-Cad：存在于成熟神经组织及肌肉组织：存在于成熟神经组织及肌肉组织P-Cad：起初在胎盘及上皮基底层发现，后来发现在发育过程：起初在胎盘及上皮基底层发现，后来发现在发育过程 中其他组织也有短暂表达中其他组织也有短暂表达近来发现新的亚类，如内皮细胞钙粘蛋白和桥连粘近来发现新的亚类，如内皮细胞钙粘蛋白和桥连粘附蛋白附蛋白(desmoglein)，以及，以及V-Cad、M-Cad、B-Cad、R-Cad、T-Cad等。等。E-Cad与与肿肿瘤瘤浸浸润润、转转移移关关系系最最密密切切。许许多多研研究究证证实实E-Cad与肿瘤浸润、转移呈负相关。与肿瘤浸润、转移呈负相关。体外试验表明：体外试验表明：有有E-Cad表达的肿瘤细胞株无浸润性表达的肿瘤细胞株无浸润性浸润表型的肿瘤细胞株则无浸润表型的肿瘤细胞株则无E-Cad表达表达分化好的细胞分化好的细胞E-Cad表达正常表达正常分化差的细胞分化差的细胞E-Cad不表达不表达转染转染E-Cad可抑制肿瘤细胞的浸润与转移可抑制肿瘤细胞的浸润与转移其可通过促进同质型细胞间的黏附，使瘤细胞间保持其可通过促进同质型细胞间的黏附，使瘤细胞间保持密切接触，难以脱离原发病进入周围组织和器官。因此密切接触，难以脱离原发病进入周围组织和器官。因此认为认为E-cadherin属属侵袭抑制分子侵袭抑制分子异质型黏附与癌细胞侵袭和异质型黏附与癌细胞侵袭和转移的关系：转移的关系：异异质质型型黏黏附附 指指瘤瘤细细胞胞与与宿宿主主细细胞胞和和宿宿主主基基质质的的黏黏附附，其其主主要要也也是是由由黏黏附附分分子子所所介介导导完完成成。瘤瘤细细胞胞离离开开瘤瘤母母体体，侵侵袭袭到到基基底底膜膜或或穿穿过过基基底底膜膜就就遇遇到到基基质质及及宿宿主主细细胞胞，这这就就需需要异质型黏附。要异质型黏附。如如黑黑色色素素瘤瘤细细胞胞表表达达ICAM（intercellular adhesion molecule），可可与与白白细细胞胞黏黏附附，有有利利于于调调动动瘤瘤细细胞胞在在血血管管内内聚聚集集及及穿穿出出血血管管壁壁。一一般般认认为为血血循循环环中中瘤瘤细细胞胞与与血血管管内内皮皮细细胞胞黏黏附是穿出血管第一事件。附是穿出血管第一事件。整合素整合素(integrins)是一组介导异质型粘附的细胞粘附分子。是一组介导异质型粘附的细胞粘附分子。整整合合素素是是由由、亚亚单单位位通通过过非非共共价价键键相相连连的的异异二二聚聚体体，是是一一类类细细胞胞表表面面糖糖蛋蛋白白，现现已已发发现现14种种亚亚单单位位和和11种种亚亚单单位位，可可形形成成20多多种种整整合合素素。整整合合素素的的配配体体是是型型、型型胶胶原原、层层LN、FN、vitronectin endotoxin ICAM-1 VCAM-1。其作用根据作用方式可分为其作用根据作用方式可分为3类：类：介导细胞与介导细胞与ECM的粘附反应的粘附反应介导细胞介导细胞细胞间粘附反应细胞间粘附反应既介导细胞既介导细胞细胞间又介导细胞细胞间又介导细胞ECM间的粘附反应间的粘附反应整合素的作用：整合素的作用：在肿瘤生长早期，降低癌细胞与在肿瘤生长早期，降低癌细胞与基底膜或基质蛋白的粘附反应，基底膜或基质蛋白的粘附反应，利于癌细胞从原发灶中释放出来利于癌细胞从原发灶中释放出来在细胞到达血循环后，癌细胞增在细胞到达血循环后，癌细胞增加整合素表达，有助于肿瘤的种加整合素表达，有助于肿瘤的种植和播散。植和播散。LN受体LN是基底膜的重要组成部分是基底膜的重要组成部分 癌细胞表面的癌细胞表面的LN受体受体 癌细胞穿过基底膜癌细胞穿过基底膜 基底膜中的基底膜中的LN配体配体80年年代代初初就就发发现现了了LN的的相相对对分分子子质质量量为为67000的受体能识别的受体能识别LN分子的分子的2链，链，研研究究证证实实了了LN受受体体能能促促进进瘤瘤细细胞胞的的粘粘连连性性和和移移动动性性，其其高高表表达达与与乳乳腺腺癌癌、肺肺癌癌、结结肠肠癌癌等等许许多肿瘤的浸润、转移能力呈多肿瘤的浸润、转移能力呈正正相关相关。CD44CD44及其变体及其变体CD44也也称称为为Hemes抗抗原原、细细胞胞外外基基质质受受体体(ECM-)，是是一一种种多多功功能能的的跨跨膜膜透明质酸受体，有透明质酸受体，有103种变体。种变体。CD44的功能：的功能：作为透明质酸盐受体；作为透明质酸盐受体；为淋巴细胞归巢分子；为淋巴细胞归巢分子；赋予肿瘤细胞转移潜能赋予肿瘤细胞转移潜能参与正常免疫应答参与正常免疫应答。CD44表达与肿瘤细胞浸润能力有密切关系。表达与肿瘤细胞浸润能力有密切关系。Culty等实验表明等实验表明：乳腺癌细胞：乳腺癌细胞CD44表达与其浸润能表达与其浸润能力呈正相关；力呈正相关；Guo等等：用：用ELISA法测定肿瘤病人血清法测定肿瘤病人血清中中CD44浓度，表明血清浓度，表明血清CD44浓度与肿瘤转移及肿瘤浓度与肿瘤转移及肿瘤增殖有关。增殖有关。用抗用抗CD44抗体阻断抗体阻断CD44的生物学作用，的生物学作用，可抑制可抑制肿瘤细胞的移动肿瘤细胞的移动、浸润浸润ECM及基底膜的能力及基底膜的能力。Guo等等用抗用抗CD44单克隆抗体（单克隆抗体（GKW A3）静脉注射可阻断肿）静脉注射可阻断肿瘤的生长与转移。实验显示：注射肿瘤细胞后瘤的生长与转移。实验显示：注射肿瘤细胞后40天解天解剖发现未治疗组约一半有转移形成（肺、肾、肾上腺、剖发现未治疗组约一半有转移形成（肺、肾、肾上腺、肝或腹膜），而用肝或腹膜），而用GKW A3治疗组无一例形成转移。治疗组无一例形成转移。提示：抗提示：抗CD44抗体在肿瘤浸润转移的治疗中有巨大潜抗体在肿瘤浸润转移的治疗中有巨大潜在用途。在用途。路易斯寡糖（SLEX）SLEX分布于粒细胞、单核细胞表面，分布于粒细胞、单核细胞表面，在肿瘤分布于上皮性肿瘤细胞表面如在肿瘤分布于上皮性肿瘤细胞表面如肺癌、胃癌、结肠癌等。肺癌、胃癌、结肠癌等。最近研究指出，肿瘤细胞表面唾液酸最近研究指出，肿瘤细胞表面唾液酸化的化的SLEX作为血管内皮细胞上的作为血管内皮细胞上的E选择素的配体，是结肠癌早期诊断、选择素的配体，是结肠癌早期诊断、癌浸润、预后不良的一个指标癌浸润、预后不良的一个指标。免疫球蛋白超家族（Ig-SF）Ig-SF：包包括括许许多多有有共共同同结结构构特特征征的的分分子子，这这一一结结构构包包含含110170个个氨氨基基酸酸组组成成的的79个个折折叠叠链链，每每个个单单位位在在两两条条链链之之间间由由二二硫硫键键连连接接形形成成稳稳定定复合物。复合物。Ig-SF大部分成员参与细胞间识别大部分成员参与细胞间识别免疫功能的分子（免疫功能的分子（MHA、CD4，CD8和和T细胞受体）细胞受体）神经发育（神经发育（NCAM、L1）白细胞交流（白细胞交流（ICAM1、VCAM1、PECAM1）信息传递（信息传递（CSF1受体、血小板源性生长因子受体）。受体、血小板源性生长因子受体）。（）癌胚抗原癌胚抗原 （CEA CEA）CEA是一种高度糖基化的细胞表面糖蛋白，CEA是Ig-SF的成员之一，是一种重要的细胞粘附分子其可能有细胞识别和相互作用的功能，CEA可增强肿瘤细胞与正常细胞间的结合。NCAMNCAM是一种同种亲和性钙依赖性细胞细胞粘附分子，起初表达于神经系统。NCAM在恶性发展过程中可能的机制是：涉及细胞生长的接触抑制。转化NCAM的细胞株丧失接触抑制，用抗NCAM抗体则可抑制肿瘤的生长。细胞浸润和转移相关因素及其作用机制的研究（三）细胞浸润和转移相关因素及其作用机制的研究（三）瘤细胞的运动性与侵袭和转移关系的研究瘤细胞的运动形式可分为两类：瘤细胞的运动形式可分为两类：（1）原原位位运运动动（stationary motility）-细细胞胞分分裂裂和和伸出伪足；伸出伪足；（2）异异位位运运动动（translocation motility）-瘤瘤细细胞胞从从瘤瘤组组织织表表面面脱脱离离下下来来后后，以以原原位位运运动动伸伸出出伪伪足足与与靶靶细细胞胞接接触触，开开始始向向细细胞胞之之间间间间隙隙运运动动，运运动动时时可可牵牵引细胞其它部位向前移动引细胞其它部位向前移动。细胞浸润和转移相关因素及其作用机制的研究（四）细胞浸润和转移相关因素及其作用机制的研究（四）ECM 降解与瘤细胞侵袭和转移关系的研究降解与瘤细胞侵袭和转移关系的研究 细胞外基质（细胞外基质（extracellular matrix，ECM）【主主要要成成分分】由由各各型型胶胶原原、糖糖蛋蛋白白、蛋蛋白白多多糖糖和和氨氨基基葡聚糖等组成。葡聚糖等组成。【主主要要作作用用】ECM在在组组织织中中起起分分离离作作用用，并并能能动动态态地地调节组织细胞（包括肿瘤细胞）的代谢和行为。调节组织细胞（包括肿瘤细胞）的代谢和行为。大大量量实实验验证证明明：肿肿瘤瘤细细胞胞外外基基质质中中的的黏黏附附分分子子的的降降解解片片段段对对瘤瘤细细胞胞具具有有趋趋化化作作用用和和促促进进其其运运动动。瘤瘤细细胞胞侵侵袭袭和和转转移移能能力力与与其其产产生生或或诱诱导导产产生生降降解解ECM的的蛋蛋白白酶的能力密切相关。酶的能力密切相关。目目前前该该领领域域研研究究热热点点的的ECM降降解解有有关关的蛋白酶有：的蛋白酶有：（1）血血纤纤维维蛋蛋白白溶溶解解酶酶原原激激活活因因子子（plazminogen activator，PA）有有尿激酶型（尿激酶型（u-PA）和和组织型（组织型（t-PA）；（2）基基质质金金属属蛋蛋白白酶酶类类（matrix metalloproteinase，MMP）降解降解I、II、IV型胶原型胶原 此此外外尚尚发发现现强强有有力力的的MMP抑抑制制物物-金金属属蛋蛋白白酶酶组组织织抑抑制制物物（tissue inhibitor of metalloproteinase，TIMP）。肿瘤器官特异性转移与微环境（一）肿瘤器官特异性转移与微环境（一）肿瘤器官特异性转移的研究肿瘤器官特异性转移的研究：某种瘤细胞在某器官内特异的微环境中方可发某种瘤细胞在某器官内特异的微环境中方可发生转移，其机制之一是器官本身的微环境具备对肿生转移，其机制之一是器官本身的微环境具备对肿瘤细胞增殖性生长必需的条件及器官产生的调节能瘤细胞增殖性生长必需的条件及器官产生的调节能力。目前有三种学说可解释转移与器官特异性：力。目前有三种学说可解释转移与器官特异性：（1）瘤细胞在靶器官毛细血管内坐床）瘤细胞在靶器官毛细血管内坐床 （2）转移的瘤细胞对靶器官中内皮细胞特异黏附）转移的瘤细胞对靶器官中内皮细胞特异黏附 （3）器官内产生的因子调节瘤细胞的生长。）器官内产生的因子调节瘤细胞的生长。肿瘤器官特异性转移与微环境（二）肿瘤器官特异性转移与微环境（二）原发实体瘤和微环境由于恶性实体瘤生长快由于恶性实体瘤生长快 原环境中产生缺氧和酸原环境中产生缺氧和酸性增高性增高 瘤细胞适应瘤细胞适应 调节细胞内外调节细胞内外pH及分及分泌血管生成因子（泌血管生成因子（VEGF等）等）刺激血管内皮细胞增刺激血管内皮细胞增殖和游走运动殖和游走运动 从而诱发新血管形成从而诱发新血管形成 利于瘤细胞生长，也为侵袭和转移奠定基础利于瘤细胞生长，也为侵袭和转移奠定基础。近年来研究结果提出肿瘤发展过程与宿主不同成近年来研究结果提出肿瘤发展过程与宿主不同成分间关系不仅限于免疫系统及微环境的关系，若肿瘤分间关系不仅限于免疫系统及微环境的关系，若肿瘤与宿主不同成分相互作用后，形成某一阶段的综合关与宿主不同成分相互作用后，形成某一阶段的综合关系系统，即成为肿瘤发展某阶段相对时间内的微生态系系统，即成为肿瘤发展某阶段相对时间内的微生态系统（系统（microecosystem）。）。癌细胞侵袭的微生态系统与癌转移癌细胞侵袭的微生态系统与癌转移 肿瘤微生态系统基本组成肿瘤微生态系统基本组成癌细胞、宿主细胞、ECM微微生生态态系系中中各各种种成成分分之之间间连连接接的的交交互互沟沟通通（cross-talks）和和调调节节是是必必需需的的，瘤瘤细细胞胞是是启启动动侵侵袭袭的的微微生生态态系系统统中中主主要要因因素素肿瘤转移过程中有多个侵袭微肿瘤转移过程中有多个侵袭微生态系统生态系统 肿肿瘤瘤形形成成原原发发瘤瘤后后，继继续续发发展展，瘤瘤细细胞胞从从瘤瘤母母体脱离体脱离 邻近组织侵袭邻近组织侵袭 侵入管壁侵入管壁瘤瘤细细胞胞 淋淋巴巴管管 淋淋巴巴结结 淋淋巴巴管管 第二级淋巴结第二级淋巴结 血管血管 大循环。大循环。侵侵袭袭的的癌癌细细胞胞 血血流流或或淋淋巴巴流流 特特异异性性器官或部位穿出管壁进入组织形成转移灶器官或部位穿出管壁进入组织形成转移灶 肿瘤细胞肿瘤细胞 侵袭侵袭 转移转移 再侵袭再侵袭 再转移再转移 形成一个连续又可相对独立的多个微生态系统，形成一个连续又可相对独立的多个微生态系统，组成一个组成一个转移链转移链。瘤细胞从原发部位经脱离到转移灶。瘤细胞从原发部位经脱离到转移灶形成，基本可分为两大形成，基本可分为两大微生态系统微生态系统 原发瘤部位侵袭的微生态系统原发瘤部位侵袭的微生态系统 远处转移部位侵袭的微生态系统远处转移部位侵袭的微生态系统 淋巴道转移部位侵袭微生态系统淋巴道转移部位侵袭微生态系统 血管转移部位侵袭微生态系统血管转移部位侵袭微生态系统结语结语 癌癌细细胞胞的的侵侵袭袭和和转转移移过过程程是是一一个个多多步步骤骤、多多因因素素、多多功功能能相相互互作作用用的的连连续续或或断断续续的的复复杂杂过过程程。因因此此，今今后后的的研研究究原原则则：从从易易到到难难、由由简简到到繁繁、由由体体外外到到体体内内、由由整整体体到到细细胞胞、由由细细胞胞到到分分子子，再再由由分分子子到到细细胞和整体相结合进行验证。胞和整体相结合进行验证。