第四章脂质和脂蛋白代谢紊乱的生物化学检验第二节.ppt

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第二节,脂蛋白代谢紊乱的主要检测指标,二、甘油三酯,三、血浆脂蛋白测定,一、总胆固醇,七、过氧化脂质测定,八、脂蛋白,-X,测定,四、,ApoB/ApoA-I,、,TC,HDL-C,、,Tg/HDL-C,、,LDL-C/HDL-C,比值,五、磷脂检测,六、游离脂肪酸测定,九、卵磷脂胆固醇转移酶测定,十、脂蛋白代谢相关基因检测,十一、脂肪酸结合蛋白,十二、其他,血浆脂蛋白和脂质测定是临床检验的常规测定项目，其临床意义主要是：,早期发现与诊断高脂蛋白血症,协助诊断动脉粥样硬化症,评价动脉粥样硬化疾病的危险度,检测评价饮食与药物治疗效果等,一、总胆固醇（,total cholesterol,TC,）,是血液中各脂蛋白所含胆固醇之总和，分为酯化型胆固醇（,CE,）和游离型胆固醇（,FC,），其中,CE,占,60%,70%,，,FC,占,30%,40%,，两种类型的比例在健康个体或个体之间是恒定的。,【,测定方法,】,化学法和酶法。,化学法：抽提；皂化；洋地黄皂苷纯化；显色，比色。,酶法：氧化酶法。,目前常规应用酶法测定，快速准确。,胆固醇氧化酶法,实验原理：,胆固醇酯酶（,CEH,）先将胆固醇酯水解为胆固醇和游离脂肪酸（,FFA,），胆固醇在胆固醇氧化酶（,COD,）的作用下氧化生成,4-,胆甾烯酮和过氧化氢。后者经过氧化物酶（,POD,）催化氢与,4-,氨基安替比林（,4-AAP,）和酚反应，生成红色的醌亚胺，其颜色深浅与胆固醇的含量呈正比，在,500nm,波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血清胆固醇的含量。反应式如下：,参考范围：,2007,年,中国成人血脂异常防治指南,规定成人,TC,水平：,在,5.18mmol/L,（,200mg/dl,）以下为合适范围；,在,5.18,6.19mmol/L,（,200,239mg/dl,）范围属于边缘升高；,在,6.22mmol/L,（,240mg/dl,）以上为,TC,升高,临床意义：,TC,浓度增高，冠心病等心血管疾病发生的危险性增高。影响,TC,水平的因素：,(1),年龄与性别：新生儿,TC,很低，哺乳后很快接近成人水平，之后常随年龄而上升，但到,70,岁后不再上升甚或有所下降。中青年期女性低于男性，女性绝经后,TC,水平较同年龄男性高。,(2),饮食习惯：长期高胆固醇、高饱和脂肪酸摄入可造成,TC,升高。,种族：黑人的总胆固醇水平要高于白人。,遗传因素。,但是，血清胆固醇水平低一定有益吗？,细胞膜的重要成分，维持正常的细胞功能。,胆固醇是维持人体正常新陈代谢不可缺少的原料，是抗老防衰、延年益寿的重要物质。,是体内多种激素的重要原料，如类固醇激素、维生素,D,、胆汁酸的重要原料。,May HT,和,Nasim Afsarmanesh,的研究显示,TC,水平降低时增加心衰时的死亡率，而增高时可增加生存率；,Renzhe.Cui,等研究发现在冠心病中，低血总胆固醇会增加死亡率；,Alessia D Introno,等认为,TC,水平升高可能可以防止痴呆。,二、甘油三酯,(triglyceride,TG),甘油三酯构成脂肪组织,参与,TC,CE,合成及血栓形成。,是一项重要的临床血脂常规测定指标，特别是随着对其致动脉粥样硬化,(AS),作用研究的深入，,TG,作为冠心病的一项独立的危险因素日益受到重视。但是目前血清,TG,测定及其临床应用尚存在很多问题，如生物学变异、游离甘油对测定的影响等。,测定方法：,物理法：,总脂质与胆固醇和磷脂之差估算。,化学法：用有机溶剂抽提标本中的,TG,，去除抽提液中磷脂等干扰物后，用碱水解,(,皂化,)TG,，以过碘酸氧化甘油生成甲醛，然后用显色反应测甲醛。比较准确的是二氯甲烷,-,硅酸,-,变色酸法,(Van Handel-Caslson,法,),，此法抽提完全、能去除磷脂及甘油干扰、变色酸显色灵敏度高、显色稳定，至今还是美国疾病控制与预防中心,(CDC),的内部参考方法。但因操作步骤繁多、技术要求高而不适于常规工作应用。,建议酶法（如,GPO,-,PAP,法）作为临床实验室测定血清,Tc,的常规方法。,GPO-PAP,法测定甘油三酯,【,实验原理,】,血清中三酰甘油经脂蛋白酯酶作用，水解为甘油和游离脂肪酸，甘油在三磷酸腺苷和甘油激酶的作用下，生成,3-,磷酸甘油，经磷酸甘油氧化酶作用生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢，过氧化氢与,4-,氨基安替比林及氯酚在过氧化物酶作用下生成红色醌类化合物。,【,参考范围,】,目前,中国成人血脂异常防治指南,仍沿用,1997,年,血脂异,常防治建议,的标准规定我国成人,TG,水平：,在,1.7mmol/L,（,150mg/dl,）以下为合适范围；,1.7,2.25mmol/L,（,150,199mg/dl,）为边缘升高；,2.26mmol/L,（,200mg/dl,）以上为升高。,【,临床意义,】,1,、生理性改变：,2,、病理性改变：,轻至中度升高,患冠心病危险性增加,重度升高,5.63mmol/l,可伴发急性胰腺炎,3,、低,TG,血症：,0.56mmol/l,三、血浆脂蛋白测定,方法：超速离心法、电泳法、血浆静置实验、血浆脂蛋白胆固醇测定。,（一）高密度脂蛋白胆固醇（,HDL-C),高密度脂蛋白是血清中颗粒最小密度最大的一组脂蛋白,被视为人体内具有抗动脉粥样硬化的脂蛋白，同时大量的流行病资料表明，血清,HDL-C,水平与冠心病发病成负相关,因而,HDL-C,被称为“好的胆固醇”。,【,测定方法,】,直接均相法测定法。,【,实验原理,】,利用多聚体和聚阴离子在表面活性剂的作用下，对低密度、,极低密度脂蛋白选择性遮蔽的原理，从而达到仅血清高密度,脂蛋白中的胆固醇参与显色反应的方法。,【,参考范围,】,合适范围为：,1.55mmol/L,（,60mg/dl,）,-1.04mmol/L,（,40mg/dl,）,升高：,1.55mmol/L,（,60mg/dl,）,降低：,1.04mmol/L,（,40mg/dl,）,2001,年,NCEP ATP III,报告,【10】,认为：,HDL-C,的合适范围为,1.04mmol/L,（,40mg/dl,）。,【,临床意义,】,随着,HDL-C,水平降低，缺血性心血管病发病危险增加，,HDL-C,1.04mmol/L,的人群与,HDL-C1.55mmol/L,的人群相比，,缺血性心血管病危险增加,50%,。,【,评价,】,影响血浆（清）,HDL-C,水平的因素很多，主要有：,年龄和性别种族饮食肥胖饮酒与吸烟,运动药物疾病,（二）,低密度脂蛋白胆固醇（,LDL-C,）,【,测定方法,】,参考方法为超速离心法。,临床检验科采用直接匀相法：清除法,(SUR,法,),，透射比浊法、，环芳烃法,(CAL,法,),，可溶性反应法,(SOL,法,),和保护性试剂法,(PRO,法,),【,原理,】,表面活性剂清除法：试剂,（表面活性剂,）能改变并解离除,LDL,以外的脂蛋白结构，释放出胆固醇与酶试剂反应产生,H,2,O,2,但缺乏偶联剂被消耗而不显色，此时,LDL,是完整的，加入试剂,（含表面活性剂,2,和偶联剂）可使,LDL,释放胆固醇反应而显色，因其他脂蛋白的胆固醇已除去，显色深浅与,LDL-C,量成正比。,【,参考范围,】,合适范围为：,4.14mmol/L,（,160mg/dl,）。,NCEP ATP,：高脂血症患者血,LDL-C,的治疗目标值定为,2.6mmol/L,（,100mg/dl,）以下。,【,临床意义,】,与缺血性心血管病发生相对危险及绝对危险上升趋势及程度与,TC,相似。,增高见于家族性高胆固醇血症（,TC,增高，,LDL-C,增高，伴有,HDL-C,减低），,a,型高脂蛋白血症（,TC,增高，,LDL-C,增高，,TG,正常或轻度增高）。,【,评价,】,和,HDL,测定相同，高脂血症对,LDL,检测可产生干扰。,生理条件下,LDL-C,水平随年龄增高而上升，青年与中年男性高于女性，老年前期与老年期女性高于男性。,（三）小而密低密度脂蛋白（,sd LDL,）,小而密低密度脂蛋白为,LDL,脂蛋白,B,型,【,测定方法,】,密度梯度超速离心法（金标准）、梯度凝胶电泳法（常用）、,肝素,-,镁沉淀法（研究热点）,【,原理,】,肝素,-,镁沉淀法：肝素,-,镁可选择性沉淀密度小于,1.044g/L,的脂蛋,白，分离可得到含有,SD-LDL,和,HDL,的上清液，通过自动化分析仪,可选择性测定,SD-LDL,，进而实现对其的定量。,【,临床意义,】,临床上常将高,TG,、低,HDL-C,及,sdLDL,增多三者同时存在合称为致动脉粥样硬化脂蛋白表型或脂质三联症。,sdLDL-C,水平是冠心病患者检测代谢综合征的有效指标。,【,评价,】,SD-LDL,可促进,AS,的发生、发展，是心脑血管事件发生的独立危险因素之一，比,LDL,更具有致,AS,作用，检测,LDL,亚型比测定,LDL,价值更高，定量检测,SD-LDL,水平更为重要。,（四）脂蛋白（,a,）,Lp,（,a,）,是含有特定的载脂蛋白,Apo,（,a,）,的脂蛋白，其脂质组成结构与,LDL,及其相识，其一级结构与纤维蛋白酶原部分结构相同，作为脂类和凝血因子关联的事实引起关注。,1988,年被国际,Lp,（,a,）专题会议公认为动脉硬化的独立危险因子。,【,测定方法,】,免疫浊度法和,ELISA,【,参考范围,】,健康成人血清,Lp,（,a,）,300mg/L,。,【,临床意义,】,1,.,生理性改变 一般认为,Lp,（,a,）对同一个体相当恒定，但个体间差异很大，波动范围在,0,1.0mg/L,。,Lp,（,a,）水平高低主要有遗传因素决定，基本不受性别、年龄、饮食、营养和环境影响；,2,.,病理性增高,缺血性心脑血管疾病、心肌梗死、外科手术、急性创伤、急性炎症、糖尿病肾病等,3,.,病理性减低,肝脏疾病（慢性肝炎除外）,（五）,脂蛋白电泳分型,【,测定方法,】,琼脂糖凝胶电泳,【,参考范围,】,电泳法：,-,脂蛋白占,26%,45%,，,-,脂蛋白占,43%,58%,，前,-,脂蛋白占,6%,22%,。,【,临床意义,】,用于高脂蛋白血症的诊断分型的参考。,CM,脂蛋白,（）,（）,原点,前,脂蛋白,脂蛋白,四、载脂蛋白测定,（一）载脂蛋白,A,载脂蛋白,A,主要,存在于,HDL,中，在,CM,、,VLDL,、,LDL,也有少量，主要功能是维持脂蛋白结构的稳定和完整性。已证实,ApoA,是通过激活,LCAT,来催化胆固醇酯化。,【,测定方法,】,氨基酸分析,-,决定性方法,免疫透射比浊法,-,常规方法,【,参考区间,】,正常人空腹,102-1.60g/L,危险水平临界值,1.20g/L,【,实验原理,】,血清,ApoA,与试剂中的相应抗体结合，在一定条件下形成不溶性免疫复合物，使反应液产生浑浊，浊度与其含量成正比。,【,临床意义,】,于,HDL-C,正相关，于冠心病发生危险因素呈负相关。,可反映,HDL,的颗粒数，缺乏可引起低,HDL-C,血症。,（二）载脂蛋白,B,载脂蛋白,B,可分为两个亚类，即,ApoB48,、,ApoB100,，前者,存在于,CM,中，参与外源性脂质的消化、吸收和运输；后者存在于、,LDL,中，参与,VLDL,的装配和分泌。,【,测定方法,】,免疫透射比浊法,-,常规方法,【,参考区间,】,正常人群,中国人危险临界值,【,实验原理,】,血清,ApoB,与试剂中的相应抗体结合，在一定条件下形成不溶性免疫复合物，使反应液产生浑浊，浊度与其含量成正比。,【,临床意义,】,反应血液中,LDL,的数量,与冠心病发病危险性呈负相关,【,评价,】,P73,（二）载脂蛋白,E,载脂蛋白,E,存在于多种脂蛋白颗粒中，是正常人血浆脂蛋白中重要的,Apo,成分,主要功能为运输并介导某些脂蛋白与相应的受体。主要由肝脏产生。,【,测定方法,】,免疫透射比浊法,-,常规方法,【,参考区间,】,健康人,【,临床意义,】,与血浆,TG,含量正相关。,（四）,ApoB/ApoA-I,、,TC,HDL-C,、,Tg/HDL-C,、,LDL-C/HDL-C,比值,研究发现：,TC,HDL-C,比值比非,HDL-C,更能预示冠心病的危险。,Tg/HDL-C,比值有效测量血脂异常、高血压和代谢综合征,TC,HDL-C,、,Tg/HDL-C,、,ApoB/ApoA-I,、,LDL-C/HDL-C,比值可能比单项血脂检测更具临床意义，而,ApoB/ApoA-I,可能是其中最具说服力的指标。,五、磷脂,是含有磷酸基和多种脂类的一类物质的总称。,【,测定方法,】,化学法和酶法,【,参考区间,】,【,临床意义,】,与胆固醇密切相关，但磷脂的升高可能落后于胆固醇。,增高常见于胆汁淤积、原发性胆汁淤积性肝硬化、高脂血症、脂肪肝、,LCAT,缺乏症、肾病综合症。,六、游离脂肪酸,是含有,C10,以上的脂肪酸。主要由脂肪中的,TG,分解释放入血，正常情况下含量极微，易受多种因素影响。血浆中,LDL,和肝素可使其增高。,【,测定方法,】,滴定法、比色法、原子分光光度法，高效液相层析法和酶法。,【,参考区间,】,成年人，儿童和胖人稍高。,【,临床意义,】,P74,七、过氧化脂质,是氧自由基和多聚不饱和脂肪酸反应的产物。升高可对细胞及细胞膜的结构和功能造成种种损伤。,【,测定方法,】,荧光法、比色法。,【,参考区间,】,荧光法：,2-4mol/L,比色法：男（,4.14,0.781,）,mol/L,，女（,3.97,0.77,）,mol/L,。,【,临床意义,】,1,.,生理性升高,血浆（清）,LPO,水平有随年龄增高而增加的趋势；男性和女性的差异不明显；,2,.,病理性增高,肝疾患如急性肝炎、肝硬化等；糖尿病；动脉硬化，脑梗死，心肌梗死和高脂血症；肾脏疾病如慢性肾炎和肾功能不全；恶性肿瘤；骨质疏松症等。,八、脂蛋白,-,X,胆汁淤积时出现的异常蛋白。,【,测定方法,】,抽提法和比浊法。,【,临床意义,】,1,.,LP-X,是胆汁淤积的敏锐而特异的生化学指标，优于总胆红素、碱性磷酸酶和,-,谷氨酰转肽酶；,2,.,其含量与胆汁淤积程度相关，可用于鉴别阻塞类型；,3,.,LP-X,有抗动脉粥样硬化的功能，可能会降低动脉粥样硬化的风险。,【,评价,】,测定,LP-X,的标本不宜存放，采集送检后应立即测定，因为血液中含有磷酸酯酶能分解,LP-X,，会使测定结果减低。,九、卵磷脂胆固醇酯酰转移酶（,LCAT,）测定,【,测定方法,】,酶法和放射性免疫分析法。,【,参考范围,】,1,.,放射免疫分析法,(RIA),5.19,7.05mg/L,2,.,共通基质法,(37),262,502U/L,3,.,核素标记自身基质法,58,79U/L,【,临床意义,】,1,.,病理性降低,急性肝炎、重症肝炎、先天性卵磷脂胆固醇酰基转移酶缺乏症、无,-,脂蛋白,(-LP),血症、,Tangier,病、低胆固醇血症、吸收不良综合症等；,2,.,病理性升高,原发性高脂血症、脂肪肝、胆汁淤积症初期、肾病综合症。,十、脂蛋白代谢相关基因检测,载脂蛋白、脂蛋白和脂蛋白受体等基因缺陷的种类并非是单一的，而是多位点多类型，多种基因突变。不同种族、不同人群基因缺陷的位点、性质及其突变点可能不一样。目前还未找到引起,AS,和高脂蛋白血症的关键基因及其关键基因缺陷、位点和性质。常用的载脂蛋白基因型分析如下：,ApoE,多态性分析,【,检测方法,】,蛋白分型法：等电聚焦电泳法,(IEF),基因分型法：基因相关技术,ApoC,微卫星,DNA,多态性分析,Apo(a),基因多态性分析,十一、其他检测,近年来，为了更好的反映脂质代谢状况，出现了以下一些新的检测指标：,非高密度脂蛋白胆固醇（非,HDL-C,）,脂蛋白残粒（,remnant lipoprotein,，,RLP,）,血清脂蛋白谱,致动脉粥样硬化脂蛋白谱,