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单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,兽医药理综合实验,兽医药理综合实验兽医药理综合实验药敏纸片的制备 取l号定性滤纸,用打孔机打成56毫米直径的纸片,取50片为一组放入干净枯燥的青霉素空瓶内,瓶口以单层牛皮纸包扎,高压灭菌后放在37恒温箱烘箱中烘烤,使其完全枯燥,向瓶内参加药液时,要不断用灭菌镊子搅拌纸片,使各纸片充分渗透药液,同时在瓶的上面粘贴药名标签后连瓶放人37恒温培养箱内过夜,枯燥后即行密封盖,如果有条件的话可以将瓶子放入加有枯燥剂的玻璃真空于燥器内用真空泵抽气使瓶内纸片迅速枯燥,待完全枯燥后取出加盖保存于阴暗枯燥处,有效期一般在3-6个月,药敏纸片的制备,取l号定性滤纸,用打孔机打成56毫米直径的纸片,取50片为一组放入干净枯燥的青霉素空瓶内,瓶口以单层牛皮纸包扎,高压灭菌后放在37恒温箱烘箱中烘烤,使其完全枯燥,向瓶内参加药液时,要不断用灭菌镊子搅拌纸片,使各纸片充分渗透药液,同时在瓶的上面粘贴药名标签后连瓶放人37恒温培养箱内过夜,枯燥后即行密封盖,如果有条件的话可以将瓶子放入加有枯燥剂的玻璃真空于燥器内用真空泵抽气使瓶内纸片迅速枯燥,待完全枯燥后取出加盖保存于阴暗枯燥处,有效期一般在3-6个月,药物的计算浓度,用药品提示的用量*10配制药液。如1g参加1L水1KG饲料,那么称取10g药品溶解在1000mL水中,或按体积添加配制,药片的泡制,取配制好的药液0.5mL参加50片的纸片中,在冰箱中浸泡1-2h,中间翻动1-2次纸片,取出于37烘干,置于冰箱中保存,确定培养时间和温度,菌液培养,菌液稀释,含菌平板的制备,纸片的放置及培养,结果判断,菌液培养,在无菌室内进展,用酒精灯灼烧铂金耳接种针,无菌操作挑取单菌落放人灭菌2mlMH肉汤中,37 培养箱培养12 16小时,菌液稀释及含菌平板制备,用生理盐水按10倍稀释法将菌液稀释为5105 1 106cfu/ml,灭菌吸管参加0.lml稀释菌液至于MH平板,用灭菌L棒均匀涂布,不要划破培养基的外表,灭菌镊子夹取药敏纸片贴在培养基的外表,用玻璃棒轻轻压下,使其紧贴于培养基的外表,注意一定不要过密,一般中间1个至周边6个,放在37 培养箱内倒置,底部朝上1216小时为宜,结果判断,抑菌圈直径大于2O毫米为极敏,抑菌圈直径在l52O毫米为高敏,抑菌圈在l0一l5毫米为中敏,抑菌圈小于l0毫米或没有出现的为低敏或不敏,牛津杯法,菌液培养,菌液稀释,含菌平板的制备,牛津杯放置及添加药物,结果判断,肉汤稀释法测定药物MIC,菌液培养,菌液稀释,药物稀释,结果判断,菌液培养及稀释,在无菌室内进展,用酒精灯灼烧铂金耳接种针,无菌操作挑取单菌落放人灭菌2mlMH肉汤中,37 培养箱培养12 16小时,用生理盐水按10倍稀释法将菌液稀释为5105 1 106cfu/ml,药物稀释,结果判断及MBC测定,微量肉汤稀释法,体内治疗试验,了解细菌感染实验的治疗方法及根本过程,掌握药效学体内测定的根本方法,观察不同抗菌药物对动物感染的疗效,为临床选用药物提供依据,预备试验,在无菌室内进展,用酒精灯灼烧铂金耳接种针,无菌操作挑取菌落放人灭菌100mlMH肉汤中,37 培养箱培养10小时左右,生理盐水按10倍稀释法将菌液稀释为不同菌液浓度,观察:注射6h后至24h,观察死亡动物数,死亡率70%95%为正式试验接种菌液量,正式试验,小鼠分组:,按随机体重分5组,10只/组,药物分组:,受试药物分为高、中、低,生理盐水对照、阳性对照组,药物的配置,正式试验,小鼠接种:按预备试验接种量接种小鼠,小鼠给药:将配置好的药液分组注射,注射方式为腹腔,0.1ml/只。接种时间为小鼠接种细菌后6h开场第一次用药,2次/天,连续用药3天,观察结果,观察结果,棋盘法测定抗菌药物体外联合试验,准备试验A,B药物的稀释,1、用MH肉汤把原菌液稀释到105 CFU/mL,把药物稀释到32倍MIC浓度,2、在试管架摆两排10mLEP管,每排7支。第1排用于稀释A药分别编号17,第2排用于稀释B药,分别编号AG。,A、B药物的稀释,药物板的制备分别把A,B药菌液参加96孔板的各孔中,竖列:17管A药菌液分别参加17竖列的8个孔,每孔100L,横排:AG横排的前8孔分别加AG管B药菌液,每孔100L,第H排前8孔及第8列各孔补加菌液100L,在第九竖列各孔参加空白肉汤200ulL作为阴性对照,在第十竖列各孔参加菌液200l作为阳性对照,联合试验结果判断,在实验室中以局部抑菌浓度Fractional inhibitory concentration index 简称FIC指数的计算结果作为联合药敏试验的判断依据,谢谢!,
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