显微镜的直接计数和细菌大小测定.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实 验,微生物大小的测定和显微直接计数,一、实验目的,1、学会测微尺和血球计数板的使用方法。,2、建立对微生物大小的概念。,二、实验材料,1、显微镜、物镜测微尺、目镜测微尺、血球计数板、载玻片等。,2、麦芽汁培养基、酵母菌。,3、吸管、吸水纸等。,三、实验原理,(一)微生物大小的测定原理,所有微生物的大小需要用刻有一定刻度的测微尺来测量，先用绝对长度的物镜测微尺来校正不表示绝对长度的目镜测微尺，计算后者每格所代表的实际长度，然后放上待测的标本，用目镜测微尺测定标本上微生物细胞占目镜测微尺的格数，就可计算该微生物的大小。,四、操作方法,(一)酵母菌大小测定的操作方法,1.测微尺的构造和使用方法,(1)目镜测微尺的构造,目镜测微尺是一块圆形玻片，其中央刻有精确的刻度，通常是将5mm划分为50格，实际每格等于100,m。刻度的大小是随使用的接目镜和接物镜的放大倍数而改变，用前必须用物镜测微尺来标定，,如图,。,(2)物镜测微尺的构造,物镜测微尺为一块特制的载玻片，其中央有一小圆圈。圆圈内刻有分度，将长,1mm,的直线等分为,100,小格，每小格等于,10,m,，,如图,。,2.目镜测微尺的标定,(1)取下接目镜，旋下目镜上的目透镜，将目镜测微尺放人接目镜的中隔板上，使有刻度的一面朝下，再旋上目透镜，并装入镜筒内。,(2)将物镜测微尺置于显微镜的载物台上，使有刻度的一面朝上，同观察标本一样，使具有刻度的小圆圈位于视野中央。,(3),先用低倍镜观察，对准焦距，待看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与物镜测微尺的刻度相平行，并使两尺的左边第一条线相重合，再向右寻找两尺的另外一条重合线。,如图,(4),记录二条重合线间的目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数。,3.计算方式,(1)目镜测微尺每格长度=两个重叠刻度间物镜测微尺格数,10,两个重叠刻度间目镜测微尺格数,(2)以同样方法，分别在不同倍率的物镜下测定测微尺上每格的实际长度。,目镜测微尺()格=物镜测微尺()格,目镜测微尺每格=(),(3),如此测定后的目镜测微尺的尺度，仅适用于测定时所用的显微镜的目镜和物镜的放大倍数。若更换物镜、目镜的放大倍数时，必须再进行校正标定。,4.酵母菌大小的测定,(1)取下镜台测微尺，换上酵母菌水浸制片。,(2)测量菌体的长度和宽度各占目镜测微尺几格，然后换算出菌体的实际长度。,(3),在同一标本上测定,5-10,个菌体，求其平均值。,计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造；它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由16,25=25,16=400个小方格组成。,如图,2.血球计数板的使用,(1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数。,(2),样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数，以每小方格内含有,4-5,个酵母细胞为宜，一般稀释,10,倍即可。,(6)当遇到位于大格线上的酵母菌，一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞)。,(7),对每个样品计数三次，取其平均值，按下列公式计算每,1ml,菌液中所含的酵母菌个数。,4.血球计数板的清洁,血球汁数板使用后，用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹风机吹干，或用,95,的乙醇、无水乙醇、丙酮等有机溶剂脱水使其干燥。通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复清洗直到干净为止。,五、实验报告及思考题,1,、微生物大小测定实验结果,（1）将目镜测微尺校正结果填入下表：,接物镜,接物镜倍数,目镜测微尺格数,镜台测微尺格数,目镜测微尺每格代表的长度(,m),低倍镜,高倍镜,油 镜,接目镜的放大倍数_,（2）酵母细胞大小的测量结果：,微生物名称,目镜测微尺每格代表的长度/m,宽,长,菌体大小范围/m,目镜测微尺格数,宽度/m,目镜测微尺格数,长度/m,酵母菌,2、显微镜直接计数结果,将结果记录于下表中，A表示五个中方格中的总菌数；B表示菌液稀释倍数,。,各中格中菌数,A,B,二室平均值,菌数/ml,1,2,3,4,5,第一室,第二室,16小格 25大格计数室,25小格 16大格计数室,计数室的两种刻度形式,