呋喃西林代谢物氨基脲在菊黄东方鲀肌肉中的残留消除规律研究.pdf

渔业研究，（）：收稿日期：基金项目：福建省省属公益类科研院所基本科研专项（、）；福建省海洋与渔业结构调整专项（）作者简介：汤水粉（），女，工程师，主要研究方向为渔业环境及水产品质量安全。：汤水粉，钱卓真，李雷斌，等 呋喃西林代谢物氨基脲在菊黄东方鲀肌肉中的残留消除规律研究 渔业研究，（）：呋喃西林代谢物氨基脲在菊黄东方鲀肌肉中的残留消除规律研究汤水粉，钱卓真，李雷斌，刘智禹，王丽娟，位绍红，姜琳琳，余 颖，陈宇锋，刘海新，陈 思，罗方方（福建省水产研究所，福建省海洋生物增养殖与高值化利用重点实验室，福建 厦门）摘要：为了解菊黄东方鲀使用呋喃西林药物后的代谢物氨基脲（，）在其肌肉中的残留及消除规律，根据菊黄东方鲀（）养殖的实际情况，以剂量为 的呋喃西林原粉对养殖池进行全池泼洒，定期随机采集菊黄东方鲀肌肉样品，利用高效液相色谱 串联质谱法测定肌肉中的 质量浓度。结果表明，给药后菊黄东方鲀肌肉中 含量逐渐升高，约 后达到峰值，随后逐渐消除，消除速率在初始阶段较快，之后趋势缓慢，并在较长时间内维持一定的浓度范围，直至 实验结束时仍检出约 的 残留量。使用呋喃西林后的代谢物 在菊黄东方鲀肌肉中的残留时间较长，因此在养殖过程中，应严格禁止硝基呋喃药物的使用，从而保证河鲀鱼的质量安全。关键词：呋喃西林代谢物；菊黄东方鲀；残留消除规律；高效液相色谱 串联质谱法中图分类号：文献标识码：文章编号：（）菊黄东方鲀（）属鲀形目（）、鲀科（）、东方鲀属（），是一种温带近海底层鱼类，其肉质细腻、味道鲜美，而且生长速度快、售价高，在中国被认为是价值突出的鱼类养殖品种。但菊黄东方鲀抗病力较弱，因而在养殖过程中常需使用兽药对其进行疾病预防。呋喃西林是一种广谱抗生素，具有良好的抗菌效果，早期常被用于水产动物、猪、牛、家禽等养殖过程。而研究发现，硝基呋喃类药物及其主要的代谢产物对人体具有致畸、致癌、致突变的作用，严重影响人的身体健康。因此，农业农村部公告第 号规定的食品动物中禁止使用的药品及其他化合物清单包括呋喃西林（）、呋喃妥因（）、呋喃它酮（）、呋喃唑酮（）、呋喃苯烯酸钠（）种硝基呋喃类药物。但因价格便宜、抗菌效果显著，硝基呋喃类药物在水产养殖过程中被违规使用的情况 时有发生。近年来，科研人员投入大量的精力开展硝基呋喃类药物在水产品中的代谢残留规律研究及残留量检测工作，保障中国水产品的质量安全。目前，关于呋喃西林代谢物在水产动物体内残留消除规律的研究主要集中在虾、蟹（）、海 参（）和大菱鲆（）、斑 点 叉 尾（）等鱼类，但是关于呋喃西林代谢物在菊黄东方鲀体内的残留与消除规律的研究未见报道。第 期汤水粉等：呋呋喃喃西西林林代代谢谢物物氨氨基基脲脲在在菊菊黄黄东东方方鲀鲀肌肌肉肉中中的的残残留留消消除除规规律律研研究究本研究在已有文献和相关标准的基础上，以菊黄东方鲀为研究对象，模拟实际养殖中全池泼洒的给药方式，研究呋喃西林代谢物氨基脲（，）在菊黄东方鲀体内的残留与消除规律，评估使用呋喃西林后的代谢物 在菊黄东方鲀体内的残留风险，为河鲀鱼的安全健康养殖及质量安全风险评估提供科学的数据支持。材料与方法 试剂与设备 标准品（，纯度 ，德国 公司）；内标 标准品（，纯度 ，德国 公司）；硝基苯甲醛（纯度 ，美国 公司）；乙酸乙酯、正己烷、甲酸、甲醇（色谱纯，美国 公司）；乙酸铵、盐酸、磷酸氢二钾（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）。液相色谱 串联四级杆质谱联用仪（美国 公司）；色谱柱（，美国 公司）；电子分析天平（精密度 ）、电子分析天平（精密度 ，公司）；水浴恒温振荡器（常州国华电器有限公司）；旋涡混合器（德国 公司）；低速离心机（北京时代北利离心机有限公司）；氮吹仪（广州智真生物科技有限公司）；纯水机（法国 公司）。实验方法 养殖条件实验地点为福建省水产研究所水产养殖实验基地，养殖水体体积为 ，时间：月翌年 月。实验用健康的菊黄东方鲀共计 尾，平均体质量约为 。实验前，先对菊黄东方鲀进行暂养，正常投喂空白饲料，两周后挑选体色、活力均正常的健康菊黄东方鲀进行实验。实验设计与采样实验分为 组空白对照组和 组平行给药组，每组约有菊黄东方鲀 尾。经检测，实验用鱼投药前未检出。根据养殖过程中的菊黄东方鲀实际情况，对于给药组，每组称取 呋喃西林原粉，先用养殖水对其进行一定的溶解后，再进行全池泼洒，使养殖池中呋喃西林溶液理论浓度为 。于给药后第 天对养殖池进行换水。给药后第、和 天的上午 点进行样品采集，每批次样品至少采集 尾，去皮并处理取得肌肉部分，匀浆后将样品分成 份，于 冰箱中冷冻保存，一周内进行检测。空白对照组不给药，采样方法同给药组。所有组别的养殖条件均一致，实验周期为 。样品前处理样品前处理参考 食品安全国家标准 水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定 液相色谱 串联质谱法中的方法。色谱条件流动相：为 甲酸水溶液，含 乙酸铵；为 甲酸甲醇溶液。流动相梯度洗脱程序如表 所示。表 流动相梯度洗脱程序 时间 注：甲酸 水（），含 乙酸铵；甲酸 甲醇（）。：（），；（）质谱条件离子源：电喷雾离子源，正离子模式；喷雾电压：；毛细管温度：；蒸发室温度：；鞘气压力：；辅助气压力：；碰撞气压力：。质谱参数：离子对，碰撞能量；离子对，碰撞能量 ；离子对，碰撞能量 。标准曲线分别准确称取 和 ，渔业研究第 卷用甲醇溶解并定容至 ，配制成 标准 储 备 液 和 内 标 储 备 液，于 冰箱中避光存放；再经稀释，分别配制成 质 量 浓 度 为 标 准 工 作 液 和 内标工作液。于 离心管中分别加入、标准工作液，同时加入 内标工作液，按照 方法进行处理，配制得到的 质量浓度为 、内标质量浓度为 的系列标准溶液，待上机测定。以 的质量浓度为横坐标，与 的峰面积比为纵坐标，得到线性回归方程和相关系数。加标回收率在空白的菊黄东方鲀肌肉样品中，分别加入 标准溶液、（相当于 在肌肉中的质量分数为 、），避光放置至少 ，使 渗入肌肉组织。每个加标浓度作 个平行样，按照 方法进行处理，经上机测定求得该方法的平均回收率和相对标准偏差。数据处理（药时曲线）通过上机测定得到每批次样品中 的含量，以采样时间为横坐标、含量平均值为纵坐标，采用 处理，得到菊黄东方鲀肌肉中 的药时曲线。结果与分析 线性回归及回收率在实验设置的色谱和质谱条件下，对系列浓度的 标准溶液进行测定，可得 标准品的选择离子流图，图 为 标准溶液的选择离子流图。以 和内标 的峰面 积 比 值（）对 质 量 浓 度（，）作线性回归，在系列浓度范围内线性关系良好，标准曲线方程为：，。同时以空白的菊黄东方鲀样品为研究对象，考察加标回收率和精密度，得到菊黄东方鲀空白样和加标样品的选择离子流图（图）。结果表明，在加标量为 时，样品平均回收率为，相对标准偏差为 ；在加标量为 时，平均回收率为 ，相对标准偏差为 。本研究采用的高效液相色谱 串联质谱法的精密度和准确度满足水产品中硝基呋喃类代谢物残留量检测的要求。图1SEM标准品衍生产物选择离子流图Fig.1Selected reaction monitoring chromatogramsof the derivative of SEM standard离子丰度比/%Relative abundance保留时间/min Time10050024681012图2鱼肉空白样品(A)和加标样(B)选择离子流图Fig.2Selected reaction monitoring chromatograms ofblank fishes sample(A)and spiked fishes sample(B)保留时间/min Time保留时间/min Time离子丰度比/%Relative abundance2468246810050010050010121012 在菊东方鲀肌肉中的残留量及消除规律采用实验选取的处理方法和仪器条件，对不同时间点采集的样品进行 残留量的测定，得到硝基呋喃代谢物的药时曲线如图 所示。由图可知，在泼洒呋喃西林溶液后，在菊黄东方鲀肌肉中呈现出较强的蓄积能力，后菊黄东方鲀肌肉中检出 的含量为 ；到第 天，的 残 留 量 逐 渐 升 高 至 峰 值 ；之后，的残留量开始下降，到了第 天迅速下降至 ，随后达到平衡状态，消除速率趋于平缓；后，残留量维持在 的浓度水平；后 残留量开始出现比较明显的降低，但消除速率缓慢；直至第 天实验结束时，肌肉中的 质量浓度还有约 ，仍高于 倍检出限（）。第 期汤水粉等：呋呋喃喃西西林林代代谢谢物物氨氨基基脲脲在在菊菊黄黄东东方方鲀鲀肌肌肉肉中中的的残残留留消消除除规规律律研研究究图3菊黄东方鲀肌肉中SEM药时曲线Fig.3The curve of SEM concentrations-time in themuscle of T.flavidus时间/d Time药物含量/(g/kg)Drug content10051520253035401020305040706080 讨论 在菊东方鲀肌肉中的残留量趋势分析呋喃西林泼洒到池塘后，菊黄东方鲀肌肉中 含量的达峰时间、峰浓度值是反映药物在机体内消除规律的重要参数。在实验的前期阶段，菊黄东方鲀肌肉中 的残留量呈现随时间的延长显著增加并达到最高值（第 天）再波动降低的趋势（图）。这是因为在泼洒药物后，呋喃西林原药一部分在养殖水体中降解为，一部分则通过被菊黄东方鲀的皮肤、鳃、饮食等不同方式进行吸收或渗透，在体内代谢为，从而使鱼体内的 含量升高。相关研究表明，呋喃西林原药在养殖水体中 内即降解为，而进入水生动物体内后，在几小时内就迅速代谢为 ，。而根据药时曲线，菊黄东方鲀肌肉中 含量是逐渐升高的，在第 天左右才达峰，而不是在第 天。因此，推测在给药后的 内，鱼体除了自身吸收原药代谢产生的 外，同时也在不断吸收环境中的，从而导致肌肉中 含量的累积。而第 天的迅速降低，可能是鱼体自身的代谢和排泄导致的。在给药第 天换水后，肌肉中 含量并没有明显的下降，反而有少量上升的趋势，由此可见，到消除阶段后期，养殖水体对肌肉中 含量的累积并没有明显的影响。根据索纹纹等的研究结果，在水体中的 刚开始时消除速率较快，随后趋于平缓并慢慢降至检出限以下。这可能是养殖水体不再影响肌肉中 累积的原因所在。在第 天，含量虽然整体上是下降的趋势，但是有三次出现回升，这可能是 含量在体内降低至一定程度后达到了相对平衡，与环境互相循环所致。在菊东方鲀肌肉中的消除规律分析给药后，菊黄东方鲀体内的 开始累积，并在短时间内达到峰值，随后开始消除，几天内迅速降低至一个较低的残留浓度，之后消除缓慢，给药 后，的残留浓度仍高于 倍检出限。这与 在其他水产品中残留规律的相关研究结论相似，如丁军伟等采用投喂的方式对 在青石斑鱼（）肌肉中的消除规律进行研究，发现消除 后，在青石斑鱼肌肉中的含量仍高于检出限；谭志军等在研究呋喃西林和呋喃唑酮代谢物在大菱鲆组织中的消除规律时，采用药浴的方式给药 后，大菱鲆体内 的残留量仍高于检出限；索纹纹等采用全池泼洒的方式，研究环境中氨基脲消解规律及评估其在斑点叉尾肌肉中的残留，发现 需要 才能完全被消除。结果说明，虽然给药方式不同，但是 在不同鱼类中的残留时间均较长，这可能是因为 能与细胞膜蛋白稳定结合，而导致消除速率较慢。本实验开展的时间是 月翌年 月，水温比较低，而药物的吸收和代谢受环境温度的影响，在高温条件下，动物代谢加强加快，药物消除速率也会高于低温状态。因此本次的研究结果仅代表该季节条件下 的残留消除规律。另外，硝基呋喃类药物对光敏感，在光照充足的条件下，降解加快，同时养殖环境中的微生物也会影响 的消除。因此，室外的池塘养殖环境以及高温条件下菊黄东方鲀对 的残留消除规律还有待进一步研究。结论本实验研究了在全池泼洒的给药方式下，呋喃西林代谢物 在菊黄东方鲀肌肉中的残留消除规律。直至实验结束，菊黄东方鲀肌肉中的 仍未被消除至检出限以下，可见 在菊黄东方鲀体内的消除时间较长。因此在实际的水产养殖过程中，应严格禁止呋喃西林药物的使渔业研究第 卷用。本实验的研究结果可为河鲀鱼的健康养殖提供科学的数据支持，也有利于相关管理部门对水产养殖过程中呋喃西林使用情况的严格监控，进一步加强排查和监测，从而保证水产品的质量安全。参考文献：邱楚雯，施永海，刘智禹，等 三种生物保鲜剂结合冷藏对菊黄东方鲀的保鲜效果 渔业研究，（）：丁军伟，邓建朝，杨贤庆，等 种硝基呋喃类代谢物在青石斑鱼肌肉中的富集与消除规律 南方水产科学，（）：赵浩军，王勇杰，陈朋云，等 基质分散固相萃取与液相色谱 串联质谱联用法检测淡水鱼中硝基呋喃类代谢物的残留量 食品安全质量检测学报，（）：叶江雷，林功师，林楠，等 水产品中孔雀石绿、硝基呋喃、氯霉素残留免疫胶体金前处理过程的探讨 渔业研究，（）：赵东豪，黎智广，王旭峰，等 高效液相色谱 串联质谱法检测水产品中硝基呋喃类代谢物的优化研究 南方水产科学，（）：，：徐一平，胥传来 动物源食品中硝基呋喃类物质及其代谢物残留的检测技术研究 食品科学，（）；，：（）：，：农业农村部畜牧兽医局 中华人民共和国农业农村部公告 第 号 （）：，（）：，（）：朱晓玲，刘杰，江丰，等超声波辅助衍生 液相色谱串联质谱法快速测定克氏原鳌虾中的硝基呋喃类代谢物残留 现代食品科技，（）：吴烁，张彪，张万利，等荧光微球免疫层析方法定量检测水产品中 种硝基呋喃代谢物 食品科学，（）：区兑鹏，卢义博，严忠雍，等酶联免疫法快速检测水产品中硝基呋喃类代谢物、氯霉素及氟苯尼考 中国渔业质量与标准，（）：，：，：，：，（），：王明兴，吴晓萍，廖艳，等呋喃西林代谢物在凡纳滨对虾体内代谢及残留 食品与机械，（）：赵东豪，黎智广，李刘冬，等虾苗使用呋喃西林和呋喃唑酮的残留评估 南方水产科学，（）：李东利，李健，常志强，等呋喃西林代谢产物 第 期汤水粉等：呋呋喃喃西西林林代代谢谢物物氨氨基基脲脲在在菊菊黄黄东东方方鲀鲀肌肌肉肉中中的的残残留留消消除除规规律律研研究究在中国对虾（）体内的消除规律及其对代谢酶活性的影响 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