分子生物学_第一章 绪论_47页.ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,分子生物学,第一章 绪 论,Introduction,一、,分子生物学的基本含义,分子生物学是从分子水平研究生命本质为目的的一门新兴边缘学科，它以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究对象，是当前生命科学中发展最快并正在与其它学科广泛交叉与渗透的重要前沿领域。,分子生物学的发展为人类认识生命现象带来了前所未有的机会，也为人类利用和改造生物创造了极为广阔的前景。,所谓在分子水平上研究生命的本质主要是指对遗传、,生殖、生长和发育等生命基本特征的分子机理的阐明，从而为利用和改造生物奠定理论基础和提供新的手段。,这里的分子水平指的是那些携带遗传信息的核酸和在遗传信息传递及细胞内、细胞间通讯过程中发挥着重要作用的蛋白质等生物大分子。这些生物大分子均具有较大的分子量，由简单的小分子核苷酸或氨基酸排列组合以蕴藏各种信息，并且具有复杂的空间结构以形成精确的相互作用系统，,由此构成生物的多样化和生物个体精确的生长发育和代谢调节控制系统。阐明这些复杂的结构及结构与功能的关系是分子生物学的主要任务。,二、分子生物学的主要研究内容,分子生物学主要包含以下三部分研究内容：,1.,核酸的分子生物学,核酸的分子生物学研究核酸的结构及其功能。由于核酸的主要作用是携带和传递遗传信息，因此分子遗传学（,moleculargenetics,）,是其主要组成部分。由于50年代以来的迅速发展，,该领域已形成了比较完整的理论体系和研究技术，是目前分子生物学内容最丰富的一个领域。研究内容包括核酸/基因组的结构、遗传信息的复制、转录与翻译，核酸存储的信息修复与突变，基因表达调控和基因工程技术的发展和应用等。遗传信息传递的中心法则（,centraldogma,）,是其理论体系的核心。,2.,蛋白质的分子生物学,蛋白质的分子生物学研究执行各种生命功能的主要大分子蛋白质的结构与功能。尽管人类对蛋白质的研究比对核酸研究的历史要长得多，但由于其研究难度较大，与核酸分子生物学相比发展较慢。近年来虽然在认识蛋白质的结构及其与功能关系方面取得了一些进展，但是对其基本规律的认识尚缺乏突破性的进展。,3.,细胞信号转导的分子生物学,细胞信号转导的分子生物学研究细胞内、细胞间信息传递的分子基础。构成生物体的每一个细胞的分裂与分化及其它各种功能的完成均依赖于外界环境所赋予的各种指示信号。在这些外源信号的刺激下，细胞可以将这些信号转变为一系列的生物化学变化，例如蛋白质构象的转变、,蛋白质分子的磷酸化以及蛋白与蛋白相互作用的变化等，从而使其增殖、分化及分泌状态等发生改变以适应内外环境的需要。信号转导研究的目标是阐明这些变化的分子机理，明确每一种信号转导与传递的途径及参与该途径的所有分子的作用和调节方式以及认识各种途径间的网络控制系统。信号转导机理的研究在理论和,技术方面与上述核酸及蛋白质分子有着紧密的联系，是当前分子生物学发展最迅速的领域之一。,三、分子生物学发展简史,分子生物学的发展大致可分为三个阶段。,(一)准备和酝酿阶段,19,世纪后期到,20,世纪,50,年代初，是现代分子生物学诞生的准备和酝酿阶段。在这一阶段产生了两点对生命本质的认识上的重大突破：,确定了蛋白质是生命的主要基础物质,19,世纪末,Buchner,兄弟证明酵母无细胞提取液能使糖发酵产生酒精，第一次提出酶（,enzyme,）,的名称，酶是生物催化剂。,20,世纪,20-40,年代提纯和结晶了一些酶（包括尿素酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、黄酶、细胞色素,C,、,肌动蛋白等），证明酶的本质是蛋白质。随后陆续发现生命的许多基本现象（物质代谢、能量代谢、消化、呼吸、运动等）都与酶和蛋白质,相联系，可以用提纯的酶或蛋白质在体外实验中重复出来。在此期间对蛋白质结构的认识也有较大的进步。,1902,年,EmilFisher,证明蛋白质结构是多肽；,40,年代末，,Sanger,创立二硝基氟苯（,DNFB,）,法、,Edman,发展异硫氰酸苯酯法分析肽链,N,端氨基酸；,1953,年,Sanger,和,Thompson,完成了第一个多肽分子-胰岛素,A,链和,B,链的氨基全序列分析。由于结晶,X-,线衍射分析技术的发展，1950年,Pauling,和,Corey,提出了,-,角蛋白的,-,螺旋结构模型。所以在这阶段对蛋白质一级结构和空间结构都有了认识。,确定了生物遗传的物质基础是,DNA,虽然,1868,年,F.,Miescher,就发现了核素（,nuclein,），,但是在此后的半个多世纪中并未引起重视。,20,世纪,20-30,年代已确认自然界有,DNA,和,RNA,两类核酸，并阐明了核苷酸的组成。由于当时对核苷酸和碱基的定量分析不够精确，得出,DNA,中,A,、,G,、,C,、,T,含量是大致相等的结果，因而曾,长期认为,DNA,结构只是“四核苷酸”单位的重复，不具有多样性，不能携带更多的信息，当时对携带遗传信息的侯选分子更多的是考虑蛋白质。,40,年代以后实验的事实使人们对核酸的功能和结构两方面的认识都有了长足的进步。,1944,年,O.T.Avery,等证明了肺炎球菌转化因子是,DNA,；,1952,年,A.D.Hershey,和,M.Cha-se,用,DNA35S,和,32,P,分别标记,T2,噬菌体的蛋白质和核酸，感染大肠杆菌的实验进一步证明了是遗传物质。在对,DNA,结构的研究上，,1949-52,年,S.,Furbery,等的,X-,线衍射分析阐明了核苷酸并非平面的空间构像，提出了,DNA,是螺旋结构；,1948-1953,年,Chargaff,等用新的层析和电泳技术分析组成,DNA,的碱基和核苷酸量，积累了大量的数据，提出了,DNA,碱基组成,A=T,、,G=C,的,Chargaff,规则，为碱基配对的,DNA,结构认识打下了基础。,(二)、现代分子生物学的建立和发展阶段,这一阶段是从,50,年代初到,70,年代初，以,1953,年,Watson,和,Crick,提出的,DNA,双螺旋结构模型作为现代分子生物学诞生的里程碑开创了分子遗传学基本理论建立和发展的黄金时代。,DNA,双螺旋发现的最深刻意义在于：确立了核酸作为信息分子的结构基础,;,提出了碱基配对是核酸复制、遗传信息传递的基本方式；从而最后确定了核酸是遗传的物质基础，为认识核酸与,蛋白质的关系及其在生命中的作用打下了最重要的基础。在此期间的主要进展包括：,遗传信息传递中心法则的建立,在发现,DNA,双螺旋结构同时，,Watson,和,Crick,就提出,DNA,复制的可能模型。其后在,1956,年,A.,Kornbery,首先发现,DNA,聚合酶；,1958,年,Meselson,及,Stahl,用同位素标记和超速离心分离实验为,DNA,半保留模型提出了证明；,1968,年,Okazaki,（,冈畸）提出,DNA,不连续复制模型；,1972,年证实了,DNA,复制,开始需要,RNA,作为引物；,70,年代初获得,DNA,拓扑异构酶，并对真核,DNA,聚合酶特性做了分析研究；这些都逐渐完善了对,DNA,复制机理的认识。,在研究,DNA,复制将遗传信息传给子代的同时，提出了,RNA,在遗传信息传到蛋白质过程中起着中介作用的假说。1958年,Weiss,及,Hurwitz,等发现依赖于,DNA,的,RNA,聚合酶；1961年,Hall,和,Spiegelman,用,RNA-DNA,杂交证明,mRNA,与,DNA,序列互补；逐步阐明了,RNA,转录合成的机理。,在此同时认识到蛋白质是接受,RNA,的遗传信息而合成的。,50,年代初,Zamecnik,等在形态学和分离的亚细胞组分实验中已发现微粒体（,microsome,）,是细胞内蛋白质合成的部位；,1957,年,Hoagland,、,Zamecnik,及,Stephenson,等分离出,tRNA,并对它们在合成蛋白质中转运氨基酸的功能提出了假设；,1961,年,Brenner,及,Gross,等观察了在蛋白质合成过程中,mRNA,与核糖体的结合；,1965,年,Holley,首次测出了酵母丙氨酸,tRNA,的一级结构；特别是在,60,年代,Nirenberg,、,Ochoa,以及,Khorana,等几组科学家的共同努力破译了,RNA,上编码合成蛋白质的遗传密码，随后研究表明这套遗传密码在生物界具有通用性，从而认识了蛋白质翻译合成的基本过程。,上述重要发现共同建立了以中心法则为基础的分子遗传学基本理论体系。,1970,年,Temin,和,Baltimore,又同时从鸡肉瘤病毒颗粒中发现以,RNA,为模板合成,DNA,的反转录酶，又进一步补充和完善了遗传信息传递的中心法则。,对蛋白质结构与功能的进一步认识,1956-58,年,Anfinsen,和,White,根据对酶蛋白的变性和复性实验，提出蛋白质的三维空间结构是由其氨基酸序列来确定的。,1958,年,Ingram,证明正常的血红蛋白与镰刀状细胞溶血症病人的血红蛋白之间，亚基的肽链上仅有一个氨基酸残基的差别，使人们对蛋白质一级结构影响功能有了深刻的印象。与此同时，对蛋白质研究的手段也有改进，,1969,年,Weber,开始应用,SDS-,聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量；,60,年代先后分析得血红蛋白、核糖核酸酶,A,等一批蛋白质的一级结构；,1973,年氨基酸序列自动测定仪问世。中国科学家在,1965,年人工合成了牛胰岛素；在,1973,年用,1.8,AX-,线衍射分析法测定了牛胰岛素的空间结构，为认识蛋白质的结构做出了重要贡献。,(三)、初步认识生命本质并开始改造生命的深入发展阶段,70年代后，以基因工程技术的出现作为新的里程碑，标志着人类深入认识生命本质并能动改造生命的新时期开始。其间的重大成就包括：,1.,重组,DNA,技术的建立和发展,分子生物学理论和技术发展的积累使得基因工程技术的出现成为必然。1967-1970年,R.Yuan,和,H.O.Smith,等发现的,限制性核酸内切酶为基因工程提供了有力的工具；1972年,Berg,等将,SV-40,病毒,DNA,与噬菌体,P22DNA,在体外重组成功，转化大肠杆菌，使本来在真核细胞中合成的蛋白质能在细菌中合成,打破了种属界限；1977年,Boyer,等首先将人工合成的生长激素释放抑制因子14肽的基因重组入质粒，成功地在大肠杆菌中合成得到这14肽；1978年,Itakura,（,板仓）等使人生长激素191肽在大肠杆菌中表达成功；1979年,美国基因技术公司用人工合成的人胰岛素基因重组转入大肠杆菌中合成人胰岛素。至今我国已有人干扰素、人白介素2、人集落刺激因子、重组人乙型肝炎疫苗、基因工程幼畜腹泻疫苗等多种基因工程药物和疫苗进入生产或临床试用，世界上还有几百种基因工程药物及其它基因工程产品在研制中，成为当今农业和医药业发展的重要方向，将对医学和工农业发展作出新贡献。,转基因动植物和基因剔除动植物的成功是基因工程技术发展的结果。,1982,年,Palmiter,等将克隆的生长激素基因导入小鼠受精卵细胞核内，培育得到比原小鼠个体大几倍的“巨鼠”，激起了人们创造优良品系家畜的热情。我国水生生物研究所将生长激素基因转入鱼受精卵，得到的转基因鱼的生长显著加快、个体增大；转基因猪也正在研制中。用转基因动物还能获取治疗人类疾病的重要蛋白质，导入了凝血因子基因的转基因,绵羊分泌的乳汁中含有丰富的凝血因子，能有效地用于血友病的治疗。在转基因植物方面，,1994,年能比普通西红柿保鲜时间更长的转基因西红柿投放市场，,1996,年转基因玉米、转基因大豆相继投入商品生产，美国最早研制得到抗虫棉花，我国科学家将自己发现的蛋白酶抑制剂基因转入棉花获得抗棉铃虫的棉花株。到,1996,年全世界已有,250,万公顷土地种植转基因植物。,基因诊断与基因治疗是基因工程在医学领域发展的一个重要方面。,1991,年美国向一患先天性免疫缺陷病（遗传性腺苷脱氨酶,ADA,基因缺陷）的女孩体内导入重组的,ADA,基因，获得成功。我国也在,1994,年用导入人凝血因子基因的方法成功治疗了乙型血友病的患者。在我国用作基因诊断的试剂盒已有近百种之多。基因诊断和基因治疗正在发展之中。,这时期基因工程的迅速进步得益于许多分子生物学新技术的不断涌现。包括：核酸的化学合成从手工发展到全自动合成，1975-1977年,Sanger、,Maxam,和,Gilbert,先后发明了三种,DNA,序列的快速测定法；90年代全自动核酸序列测定仪的问世；1985年,Cetus,公司,Mullis,等发明的聚合酶链式反应（,PCR）,的特定核酸序列扩增技术，更以其高灵敏度和特异性被广泛应用，对分子生物学的发展起到了重大的推动作用。,2.,基因组研究的发展,目前分子生物学已经从研究单个基因发展到研究生物整个基因组的结构与功能。,1977,年,Sanger,测定了,X174-DNA,全部,5375,个核苷酸的序列；,1978,年,Fiers,等测出,SV-40DNA,全部,5224,对碱基序列；,80,年代,噬菌体,DNA,全部,48,502,碱基对的序列全部测出；一些小的病毒包括乙型肝炎病毒、艾滋病毒等基因组的全序列也陆续被测定；,1996,年底许多科学家共同,努力测出了大肠杆菌基因组,DNA,的全序列长,4,x10,6,碱基对。测定一个生物基因组核酸的全序列无疑对理解这一生物的生命信息及其功能有极大的意义。,1990,年人类基因组计划（,HumanGenomeProject,）,开始实施，这是生命科学领域有史以来全球性最庞大的研究计划，,2003,年4月，美、日、英、法、俄、中六国科学家测定出人基因组全部,DNA3x10,9,碱基对的序列、确定人类约,3.5,万个基因的一级结构，这使得人类能够更好掌握自己的命运。,3.,单克隆抗体及基因工程抗体的建立和发展,1975,年,Kohler,和,Milstein,首次用,B,淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体以来，人们利用这一细胞工程技术研制出多种单克隆抗体，为许多疾病的诊断和治疗提供了有效的手段。,80,年代以后随着基因工程抗体技术而相继出现的单域抗体、单链抗体、嵌合抗体、重构抗体、双功能抗体等为广泛和有效的应用单克隆抗体提供了广阔的前景。,4.,基因表达调控机理,分子遗传学基本理论建立者,Jacob,和,Monod,最早提出的操纵元学说打开了人类认识基因表达调控的窗口，在分子遗传学基本理论建立的,60,年代，人们主要认识了原核生物基因表达调控的一些规律，,70,年代以后才逐渐认识了真核基因组结构和调控的复杂性。,1977,年最先发现猴,SV40,病毒和腺病毒中编码蛋白质的基因序列是不连续的，这种基因内部的间隔区（内含子）在真核基因组中是普遍存在,的，揭开了认识真核基因组结构和调控的序幕。,1981,年,Cech,等发现四膜虫,rRNA,的自我剪接，从而发现核酶（,ribozyme,）。,80-90,年代，使人们逐步认识到真核基因的顺式调控元件与反式转录因子、核酸与蛋白质间的分子识别与相互作用是基因表达调控根本所在。,5.,细胞信号转导机理研究成为新的前沿领域,细胞信号转导机理的研究可以追述至,50,年代。,Sutherland1957,年发现,cAMP,、,1965,年提出第二信使学说，是人们认识受体介导的细胞信号转导的第一个里程碑。,1977,年,Ross,等用重组实验证实,G,蛋白的存在和功能，将,G,蛋白与腺苷环化酶的作用相联系起来，深化了对,G,蛋白偶联信号转导途径的认识。,70,年代中期以后，癌基因和抑癌基因的发现、蛋白酪氨酸激酶的发现及其结构与功能的深入研究、各种受体蛋白基因的克隆和结构功能的探索等，使近,10,年来细胞信号转导的研究更有了长足的进步。目前，对于某些细胞中的,一些信号转导途径已经有了初步的认识，尤其是在免疫活性细胞对抗原的识别及其活化信号的传递途径方面和细胞增殖控制方面等都形成了一些基本的概念，当然要达到最终目标还需相当长时间的努力。,四、分子生物学与其他学科的关系,分子生物学是由生物化学、生物物理学、遗传学、微生物学、细胞学、以至信息科学等多学科相互渗透、综合融会而产生并发展起来的，凝聚了不同学科专长的科学家的共同努力。它虽产生于上述各个学科，但已形成它独特的理论体系和研究手段，成为一个独立的学科。,生物化学与分子生物学关系最为密切。两者同在我国教委和科委颁布的一个二级学科中，称为“生物化学与分子生物学”，但两者还是有区别的。生物化学是从化学角度研究生命现象的科学，它着重研究生物体内各种生物分子的结构、转变与新陈代谢。传统生物化学的中心内容是代谢，包括糖、脂类、氨基酸、核苷酸、以及能量代谢等与生理功能的联系。分子生物学则着重阐明生命的本质,-,主要研究生物大分子核酸与蛋白质的,结构与功能、生命信息的传递和调控。国际生物化学学会和中国生物化学学会现均已改名为国际生物化学与分子生物学学会和中国生物化学与分子生物学学会。,细胞生物学与分子生物学关系也十分密切。传统的细胞生物学主要研究细胞和亚细胞器的形态、结构与功能。细胞作为生物体基本的构成单位是由许多分子组成的复杂体系，光学显微镜和电子显微镜下所见到的规则结构是各种分子,有序结合而形成的。探讨组成细胞的分子结构比单纯观察大体结构能更加深入认识细胞的结构与功能，因此现代细胞生物学的发展越来越多地应用分子生物学的理论和方法。分子生物学则是从研究各个生物大分子的结构入手，但各个分子不能孤立发挥作用，生命绝非组成成分的随意加和或混合，分子生物学还需要进一步研究各生物分子间的高层次组织和相互作用，尤其是细胞整体反应的分子机理，这在某种程度上是向细胞,生物学的靠拢。分子细胞学或细胞分子生物学就因此而产生，成为人们认识生命的基础。,由于分子生物学涉及认识生命的本质，它也就自然广泛的渗透到医学各学科领域中，成为现代医学重要的基础。在医学各个学科中，包括生理学、微生物学、免疫学、病理学、药理学以及临床各学科分子生物学都正在广泛地形成交叉与渗透，形成了一些交叉学科，如分子,免疫学、分子病毒学、分子病理学和分子药理学等，大大促进了医学的发展。,复习思考题,你对现代分子生物学的含义和包括的研究范围是怎么理解的？,你对分子生物学的现况和今后的发展有何看法？,分子生物学和医学有什么联系？,