细菌内毒素检查法(凝胶法).ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,细菌内毒素检查（凝胶法）,细菌内毒素检查法,凝胶法,方法分类 浊度法,光度法,显色基质法,重现性好,方法特性 能定量,能控制药物的增强/抑制干扰,操作简便。节省时间,原理：,利用鲎血液中的变性细胞，经裂解液和机械方式促使细胞破裂而提取到的一种细胞溶解物，能与极微量的细菌内毒素形成特异凝胶反应，反应的速度和凝胶的坚固程度与内毒素浓度有关,.,细菌内毒素检测之凝胶法,实验程序,1、试验准备：试剂、仪器及用具,2、内毒素限值的确定,3、确定最大有效稀释倍数,4、凝胶限度试验,5、结果判定,要求,1、以最终产品为检测必要,（浓度超过0.5mg/ml）,2、检测样品PH应在68之间，不符应调整,1、试验准备：试剂、仪器及用具,仪器与器具,电热恒温水浴锅、定时钟、去热源枪头和小玻璃瓶、移液枪、试管架、剪刀、锡箔纸。,试剂,细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素检查用水、鲎试剂。,2、内毒素限值的确定,L=K/M,式中L为供试品的细菌内毒素限值，一般以EU/ml、EU/mg或EU/U表示；K为人每千克体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/（kgh）表示；M为人用每千克体重每小时的最大供试品剂量，以ml/（kgh）、mg/（kgh）或U/（kgh）表示。一般由供试品提供者直接提供内毒素限值如1000EU。,3、鲎试剂灵敏度复核,按下表制备溶液A、B、C，使用稀释倍数为MVD的供试品溶液来制备溶液A，按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作。,B,C,A,A,鲎试剂,200ul,100ul,100ul,100ul,标准品,100ul,供试品,100ul,100ul,操作注意事项,试验前准备：,1、玻璃器具应规范化，便于除热原、计量准确、清洗操作方便。,2、用于内毒素检测的稀释试管最好用玻璃试管；塑料用具只能为一次性且保证无内毒素。,实验环境：最好在洁净室或洁净工作台内进行，保证环境温度、湿度及通风稳定。,实验人员：戴干净手套和口罩。,5、恒温器的温度变化应1,，鲎试剂与样品混匀后应立即移入水浴槽，严格控制保温时间在602min，保温期间不得移动试管架，桌面保持平稳，周围不能有振颤因素。,结果判断：恒温结束后，取出试管或反应瓶缓缓倒转180，不从管壁脱落为阳性，不能保持完整即使有部分脱落者也判为阴性。,