枸杞多糖对绝经后骨质疏松患者肠道菌群结构及短链脂肪酸的影响.pdf

微循环学杂 志,():C C H I N E S EJ O U R N A LO FM I C R O C I R C U L A T I O Nd o i:/j i s s n 微循环学杂 志 年第 卷第期基础与实验枸杞多糖对绝经后骨质疏松患者肠道菌群结构及短链脂肪酸的影响卓嘉璐李子祥杨宁高明波钱春花韩婷,中图分类号R 文献标识码A 文章编号 ()【摘要】目的:分析枸杞多糖对绝经后骨质疏松患者肠道菌群结构和短链脂肪酸的影响.方法:通过人体肠道微生物系统模拟装置(S H I ME),构建T r i p l e S H I ME模拟近端结肠和远端结肠,分别接种名绝经后骨质疏松症患者粪便样本,待稳定期后添加枸杞多糖(g/L)连续干预周.分别于稳定期第周(S w)、治疗期的第周和第周(T w,T w)收集反应器中发酵液进行 Sr R NA基因测序和序列分析,分析菌群结构.利用液相色谱串联质谱检测体外发酵液中短链脂肪酸的浓度变化.结果:与稳定期第周取样结果相比,枸杞多糖干预后的发酵液放线菌门的相对丰度呈降低趋势,变形菌门的相对丰度呈上升趋势.乳杆菌属显著增殖(P ),尤其在近端结肠中富集.总短链脂肪酸、乙酸、丙酸、和丁酸水平在枸杞多糖干预后显著高于稳定期(P ).结论:枸杞多糖可能通过调整肠道菌群结构,促进绝经后骨质疏松患者短链脂肪酸的生成,为临床进一步研究提供理论依据.【关键词】绝经后骨质疏松症;枸杞多糖;人体肠道微生态系统模拟装置;短链脂肪酸E f f e c t so fL y c i u mB a r b a r u mP o l y s a c c h a r i d e so nI n t e s t i n a lF l o r aa n dS h o r t c h a i nF a t t yA c i d s i nP a t i e n t sw i t hP o s t m e n o p a u s a lO s t e o p o r o s i sZ HUOJ i a l u,L IZ i x i a n g,YANG N i n g,GAO M i n g b o,Q I AN C h u n h u a,HAN T i n g,D e p a r t m e n to fC l i n i c a lN u t r i t i o n,D e p a r t m e n to fE n d o c r i n o l o g ya n d M e t a b o l i s m;S h a n g h a iT e n t hP e o p l e s H o s p i t a l,T o n g j i U n i v e r s i t y S c h o o lo f M e d i c i n e,S h a n g h a i ,C h i n a;C o r r e s p o n d i n ga u t h o r【A b s t r a c t】O b j e c t i v e:T oi n v e s t i g a t et h ee f f e c t so fL y c i u mb a r b a r u mp o l y s a c c h a r i d e(L B P)o nt h e i n t e s t i n a lf l o r as t r u c t u r ea n ds h o r t c h a i nf a t t ya c i d s i np o s t m e n o p a u s a l o s t e o p o r o s i sp a t i e n t s M e t h o d:T r i p l e S H I MEs i m u l a t e dp r o x i m a lc o l o na n dd i s t a lc o l o n w e r ec o n s t r u c t e db ys i m u l a t o ro fh u m a ni n t e s t i n a l m i c r o b i a le c o s y s t e m(S H I ME),i n o c u l a t e dw i t hf e c a ls a m p l e sf r o mPMOp a t i e n t sr e s p e c t i v e l y,a n dt h e ns u p p l e m e n t e dw i t hL B P s(g/L)f o rw e e k sa f t e r t h es t a b l ep e r i o d Sr R NAg e n es e q u e n c i n ga n ds e q u e n c ea n a l y s i sw e r ep e r f o r m e do nt h e f e r m e n t a t i o nb r o t hc o l l e c t e d f r o mt h e r e a c t o r a t t h e n dw e e ko f t h e s t a b l e s t a g e(S w)a n d t h e s t a n d n dw e e ko f t h e t r e a t m e n t s t a g e(T w,T w),r e s p e c t i v e l y T h e c o n c e n t r a t i o no f s h o r t c h a i n f a t t ya c i d s i n f e r m e n t a t i o nb r o t hi nv i t r ow a sd e t e r m i n e db y l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y t a n d e mm a s s s p e c t r o m e t r y R e s u l t s:C o m p a r e dw i t ht h es a m p l i n gr e s u l t sa t t h e n dw e e ko fs t a b l ep e r i o d,t h er e l a t i v ea b u n d a n c eo fA c t i n o b a c t e r i at e n d e dt od e c r e a s e da n dt h a to fP r o t e o b a c t e r i a i n c r e a s e d L a c t o b a c i l l u ss p p p r o l i f e r a t e ds i g n i f i c a n t l y,e s p e c i a l l ye n r i c h e di nt h ep r o x i m a lc o l o n T h e l e v e l so f t o t a l s h o r t c h a i nf a t t ya c i d s,a c e t i ca c i d,p r o p i o n i ca c i da n db u t y r i ca c i dw e r e s i g n i f i c a n t l yh i g h e r a f t e rt h e i n t e r v e n t i o no fL B P s(P )C o n c l u s i o n:L B Pp r o m o t et h ep r o d u c t i o no fs h o r t c h a i nf a t t ya c i d s i np o s t m e n o p a u s a l o s t e o p o r o s i sp a t i e n t sb ya d j u s t i n g t h e s t r u c t u r e o f i n t e s t i n a l f l o r a T h e s e r e s u l t sp r o v i d e a t h e o r e t i c a l b a s i s 基金项目上海市卫生健康委老龄化和妇儿健康研究专项课题(Y J Z X )作者单位同济大学附属第十人民医院,上海 ;临床营养科;内分泌代谢科;通讯作者,E m a i l:l c y y k y c o m本文 收到,修回f o r f u r t h e r c l i n i c a l r e s e a r c h【K e yw o r d s】P o s t m e n o p a u s a l o s t e o p o r o s i s;L y c i u mb a r b a r u m;S i m u l a t o ro fh u m a n i n t e s t i n a lm i c r o b i a l e c o s y s t e m;S h o r t c h a i nf a t t ya c i d微循环学杂 志 年第 卷第期基础与实验绝经后骨质疏松症(P o s t m e n o p a u s a lO s t e o p o r o s i s,PMO)是一类由雌激素缺乏引起的全身性代谢性骨病,其特征为进行性全身性骨密度降低和骨组织微结构改变,易引起骨折或全身骨痛,从而导致疼痛、畸形甚至死亡等不良临床结局.据统计,我国 的绝经后妇女都患有骨质疏松症,且其发病率呈逐年上升趋势,严重损害了中老年妇女的身体健康及生活质量,现已成为亟待解决的临床问题之一.肠道菌群被认为是机体一个重要的“特殊器官”,菌群种类的动态平衡和变化在维持人体健康中起着至关重要的作用.近年研究表明,PMO患者的肠道微生物群组成发生变化,包括丰富度和多样性下降、有益菌及致病菌比例失调等,认为肠道菌群失调与机体骨密度调控相关,可能是干预PMO的新靶点.益生元是一种由肠道菌群发酵、耐胃酸和水解酶而不被肠道消化吸收的食物成分.现有的证据表明,益生元对骨代谢具有调节作用,可使肠道菌群中的有益菌代谢更多的短链脂肪酸(S h o r t c h a i nF a t t yA c i d s,S C F A s),而S C F A s是破骨细胞新陈代谢和骨质的有力调节者.益生元还可调节免疫系统,影响钙吸收和转化、促进骨的形成和骨矿化、增加骨 密 度,改 善 骨 质 疏 松.枸 杞 多 糖(L y c i u mB a r b a r u mP o l y s a c c h a r i d e s,L B P s)是一种潜在的益生元,有利于增强肠道微生物群的活性.已有研究表明枸杞多糖具备潜在益生元的作用,不仅能够改善机体免疫功能及氧化应激引起的全身炎症反应,而且还能通过其生物活性影响肠道菌群和代谢产物,在调节肠道微环境、改善宿主健康和靶向肠道效应方面具有积极影响.但鲜有研究报道枸杞多糖在骨质疏松症的预防和辅助治疗中的作用,尤其是枸杞多糖对骨质疏松症肠道微生态的系统性研究还缺乏相关数据.人体肠道微生态系统模拟装置(S i m u l a t o ro fH u m a nI n t e s t i n a lM i c r o b i a lE c o s y s t e m,S H I ME)是比利时根特大学设计的一套包含胃、小肠以及大肠的完整模拟消化系统,能够有效模拟人体的消化及肠道微生态环境,是研究体外胃肠道不同部位对肠道 菌 群 组 成 影 响 的 有 效 工 具.本 研 究 拟 应 用S H I ME模拟人体消化系统,使用枸杞多糖对其进行干预,检测并分析系统产出的发酵液,研究枸杞多糖对PMO患者肠道菌群及其代谢产物S C F A s的影响,从而进一步探讨枸杞多糖对预防与治疗骨质疏松的作用机理.材料与方法 试验试剂枸杞多糖(上海源叶生物科技有限公司);标准品:乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、异丁酸、异戊酸(美国S i g m a公 司).S H I ME的 营 养 培 养 基 批 号 为P D NM B(P r o D i g e s t,G h e n t,B e l g i u m),由阿拉伯半乳聚糖(g/L)、果胶(g/L)、木聚糖(g/L)、葡萄糖(g/L)、酵母提取物(g/L)、蛋白胨(g/L)、粘蛋白(g/L)、L 半胱氨酸盐酸盐(g/L)和淀粉(g/L)组成.胰液含有碳酸氢钠(g/L)、牛胆汁(g/L)、胰蛋白酶(g/L).粪便供体粪便供体为上海第十人民医院进行住院治疗的PMO患者例,纳入标准:()年龄 岁,绝经妇女;()近个月内无抗生素治疗史;()未接受过膳食补充剂(钙、维生素D)、益生菌、益生元治疗;()无慢性或自身免疫性疾病史(例如消化道疾病、肾脏疾病、肝脏疾病,心血管疾病、甲状旁腺疾病).本研究按照 赫尔辛基宣言 规定的指导方针进行,所有涉及人类受试者的程序均经上海第十人民医院伦理委员会批准(批准文号:K T ),所有受试者在纳入研究前均获得书面知情同意.粪便样本的采集和处理清晨采集患者的中间段新鲜粪便,尽量避免尿液、灰尘等污染.称取新鲜粪便,加入厌氧磷酸盐缓冲溶液(MP B S,p H)配制成(w/v)的粪便悬液,涡旋仪上混匀 s,静置 m i n后取上层溶液进行离心(、r/m i n、m i n),收集离心后的上层溶液进行体外模拟发酵实验.S H I ME使用S H I ME(P r o D i g e s t,U n i v e r s i t yo fG h e n t,G h e n t,B e l g i u m)评估长期摄入枸杞多糖对肠道微生物群的影响.本研究使用T r i p l e S H I ME设置,由三个独立的S H I ME系统并行运行,每个系统包括 三 个 连 续 反 应 器,分 别 为 胃/小 肠 反 应 器卓嘉璐,李子祥,杨宁,等(S t o m a c h/S m a l lI n t e s t i n a l,S T/S I)、近 端 结 肠(P r o x i m a lC o l o n,P C)和远端结肠(D i s t a lC o l o n,D C)反应器.P C和D C反应器保持恒定体积,分别为 m l和 m l,p H值控制在固定范围内(P C为 和D C为 ).微循环学杂 志 年第 卷第期基础与实验实验开始时,将粪便接种液(w/v)以(v/v)的体积分别接种于两个结肠反应器.初始静态发酵 h后,将 m l S H I ME营养培养基(次/天)和 m l胰液(次/天)泵入S T/S I反应器中,然后将反应器内混合物泵入P C和D C,多余的液体被泵到废液容器中.实验期间所有反应器都是密闭的,在 下连续搅拌并用氮气冲洗以保持厌氧环境.S H I ME运行包括个阶段:第一阶段为稳定期(S).模型中添加营养培养基,经过两周的时间(S w、S w),粪便微生物群适应两个结肠区域的环境条件,并达到稳定状态.第二阶段为治疗期(T),为期周(T w、T w),在营养培养基中以 g/L的剂量添加枸杞多糖(根据前期团队的剂量学研究结果,枸杞多糖添加量为 g/L时降解率最高).从P C和D C反 应 器 采 集 样 本,包 括 稳 定 期 第周(S w,D a y ),治疗期的第周(T w,D a y )和第周(T w,D a y ),用于后续检测.实验设计见图.图体外发酵的实验设计和示意图 S C F A s检测利用液相色谱串联质谱(L C M S/M S)检测体外发酵液中S C F A s的浓度.()色谱条件:采用A C QU I T Y U P L C B EH C 色谱柱(mm mm,m,W a t e r s,U S A),柱温,流动相A为 甲酸水溶液,流动相B为乙腈:甲醇(,v/v),进行梯度洗脱(m i n,A;m i n,A A;m i n,AA;m i n,A A),流动相流速为 m l/m i n,进样量为l.()质谱条件:采用多反应离子监测(M u l t i p l eR e a c t i o n M o n i t o r i n g,MRM),电喷雾离子源(E S I),正 负 离 子 模 式,正 离 子 喷 雾 电 压:V;负 离 子 喷 雾 电 压:V,离 子 源 温 度 ,气 帘 气 p s i,雾 化 气 p s i,加 热 辅 助 气 p s i.()样品处理:取 l 中采集的样品至离心管中,加入 l 乙腈水溶液,涡旋 m i n,离心(m i n,r p m),取 l上清至离心管中,再加入 l mM N P H(乙腈水溶液配置,v/v)和 l mM E D C 吡啶(乙腈水溶液 配 置,v/v),下 反 应 m i n,反 应 后 取 l进行氮吹,l乙腈水溶液()复溶,过滤(m的有机滤膜)后转移到棕色进样瓶,上机分析.分别配制乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸、异丁酸、异戊酸标准品的系列浓度梯度,定量分析后绘制标准曲线,用于待测样本S C F A s的计算.Sr R NA基因测序和序列分析采用D NA抽 提 试 剂 盒 提 取 样 本 的 基 因 组D NA,利用琼脂糖凝胶电泳检测D NA的纯度和浓度,以基因组D NA为模板,选取 S区域中V V 区作为扩增区域,使用带b a r c o d e的特异引物,T a k a r a公司的T k sG f l e xD NAP o l y m e r a s e进行两轮P C R扩增,上游引物序列为T A CG G RAG GC AGC AG ,下游引物 序列为AG G G T AT C TAAT C C T .对P C R产物进行Q u b i t定量.根据P C R产物浓度进行等量混样,使用I l l u m i n aM i S e q平台进行高通量测序(上海欧易生物医药科技有限公司).由I l l u m i n aM i S e q平台测序所得原始数据为F A S T Q格式.首先使用C u t a d a p t软件对原始双端序列进行去杂处理.然后使用D A D A 将去杂处理后的双端系列按照Q I I ME()默认参数进行质量过滤,降噪,拼接及去嵌合体等质控分析,得到代表序列及A S V丰度表格,将所有代表性序列与S i l v a(v e r s i o n )数据库进行比对注释.基于物种注释结果,进行 多样性指数分析,包括S h a n n o n指数、S i m p s o n指数、C h a o 指数和A C E指数等.多样性分析是微生物多样性分析中一个重要的组成部分,C h a o 和A C E指数能够反映菌群丰度,枸杞多糖对绝经后骨质疏松患者肠道菌群结构及短链脂肪酸的影响S h a n n o n和S i m p s o n指数则说明群落中个体分配的均匀度,即多样性.采用B r a y C u r t i s的主坐标分析(P r i n c i p a lC o o r d i n a t e sA n a l y s i s,P C o A)对样品间微生物群落的结构变异(多样性指数)进行展示.统计学处理实验所有数据以均数标准差(xs)表示,并用G r a p h P a dP r i s m和S P S S 软件进行作图和数据分析.组间差异分析采用单因素方差分析及F i s h e rsL S D多重比较法,P 为差异有统计学意义.结果 发酵液中的细菌物种鉴定及菌群结构分析门水平群落结构面积图如图所示.优势菌门为厚壁菌门(F i r m i c u t e s)、拟杆菌门(B a c t e r o i d o t a)、变形菌门(P r o t e o b a c t e r i a)及放线菌门(A c t i n o b a c t e r i a).经过枸杞多糖干预后,放线菌门的相对丰度呈降低趋势,变形菌门的相对丰度呈上升趋势,但由于患者间存在个体差异性,在患者中尤为显著.在科水平上,枸杞多糖降低了L a c h n o s p i r a c e a e和R u m i n o c o c c a c e a e的丰度(图).微循环学杂 志 年第 卷第期基础与实验注:A、B和C分别代表三例患者样本.A、B、C:稳定期(S w)P C样本;A、B、C:稳定期(S w)D C样本;A 、B 、C :治疗期(T w)P C样本;A 、B 、C :治疗期(T w)D C样本;A 、B 、C :治疗期(T w)P C样本;A 、B 、C :治疗期(T w)D C样本.图门水平群落水平面积图注:A、B和C分别代表三例患者样本.A、B、C:稳定期(S w)P C样本;A、B、C:稳定期(S w)D C样本;A 、B 、C :治疗期(T w)P C样本;A 、B 、C :治疗期(T w)D C样本;A 、B 、C :治疗期(T w)P C样本;A 、B 、C :治疗期(T w)D C样本.图科水平物种组成热图卓嘉璐,李子祥,杨宁,等属水平物种组成分布如图所示.例患者个体差异较大,枸杞多糖干预对近端和远端结肠的菌群结构影响较大,共有的菌属主要为大肠志贺氏杆菌属、拟杆菌属、双歧杆菌属、萨特氏菌属、小杆菌属.乳杆菌属在患者中显著增殖,尤其在患者近端结肠中富集.注:A、B和C分别代表三例患者样本.A、B、C:稳定期(S w)P C样本;A、B、C:稳定期(S w)D C样本;A 、B 、C :治疗期(T w)P C样本;A 、B 、C :治疗期(T w)D C样本;A 、B 、C :治疗期(T w)P C样本;A 、B 、C :治疗期(T w)D C样本.图属水平物种组成热图微循环学杂 志 年第 卷第期基础与实验图G o o ds c o v e r a g e测序深度指数 多样性分析即本研究图结果显示,G o o dsc o v e r a g e指数趋近于,说明测序深度已能覆盖到样本中的所有物种,结果准确可靠.如图所示,远端结肠物种多样性较近端结肠丰富,在枸杞多糖干预一周后,物种多样性达到峰值,再随着干预时间降低,然而组间各多样性指数差异无统计学意义.多样性分析显示不同患者之间相互分离,说明组间微生物群的组成存在明显差异性(图).枸杞多糖对绝经后骨质疏松患者肠道菌群结构及短链脂肪酸的影响A:C h a o 指数;B:S h a n n o n指数;C:S i m p s o n指数;D:A C E指数.图 多样性分析箱形图图 多样性P C A分析 S C F A s含量变化分析如表所示,枸杞多糖治疗后,S C F A水平升高.枸杞多糖治疗均显著提高了结肠区域的乙酸水平(P ),且远端结肠中的乙酸含量增加最为明显.近端结肠和远端结肠用枸杞多糖干预后丙酸水平显著高于稳定期(P ).与稳定期相比,近端结肠和远端结肠的丁酸水平显著升高(P).与稳定期相比,枸杞多糖使结肠中总S C F A s水平显著升高(P ).讨论本研究使用的S H I ME人体肠道微生物生态模拟系统,是由比利时根特大学研制出来的一套包表枸杞多糖干预对近端和远端结肠中各S C F A s含量的影响(m g/m l)P C反应器S w T w T w F值D C反应器S w T w T w F值乙酸 )丙酸 )丁酸 )总S C F A s )注:与同反应器S w 时比较,)P ;与同反应器T w 时比较,)P 微循环学杂 志 年第 卷第期基础与实验卓嘉璐,李子祥,杨宁,等含胃、小肠以及大肠的完整模拟消化系统.此系统的设计着重于模拟结肠微生物群,具有稳定性好、采集样品方便、节省时间等优点 .肠道微生物群及其代谢产物(如短链脂肪酸)可维持骨骼健康和骨质量,其机制可能包括免疫作用、营养物质吸收、调节雌激素等.鉴于过往研究已证实枸杞多糖在上消化道中是不可消化的,并且可以被肠道微生物利用.且枸杞多糖的免疫调节作用已被广泛认识,其机制可能为增强肠粘膜免疫屏障的 完 整 性、调 节 肠 道 微 生 物 群 及 其 代 谢 产 物等.本研究发现,枸杞多糖影响PMO患者的肠道微生物群.通常来说,肠道菌群主要分为厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门和变形菌门,其中拟杆菌门和厚壁菌门占 以上.干预前,患者的优势菌门为厚壁菌门、变形菌门、及放线菌门.经过枸杞多糖干预后,整个微生物群落结构被调节,患者的放线菌门的相对丰度明显减少,变形菌门的相对丰度相对增加.毛螺菌科(L a c h n o s p i r a c e a e)属于厚壁菌门,属于厌氧菌,在体外和动物实验中发现,毛螺菌科通过使用膜锚定白介素(I L )受体降低肠道I L 水平来抑制骨再生和重塑.高剂量补充枸杞多糖显著降低毛螺菌科的丰度,这与本研究结果一致.L i等 发现毛螺菌科的丰度与骨密度及T 评分呈正相关.然而,不同研究报道了相互矛盾的结果,毛螺菌科与骨代谢的关系仍不一致,需要进一步功能研究来验证.本研究发现 多样性指数差异无统计学意义,这与L i等动物实验报道的结果一致,枸杞多糖干预对肠道菌群多样性和丰富度的影响不明显.多样性分析显示不同患者之间相互分离,也进一步说明组间微生物群的组成存在明显差异性.值得注意的是,在这一过程中,枸杞多糖使患者的乳酸杆菌显著增殖.虽存在个体差异性,但这些数据与其它研究发现的枸杞多糖可提高小鼠肠道中乳杆菌相对丰度的最新报道相是一致.乳杆菌在增强肠道上皮屏障功能、刺激肠道上皮增殖和抑制先天性炎症信号通路方面非常有效.动物实验表明,乳杆菌可改善骨的微结构及生物力学,并调节C T X I、P I N P、C a及R ANK L的表达,恢复T h /T r e g平衡,从而缓解卵巢切除大鼠的骨质疏松.本研究中部分患者乳酸杆菌显著增加,从一定程度上也提示在PMO女性患者中补充枸杞多糖可显著减少骨质流失,但未来需更大规模的临床试验进一步验证,并探讨相关机制.此外,乳酸菌也可利用枸杞多糖产生S C F A s.S C F A s已被证明可调节全身骨量,可对炎症反应产生影响,保护其免受病态骨质流失.为了进一步明确结果,本研究对肠道菌群的代谢产物也进行了分析.结果发现枸杞多糖的干预使肠道菌群代谢产物含量变化,具体表现为乙酸、丙酸、丁酸含量上升,而这些都是S C F A s的主要组成部分.S C F A s是肠道细菌从未消化的碳水化合物中产生的重要代谢产物,最新研究也观察到枸杞多糖的免疫调节作用通路背后的机制是潜在的免疫介导效应,通过调节肠道微生物群代谢产物.其中,有研究证实,丁酸可使小鼠肠道和骨髓中调节性T细胞(T r e g)增多,进而活化成骨细胞的Wn t信号通路,刺激骨生成.乙酸是主要的S C F A s,可被结肠上皮吸收,是骨、外周组织代谢的能量来源.本研究观察到,与稳定期相比,枸杞多糖被发酵成不同的S C F A s,提高了结肠内容物和粪便中S C F A s的总浓度,这表明摄入枸杞多糖可能对骨健康有益.这也与先前的研究报道一致.多项研究表明,多糖可作为益生菌代谢过程中的碳源,并分解成单糖,为益生菌提供能量,可增加S C F A s(如乙酸、丙酸和丁酸)的浓度.综上所述,本研究使用S H I ME模拟人体胃肠道,运用 m g/m l枸杞多糖进行干预,发酵液分析结果显示,枸杞多糖可能通过调整肠道菌群结构,促进S C F A s的生成,对骨健康产生一定影响,为临床进一步研究提供了理论依据.本文第一作者简介:卓嘉璐(),女,汉族,硕士,技师,研究方向:临床营养微循环学杂 志 年第 卷第期基础与实验参考文献J a g e l a v i c i e n eE,K r a s a u s k i e n eA,Z a l i n k e v i c i u sR,e t a l T h e r e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h ec a l c a n e a lb o n e m i n e r a ld e n s i t ya n dt h em e n t a li n d e xi np o s t m e n o p a u s a lf e m a l e sJD e n t o m a x i l l o f a cR a d i o l,():王嘉蕙,徐文婷,汤梦雨,等雌激素代谢相关的绝经后骨质疏松机制及中医 药研究进展J中 医药 学 报,():B r o d yH T h eg u tm i c r o b i o m eJN a t u r e,():枸杞多糖对绝经后骨质疏松患者肠道菌群结构及短链脂肪酸的影响S Y a n gX,C h a n gT,Y u a nQ,e t a l C h a n g e s i n t h e c o m p o s i t i o no fg u t a n dv a g i n a lm i c r o b i o t a i np a t i e n t sw i t hp o s t m e n o p a u s a l o s t e o p o r o s i sJ F r o n t I mm u n o l,:X uX,J i aX,M oL,e t a l I n t e s t i n a lm i c r o b i o t a:ap o t e n t i a l t a r g e t f o r t h et r e a t m e n to fp o s t m e n o p a u s a lo s t e o p o r o s i sJB o n eR e s,:L u c a sS,Om a t aY,H o f m a n nJ,e ta l S h o r t c h a i nf a t t ya c i d sr e g u l a t es y s t e m i cb o n em a s sa n dp r o t e c tf r o mp a t h o l o g i c a lb o n el o s sJN a tC o mm u n,():I b e zL,R o u l e a u M,W a k k a c hA,e ta l G u tm i c r o b i o m ea n db o n eJ J o i n tB o n eS p i n e,():F e n gY,S o n gY,Z h o uJ,e ta l R e c e n tp r o g r e s so f L y c i u mb a r b a r u m p o l y s a c c h a r i d e so ni n t e s t i n a lm i c r o b i o t a,m i c r o b i a lm e t a b o l i t e sa n dh e a l t h:ar e v i e wJC r i tR e vF o o dS c iN u t r,:L iJ,L iX,L e iW,e ta l S e r u m m e t a b o l o m i c sc o m b i n e dw i t h Sr R NAs e q u e n c i n gt or e v e a l t h ee f f e c t so fL y c i u mb a r b a r u mp o l y s a c c h a r i d eo nh o s tm e t a b o l i s ma n dg u tm i c r o b i o t aJ F o o dR e s I n t,:刘世锋,罗玉霜,刘佩琳,等黄芩提取物对人体肠道菌群及短链脂肪酸的影响J中国食物与营养,():C h e nP,C h e nX,H a oL,e ta l T h eb i o a v a i l a b i l i t yo fs o y b e a np o l y s a c c h a r i d e sa n dt h e i rm e t a b o l i t e so ng u tm i c r o b i o t ai nt h es i m u l a t o r o f t h e h u m a n i n t e s t i n a l m i c r o b i a l e c o s y s t e m(S H I ME)J F o o dC h e m,:G n a n a s e k a r a nT,A s s i sG e r a l d oJ,A h r e n k i e lDW,e ta l E c o l o g i c a l a d a p t a t i o na n ds u c c e s s i o no fh u m a nf e c a lm i c r o b i a l c o m m u n i t i e s i na na u t o m a t e d i nv i t r o f e r m e n t a t i o ns y s t e mJ m S y s t e m s,():e H eJ,X uS,Z h a n gB,e t a l G u tm i c r o b i o t aa n dm e t a b o l i t ea l t e r a t i o n sa s s o c i a t e dw i t hr e d u c e db o n em i n e r a ld e n s i t yo rb o n em e t a b o l i c i n d e x e si np o s t m e n o p a u s a lo s t e o p o r o s i sJA g i n g(A l b a n yNY),():X i a oZ,D e n gQ,Z h o uW,e ta l I mm u n ea c t i v i t i e so fp o l y s a c c h a r i d e s i s o l a t e df r o mL y c i u mb a r b a r u mLWh a td ow ek n o ws of a rJ P h a r m a c o lT h e r,:P r y s t a zK,K a i s e rK,K o v t u nA,e t a l D i s t i n c t e f f e c t so f I L c l a s s i ca n dt r a n s s i g n a l i n gi nb o n ef r a c t u r eh e a l i n gJAmJP a t h o l,():L i C,H u a n gQ,Y a n gR,e t a l G u tm i c r o b i o t a c o m p o s i t i o na n db o n e m i n e r a ll o s s e p i d e m i o l o g i ce v i d e n c ef r o m i n d i v i d u a l si nW u h a n,C h i n aJO s t e o p o r o sI n t,():N i J J,Y a n gX L,Z h a n gH,e t a l A s s e s s i n gc a u s a l r e l a t i o n s h i pf r o mg u tm i c r o b i o t at oh e e lb o n em i n e r a