真核生物的-基因表达与调控.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,真核生物的基因表达调控,Regulation of Gene Expression in Eukaryotes,1,真核生物基因表达调控的特点,真核生物表达调控与原核生物的不同：,（1）染色体结构不同；,（2）原核生物具有正调控和负调控并重的特点，真核生物目前已知的主要是正调控；,（3）原核生物的转录和翻译是相偶联的，真核生物的转录和翻译在时空上是分开的；,（4）真核生物是多细胞的，在生物的个体发育过程中其基因表达在时间和空间上具有特异性，即细胞特异性或组织特异性表达。,2,真核基因组结构特点,真核基因组结构庞大：310,9,bp、染色质、染色体、核膜,单顺反子(monocistron),含有大量重复序列,基因不连续性：断裂基因（interrupted gene）、内含子(intron)、外显子(exon),非编码区多于编码序列(9:1),3,真和基因都是由蛋白质编码序列和费蛋白质编码序,列组成。编码序列被称为外显子，而非编码序列称为内含子。,在一个结构基因中，编码某一蛋白质不同区域的各个外显子并不连续排列在一起，而是常常被长度不等的内含子所隔离，形成断裂方式。所以真和基因被称为断裂基因。,而这个序列分析表明，几乎每个内含子5末端起始的两个碱基都是GT,而3末端最后两个碱基总是AG.,4,多层次调控,5,非组蛋白（NHP),非组蛋白大多数是磷蛋白，以磷酸化/去磷酸化修饰的方式调节细胞的代谢、生长、增殖和变异等，并能在核内接受外来信号，构成核内信息转导系统，形成一条调节基因表达的重要途径。,8,DNA水平上的调控,DNA甲基化（,DNA Methylation,),哺乳动物基因中的5-CG-3序列中C5的甲基化称之CpG 甲基化。5-CG-3序列是在表达基因位点处的染色体保持适当包装水平的重要化学修饰序列。当基因序列中的,CpG 密度达到10/100bp时称为CpG 岛。,图：持家基因的CpG岛及其启动子,9,DNA甲基化与转录抑制,甲基化(methylated)程度高，对基因转录抑制的调控能力越强。,去甲基化(undermethylated)：基因转录激活,10,甲基化影响DNA与蛋白质的相互作用,DNaseI的超敏感区域,(1)组蛋白被一种序列特异性蛋白结合而被破坏，DNA裸露出来；,（2）转录区域，DNA链打开而暴露；,（3）活跃转录区,（1）,（2）,（3）,11,真核基因转录水平的调控,顺式作用元件,(,cis-acting element）,反式作用因子,(trans-acting Factor),12,顺式作用元件,(cis-acting element),顺式作用,元件-位于基因的旁侧可以调控和影响基因表达的核苷酸序列,；,顺式作用元件类型：,（1）启动子(promoter):3种类型；,（2）增强子(enhancer)：,（3）沉默子(silencer)：负性调节元件，起阻遏作用。,（4）绝缘子(insulator,boundary element):在真核基因及其调控区的一段DNA序列。,13,增强子,Enhancer,在远离转录起始点（上游或下游）的一段可增强启动子活性的调控元件，大小为100-200bp。最初在DNA病毒SV40的基因组中发现。,特性：,（1）加强相连基因从正确起始位点的转录活性,（2）增强子无论是在下游或在上游均可激活转录,（3）无论是在下游或在上游，可在远离起始位点1Kb以上发挥作用,（4）两个启动子串联在一起时，增强子优先激活距离最近的那一个,14,15,反式作用因子,和,结构特点,概念：,直接或间接地识别或结合在顺式作用元件核心序列上，参与与调控靶基因转录效率的蛋白质,。,（1）三个功能结构域：DNA结合结构域(DNA-binding domain)；转录激活结构域(transcriptional activation domain)；二聚化结构域。,（2）能识别并结合顺式作用元件(cis-acting element),（3）正调控与负调控,16,17,5,端加帽(cap)和3端多聚腺苷酸化(polyA)的调控意义,使mRNA稳定，在转录过程中不被降解,mRNA的选择剪接,(alternative splicing)对基因表达的调控,外显子选择(optional exon)、内含子选择(optional intron)、互斥外显子、内部剪接位点,mRNA 运输的控制,真核基因转录后水平的调控,18,19,20,翻译水平的调控,5端UTR(非翻译区）结构与翻译起始的调节,5帽子结构的甲基化：1）保护mRNA免遭5外切酶的降解。2）为mRNA的从核中输出提供转运信号。3）提高翻译模板的稳定性和翻译效率。,翻译起始因子的调控：,eIF-2-4F的磷酸化能提高翻译速度,eIF-2,的磷酸化能抑制翻译起始,21,新生肽链的水解：酶解,肽链N端的第一个氨基酸：稳定化氨基酸（Met、Ser、Thr、Ala、Val、Cys、Gly、Pro）与去稳定氨基酸,肽链中氨基酸的共价修饰：磷酸化、甲基化、酰基化,通过信号肽(signal peptide)分拣、运输、定位,翻译后水平的调控,22,