高效液相色谱法测定尿通卡克乃其片中吗啡含量.pdf

2023 年 9 月 5 日 第 32 卷第 17 期Vol.32，No.17，September 5，2023China Pharmaceuticals尿通卡克乃其片（国药准字Z20080304，规格为每片 0.5 g）为维吾尔药制剂，由酸浆、黄瓜子、血竭、西黄蓍胶、阿拉伯胶、巴旦仁、甘草浸膏、乳香、芹菜子、阿片等组方，气微香，味甜、微苦涩，具有止痛、利尿功效，用于尿痛、尿不净、尿血、尿道流脓等症的治疗。阿片主要含有苄基异喹啉类和菲类生物碱1-2，前者主要为罂粟碱，后者包括吗啡、可待因、蒂巴因等。阿片主要成分为吗啡3，其为强效镇痛剂4，但成瘾性较大5。现行尿通卡克乃其片现收载于 国家食品药品监督管理局国家药品标准 YBZ00342008中，因干扰因素较多，无法准确对吗啡进行定量分析。为更好地控制尿通卡克乃其片的质量，本研究中采用高效液相色谱（HPLC）法6测定制剂中吗啡的含量。现报道如下。1仪器与试药1.1仪器LC-20A 型高效液相色谱仪（日本 Shimadzu 公司），配有紫外检测器，Labsolution工作站；Milli-Q型超纯水仪 美国Millipore公司，电阻率为18.2 Mcm，总有机碳（TOC）不大于 5 10-9g/L；XPR205 型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器 有限公司，精度为 0.1 mg）；SK8210LHC 型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司，功率为 500 W，频率为35/53 kHz）；Centrifuge5430R 型高速离心机（德国Eppendorf 公司，最大工作压力为 29 bar，最大转速为17 500 r/min）。*基金项目：国家药品（维药）标准提高课题 （2009）781。第一作者：周钢，男，大学本科，副主任药师，研究方向为药品检验，（电话）0991-4335037（电子信箱）。通信作者：陶虹，女，博士研究生，正高级实验师，研究方向为药物制剂质量控制，（电子信箱）。中图分类号：R932；R284.1；R286.0文献标志码：A文章编号：1006-4931（2023）17-0083-04doi:10.3969/j.issn.1006-4931.2023.17.020高效液相色谱法测定尿通卡克乃其片中吗啡含量*周钢1，2，马方圆1，单莲莲1，柴冰阳1，陶虹1，2，严华3（1.新疆维吾尔自治区药品检验研究院，新疆 乌鲁木齐830054；2.国家药品监督管理局中药 质量控制重点实验室，新疆 乌鲁木齐830054；3.中国药品生物制品检定研究院，北京100050）摘要：目的建立测定尿通卡克乃其片中吗啡含量的高效液相色谱法。方法色谱柱为岛津 Shim-pack GIST-C18柱（250 mm 4.6 mm，5 m），流动相为乙腈-0.05 mol/L 磷酸氢二钾溶液-0.025 mol/L 庚烷磺酸钠溶液（15 45 40，V/V/V），流速为 1.0 mL/min，检测波长为 220 nm，柱温为 35，进样量为 10 L。结果吗啡的质量浓度在 3.979198.950 g/mL 范围内与峰面积线性关系良好（r=0.999 9，n=6）；检测限为 1 g/mL，定量限为 3 g/mL；精密度、稳定性、重复性试验结果的 RSD 均小于 2.5%（n=6）；平均加样回收率为 102.77%，RSD 为 3.84%（n=9）。10 批样品中吗啡的平均含量为每片 0.32 mg。结论该方法操作简便、结果准确，可用于尿通卡克乃其片中吗啡的含量测定。关键词：尿通卡克乃其片；吗啡；高效液相色谱法；含量测定Content Determination of Morphine in Niaotongkakenaiqi Tablets by HPLCZHOU Gang1，2，MA Fangyuan1，SHAN Lianlian1，CHAI Bingyang1，TAO Hong1，2，YAN Hua3（1.Xinjiang Uygur Autonomous Region Drug Inspection and Research Institute，Urumqi，Xinjiang，China830054；2.NMPA Key Laboratory for QualityControl of Traditional Chinese Medicine Medicine，Urumqi，Xinjiang，China830054；3.National Institute for Food and Drug Control，Beijing，China100050）AbstractAbstract：ObjectiveTo establish a high-performance liquid chromatography（HPLC）method for the content determination ofmorphine in Niaotongkakenaiqi Tablets.MethodsThe chromatographic column was Shimadzu Shim-pack GIST-C18column（250 mm 4.6 mm，5 m），the mobile phase was acetonitrile-0.05 mol/L dipotassium phosphate solution-0.025 mol/L heptanesulfonate sodium solution（15 45 40，V/V/V），the flow rate was 1.0 mL/min，the detection wavelength was 220 nm，the columntemperature was 35，and the injection volume was 10 L.ResultsThe linear range of morphine was 3.979-198.950 g/mL（r=0.999 9，n=6）.The limit of detection was 1 g/mL，and the limit of quantitation was 3 g/mL.The RSDs of precision，stability，and repeatability test results were all lower than 2.5%（n=6）.The average recovery of morphine was 102.77%with anRSD of 3.84%（n=9）.The average content of morphine in 10 batches of samples was 0.32 mg per tablet.ConclusionThemethod is simple and accurate，which can be used for the content determination of morphine in Niaotongkakenaiqi Tablets.Key wordsKey words：Niaotongkakenaiqi Tablets；morphine；HPLC；content determination检验检测Inspection and Test832023 年 9 月 5 日 第 32 卷第 17 期Vol.32，No.17，September 5，2023China PharmaceuticalsA/mAU180 000130 00080 00030 000-20 0000510152025t/min11.吗啡A.对照品溶液B.供试品溶液C.阴性对照品溶液图1高效液相色谱图1.MorphineA.Reference solutionB.Test solutionC.Negative reference solutionFig.1HPLC chromatogramsABCA/mAU180 000130 00080 00030 000-20 0000510152025t/min1A/mAU180 000130 00080 00030 000-20 0000510152025t/min1.2试药吗啡对照品（中国食品药品检定研究院，批号为171201-201123，纯度为97.9%）；乙腈（批号为192552），甲醇（批号为211769），均为色谱纯，购自美国Fisher公司，纯度为99.9%；冰醋酸（分析纯，国药集团化学试剂有限公司，批号为20210810，纯度不低于99.5%）；磷酸氢二钾（分析纯，天津市致远化学试剂有限公司，批号为 20140218，纯度不低于 99.0%）；庚烷磺酸钠（分析纯，成都市科龙化工试剂厂，批号为2017051101，纯度不低于99.0%）；水为超纯水，实验室自制；尿通卡克乃其片（新疆银朵兰维药股份有限公司，批号分别为181197，180847，181196，190925，181034，191142，200103，200112，1904022，1902022，吗 啡 含 量 为0.065%）。2方法与结果2.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：岛津Shim-pack GIST-C18柱（250 mm 4.6 mm，5 m）；流动相：乙腈-0.05 mol/L磷酸氢二钾溶液-0.025 mol/L 庚烷磺酸钠溶液（15 4540，V/V/V）6；流速：1.0 mL/min；检测波长：220 nm；柱温：35；进样量：10 L。供试品溶液色谱图中，吗啡色谱峰与相邻色谱峰分离度为1.85，理论板数为7 122，拖尾因子为1.20，表明吗啡和样品中其他组分色谱峰可达到基线分离。2.2溶液制备对照品溶液：取吗啡对照品20.32 mg，精密称定，置50 mL容量瓶中，加5%冰醋酸溶液定容，摇匀，即得质量浓度为0.397 9 mg/mL对照品贮备液；精密吸取1 mL，置5 mL容量瓶中，加5%冰醋酸溶液定容，摇匀，即得。供试品溶液：取样品20片，研细，取5 g，精密称定，置锥形瓶中，加1%冰醋酸甲醇溶液25 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，再次称定质量，加1%冰醋酸甲醇溶液补足减失的质量，摇匀，离心（转速为5 000 r/min），取上清液，滤过，精密量取续滤液 10 mL，置烧杯中蒸干，加1%冰醋酸甲醇溶液2 mL，振摇、超声，使残渣形成均匀混悬液，续加 5%冰醋酸溶液 10 mL，超声处理10 min，转移至20 mL容量瓶中，加少量5%冰醋酸溶液洗涤烧杯（重复2次），转移至20 mL容量瓶中，放冷，加5%冰醋酸溶液定容，摇匀，取5 mL，离心（转速为5 000 r/min）10 min，取上清液，滤过，取续滤液，即得。阴性对照品溶液：按处方工艺制备除阿片的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。2.3方法学考察专属性试验：取2.2项下对照品溶液、供试品溶液（批号为200103）、阴性对照品溶液各适量，分别按2.1项下色谱条件进样测定。结果显示，供试品溶液色谱图中出现与吗啡对照品溶液保留时间一致的色谱峰，且阴性对照无干扰。色谱图见图1。线性关系考察：精密吸取2.2项下对照品贮备液1mL，分别置2，5，10，25，50，100 mL容量瓶中，加5%冰醋酸溶液定容，摇匀，即得质量浓度分别为 3.979，7.958，15.916，39.790，79.580，198.950 g/mL 的系列对照品标准工作液，按2.1项下色谱条件进样测定，以峰面积（Y）为纵坐标、吗啡的质量浓度（X，g/mL）为横坐标进行线性回归，得回归方程 Y=3 578 X-43 665，r=0.999 9（n=6）。结果表明，吗啡的质量浓度在3.979198.950 g/mL范围内与峰面积线性关系良好。检测限与定量限确定：取线性关系考察项下供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，以信噪比（S/N）为3时的质量浓度为检测限，以S/N为10时的质量浓度为定量限。结果检测限为1 g/mL，定量限为3 g/mL。精密度试验：取 2.2项下对照品溶液适量，按 2.1项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果吗啡峰面积的RSD为0.88%（n=6），表明仪器精密度良好。稳定性试验：取2.2项下供试品溶液，分别于0，2，4，8，12，24 h时按2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果吗啡峰面积的RSD为0.32%（n=6），表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。重复性试验：取样品（批号为200103）适量，精密称定，按2.2项下方法制备供试品溶液6份，按2.1项下色谱条件检验检测Inspection and Test842023 年 9 月 5 日 第 32 卷第 17 期Vol.32，No.17，September 5，2023China Pharmaceuticals进样测定，记录峰面积并计算含量。结果吗啡的平均含量为0.064%，RSD为2.09%（n=6），表明方法重复性良好。加样回收试验：分别取已知含量的样品粉末（批号为200103）2.5 g，精密称定，共9份，分别置三角瓶中；取吗啡对照品5.25，6.52，7.89 mg，精密称定，各3份，分别置100 mL容量瓶中，即得质量浓度分别为0.051 40，0.063 83，0.077 24 mg/mL的对照品溶液；精密吸取对照品溶液各25 mL，置三角瓶中，按2.2项下方法从“称定质量”起制备供试品溶液，记录峰面积并计算加样回收率。结果见表1，符合要求7。表1加样回收试验测定结果（n=9）Tab.1Results of the recovery test（n=9）取样量（g）2.506 62.505 82.509 32.506 22.510 02.497 62.513 82.496 32.513 2样品含量（mg）1.629 31.628 81.631 01.629 01.631 51.623 41.634 01.622 61.633 6加入量（mg）1.284 91.284 91.284 91.595 81.595 81.595 81.931 11.931 11.931 1测得量（mg）2.893 02.885 42.883 73.286 83.325 93.297 93.624 83.648 43.724 2回收率（%）98.3597.8097.49103.89106.18104.93103.09104.90108.26X（%）102.77RSD（%）3.84耐用性试验：取2.2项下供试品溶液适量，分别使用不同色谱柱 岛津Shim-pack GIST-C18柱（250 mm 4.6 mm，5 m）、Shiseido Capcellpak C18柱（250 mm 4.6mm，5m）、AgilentZobaxSBC18柱（250mm 4.6mm，5 m）进样测定，结果每片分别含吗啡 0.33，0.32，0.33 mg，表明色谱柱的耐用性良好。考察不同流动相系统乙腈-0.05 mol/L磷酸氢二钾溶液-0.025 mol/L庚烷磺酸钠溶液（20 40 40，V/V/V），甲醇-0.05 mol/L磷酸氢二钾溶液-0.025 mol/L庚烷磺酸钠溶液（40 30 30，V/V/V）8和不同柱温（2040）对样品中吗啡含量的影响，结果供试品溶液色谱峰保留时间与吗啡对照品溶液色谱峰保留时间一致，拖尾因子与分离度均符合要求。2.4样品含量测定分别取10批样品粉末5 g，各2批次，精密称定，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件平行进样测定2次，记录色谱图，按外标法计算含量。结果10批样品中吗啡的平均含量为每片0.32 mg，详见表2。3讨论3.1提取方法考察尿通卡克乃其片现行质量标准中阿片的含量测定项下存在以下问题：1）原标准中使用甲醇溶解吗啡对照品，稳定性较差，吗啡的峰面积随时间的延长而逐渐减小9-10；2）使用高效液相色谱法分析供试品溶液，发现其他杂质峰对主峰干扰严重，使检测值严重失真。2020年版 中国药典（二部）阿片含量测定项下11，经固相萃取柱提纯样品后使用高效液相色谱法测定，提取过程中杂质干扰较小，试验可顺利进行，但对尿通卡克乃其片中吗啡的提取无借鉴意义。阿片在尿通卡克乃其片中占1%，吗啡在阿片中含量约为10%，在处方中约占0.1%。方中，树脂类药材总占比达40%以上，其中阿拉伯胶、西黄蓍胶为水溶性树脂 12，乳香、血竭为脂溶性树脂，导致样品成分复杂，用含水的溶剂提取会形成均匀的乳浊液，用滤头过滤后仍无法消除。吗啡在日光下和空气中放置会逐渐氧化变性，在常规溶液中不稳定，而在酸性溶液中较稳定且溶解度极好。故本研究中采用1%冰醋酸甲醇溶液提取样品，去除大多数阿拉伯胶和西黄蓍胶后，蒸干，先用少量1%冰醋酸甲醇溶液振摇、超声，使残渣形成均匀混悬液，续加5%冰醋酸溶液提取、定容。绝大部分乳香和血竭以沉淀形式析出，经离心、过滤后，得到供试品溶液 13-15。预试验中采用2种方法考察提取过程中放置溶剂的蒸发皿对提取结果的影响。方法1：蒸干后残渣加1%冰醋酸甲醇3 mL，超声振荡形成均匀混悬液，再加5%冰醋酸溶液提取；方法2：蒸干后残渣直接加5%冰醋酸溶液提取。结果表明，方法1所得吗啡含量高于方法2，原因为脂溶性成分和器具表面结合成一层疏水膜，冰醋酸溶液无法有效进入而提取吗啡。故最终确定2.2项下供试品溶液提取方法。3.2提取时间考察取样品（批号为 200103）研细，取粉末 5 g，精密称定，共3份，分别置三角瓶中，精密加入1%冰醋酸甲醇溶液25 mL，分别考察超声提取20，30，40 min对提取结果的影响。结果显示，超声提取 30 min 时吗啡含量最高，与提取40 min的结果基本一致；提取20 min的结果稍低，可能由于制剂中树脂占比大，影响吗啡的溶解速率。故最终确定提取时间为30 min。3.3检测结果偏高原因分析制备供试品溶液时，溶液中存在较多血竭和乳香，影响定容，沉淀物占据容量瓶一定体积导致分析结果表210批样品中吗啡含量测定结果Tab.2Results of the content determination of morphine in 10batches of samples批号181197180847181196190925181034平均片质量（g）0.501 30.500 10.508 40.506 90.505 6吗啡含量（mg/片）0.320.310.330.330.32百分比（%）0.0640.0620.0650.0650.063批号19114220010320011219040221902022平均片质量（g）0.499 80.504 50.505 60.509 80.500 7吗啡含量（mg/片）0.310.330.330.310.33百分比（%）0.0620.0650.0650.0610.066检验检测Inspection and Test852023 年 9 月 5 日 第 32 卷第 17 期Vol.32，No.17，September 5，2023China Pharmaceuticals略偏高，可通过扩大稀释倍数减轻此影响。3.3制剂成瘾性分析成人口服给药途径吗啡摄入量一般为每次515 mg，每天1560 mg；极量为单次不得过30 mg，每日不得过100 mg。该制剂服用量为每次35片，每天2次，最大单次摄入量约为1.6 mg，每日最大摄入量约为3.2 mg，远低于吗啡的常规使用剂量，不会产生成瘾性。3.4方法评价该方法操作简便、结果准确，可用于尿通卡克乃其片中吗啡的含量测定。参考文献1谭为，杨秀颖，张莉，等.中药罂粟壳毒的历史认识与现代研究 J.中药药理与临床，2019，35（2）：159-162.2于荣敏，王春盛，宋丽艳.罂粟科植物的化学成分及药理作用研究进展 J.上海中医药杂志，2004，38（7）：59-61.3王雯慧，张敏娟，陈学艳，等.HPLC 法检测硫酸吗啡片的有关物质 J.药物分析杂志，2022，42（4）：660-667.4张生杰，王丽，曹雪芹，等.高效液相色谱-质谱法测定宣肺止嗽合剂中吗啡含量 J.甘肃中医药大学学报，2020，37（1）：47-52.5张晗.中医药多维干预吗啡成瘾的作用及机制研究 D.南京：南京中医药大学，2021.6王卫锋，屈杰.HPLC 法测定维药尿通卡克乃其片中吗啡的含量 J.陕西中医学院学报，2007，30（1）：63.7杨丽蓉，隋海山，张筱，等.复方甘草片中可待因和吗啡的含量测定及分析 J.中国药品标准，2021，22（1）：67-71.8麦麦提艾力依甘拜尔迪，蒋子鸿，周琴.高效液相色谱法测定温肾苏拉甫片中吗啡含量 J.甘肃中医药大学学报，2021，38（3）：40-42.9魏春芬.HPLC法同时测定强力枇杷露中吗啡与可待因含量 J .药学研究，2016，35（8）：466-468.10贾燕花，王晓青，高磊，等.咳喘宁合剂中吗啡含量测定方法的建立 J.解放军药学学报，2015，31（5）：406-407.11国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）M.北京：中国医药科技出版社，2020：386.12张建荣，舒云波，马晓伟，等.阿拉伯胶的性质研究 J.农产品加工：学刊，2009（4）：62-63.13张火旺，蔡勇科，吴志国，等.高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定养阴生津片中黄芪甲苷含量 J.中国药业，2016，25（20）：53-55.14黄一挚，赵斌斌，盘雯慧，等.安肠液质量标准的建立 J.中国药业，2022，31（10）：85-89.15张火旺，曾建忠，卓晓明.高效液相色谱法测定青果丸中没食子酸含量 J.中国药业，2016，25（2）：64-65.（收稿日期：2022-10-21；修回日期：2023-04-10）中图分类号：R969.4；R974文献标志码：A文章编号：1006-4931（2023）17-0086-04doi:10.3969/j.issn.1006-4931.2023.17.021氨茶碱联合糖皮质激素治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期合并呼吸衰竭临床研究*李作卿1，苏醒2，王毓兴1（1.海南省澄迈县人民医院，海南 澄迈571900；2.中南大学湘雅医学院附属海口医院，海南 海口570208）摘要：目的探讨氨茶碱联合糖皮质激素治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期（AECOPD）合并呼吸衰竭的临床疗效，以及对患者脑氧代谢及肺功能的影响。方法选取海南省澄迈县人民医院 2020 年 5 月至 2022 年 5 月收治的 AECOPD 合并呼吸衰竭患者 108 例，按抽签法分为观察组和对照组，各 54 例。对照组患者予布地奈德治疗，观察组患者在对照组治疗基础上加用氨茶碱，均治疗 4 周。结果观察组的临床总有效率为 96.30%，显著高于对照组的 85.19%（P 0.05）。观察组咳嗽、心悸、咳痰、喘息等临床症状消失时间均显著短于对照组（P 0.05）。治疗后，两组患者的第 1 秒用力呼气容积（FEV1）、FEV1/用力肺活量（FVC）、呼气峰流速（PEF）均显著升高（P 0.05），且观察组显著高于对照组（P 0.05）；两组患者的颈内静脉血氧饱和度（SjvO2）均显著升高，动脉-静脉血氧含量差（Ca-vO2）、脑氧代谢率（CMRO2）均显著降低（P 0.05），且观察组均显著优于对照组（P 0.05）；两组患者的血清趋化因子 CXC 配体 12（CXCL12）水平均显著降低（P 0.05），且观察组显著低于对照组（P 0.05）。结论氨茶碱联合糖皮质激素治疗 AECOPD 合并呼吸衰竭的临床疗效良好，可提高患者的肺功能，改善脑氧代谢，且安全性良好。关键词：氨茶碱；糖皮质激素；慢性阻塞性肺疾病急性加重期；呼吸衰竭；脑氧代谢；肺功能；临床疗效*基金项目：海南省卫生计生行业科研项目 19A200164。第一作者：李作卿，男，大学本科，副主任医师，研究方向为重症医学，（电子信箱）。通信作者：苏醒，男，硕士研究生，副主任医师，研究方向为急危重症救治与脑复苏，（电子信箱）。临床研究Clinical Research86