1-2-1-微生物的基本培养技术.pptx

,第二,节 微生物的培养技术及应,用,（一）,向,经过杀菌处理的牛奶中添,加某,些对人体有益的细菌，再经过发,酵就,可以制成酸奶，由于制作工艺并,不复,杂，一些人会在家里自制酸奶，,自制,酸奶虽然方便，但是食用自制酸,奶导,致肠胃不适的事件屡见不鲜，主,要原,因是在制作过程中有杂菌混入。那么，怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢？,从社会中来,提示：应该先对制作用具和原料进行灭菌处理，再接种纯的菌种，并控制发酵条件，避免杂菌进入。,一、微生物的基本培养技术,发,酵工程的基础,防止杂菌,污染,，获得,纯净,的,微生物培养物,是研究和应用微生物的,前提,，也是,发酵工程,的重要基础。,微生物培养,的前提条件,一方面,要为人们需要的微生物提供合适的,营养,和,环境条件,；,另一方,面,要确保其他微生物,无法混入,，并将需要的微生物,分离出来,。,相关信,息,微生物是,难以用肉眼,观察的,微小生物,的统称，包括,细菌,、,真菌,、,病毒,及一些,原生生物,等,。,本,章提及的微生物主要是指用于,发酵的,细菌和真菌。,（一）培养基的配制,1,、培养基的概念,2,、培养基的作用,3,、培养基的分类,4,、固体培养基培养微生物的结果,5,、培养基的成分,6,、牛肉膏蛋白胨培养基的组成,7,、培养基配制的其他要求,1,、培养基的概念,人们按照,微生物,对,营养物质,的,不同需求,，配制出供其,生长繁殖,的,营养基,质,，就是,培养基,。,2,、培,养基的作用,用以,培养,、,分离,、,鉴定,、,保存,微生物,或,积累其代谢物,。,3,、培养基的分类,分为加入,凝固剂,（如,琼脂,）、呈,液体,状态的,液体培养基,和呈,固体,状态的,固体培养基,。,液,体培养基,中加入,琼脂,后成为,固体培养基,。,液,体培养基,主要用于,扩大培养,、,工业生,产,；固体培养基主要用于微生物的,分离,、,计数,、,鉴定,等。,微生物,在,琼脂固体培养基,表面或内部生长，可以形成肉眼可见的,菌落,（,colony,）。,一个菌落,一般由,一个微生物,繁殖而来。,4,、固体培养基培养微生物的结果,液体培养基,固体培养基,5,、培养基的成分,虽,然各种培养基的配方不同，但一般都含有,水,、,碳源,（提供碳元素的物质）、,氮源,（提供氮元素的物质）和,无机盐,等营养物质。,旁栏思考：为,什么培养基需要氮源？,氮元素,是,微生物合成,蛋白质,、,核酸,等物质所,必需,的,。,6,、牛肉膏蛋白胨培养基的组成,1000ml,牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成,组分,含量,提供的主要营养,牛肉膏,5g,碳源、磷酸盐和维生素等,蛋白胨,10g,氮源和维生素等,NaCl,5g,无机盐,H,2,O,定容至1000ml,水,7,、培养基配制的其他要求,在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对,pH,、,特殊营养物质,以及,O,2,的需,求。,微生物例子,培养基需要的特殊物质或条件,乳酸杆菌,添加维生素,霉菌,调至酸性,细菌,调至中性或弱碱性,厌氧微生物,提供无氧的条件,（二）无菌技术,1,、无菌技术的意义和目的,2,、消毒和和灭菌,3,、无菌操作的场所,1,、无菌技术,的意义和目的,获,得纯净的微生物培养物的关键是,防止杂菌污染,。,无菌技,术应围绕着如何,避免杂菌的污染,展开，主要包括,消毒,和,灭菌,。,2,、消,毒和,灭,菌,消,毒,是指,使用较为,温和,的,物理,、,化学,或,生物,等方法，杀死物体,表面,或,内部,一部分,微生物,。,灭菌,是指,使用,强烈,的,理化方法,杀死,物体内外,所有,微生物,，包括,芽孢和孢子,。,（,1,）概念,（,2,）应用场景,对,操作的空间,、,操作者,的,衣着和手,进行,清洁,和,消毒,。,将用于,微生物培养,的,器皿,、,接种用具,和,培养基,等进行,灭菌,。,（,3,）,方法,消毒,灭菌,常用方法,煮沸消毒法,巴氏消毒法,化学药剂消毒法,紫外线消毒法,灼烧灭菌法,湿热灭菌法,干热灭菌法,消,毒的方,法,煮沸消毒法,：,100,煮沸,5-6min,。,巴氏消毒法,：,62-65,下煮,30min,或,80-90,下煮,30s-1min,。,化学药剂消毒法,：,用,70%,酒精,擦拭双手；,氯气,消毒水源。,紫外线消毒法：,用紫外灯照射接种室、接种箱、超净工作台,湿,热灭菌,这,是一种利用,沸水,、,流通蒸汽,或,高压蒸汽,进行灭菌的方法。其中,高压蒸汽灭菌,的效果最好。实验室常用的高压蒸汽灭菌,锅就,是以,水蒸气,为介质，在压力为,100 kPa,、温度为,121,的条件下，维持,15,30min,来灭菌的。,灭菌的,方,法,干,热灭菌,将灭菌物品放入密闭容器如,干热灭菌箱,，在,160170,的热空气中维持,23,小时,可以达到灭菌的目的。,耐高温,的和需要,保持干燥,的物品，如,玻璃器皿,（如吸管、培养皿等）、,金属用具,等，可以采用这种方法,灭菌,。,灼,烧灭菌,将,微生物的,接种工具,，如,涂布器,、,接种环,、,接种针,或,其他金属用具,，直接在,酒精灯火焰,的充分燃烧层,灼烧,，可以迅速彻底地,灭,菌,。,此外，在接种过程中，,试管口,、,瓶口,等,容易被污染,的部位，也可以通过,火焰灼烧,来灭菌,。,3,、无菌操作的场所,做好,消毒和灭菌,工作后，要注意避,免,已经灭菌,的材料用具与,周围,物品接,触。为,了避免,周围环境,微生物污染，操作应在,超净工作台,并在,酒精灯火焰,旁进行。,（三）微生物的纯培养,1,、纯培,养的概念,2,、纯培,养的步骤,3,、酵母菌的纯培养,1,、纯培养的概念,在,微生物学中，将接种于培养基内，在合适条件下形成的含,特定种类,微生物的群体,称为,培养物,。,由,单一个体,繁殖所获得的,微生物群体,称为,纯培养物,，获得纯培养物的过程就是,纯培养,。,2,、纯培养的步骤,配置,培养基,灭菌,接,种,分离,培,养,3,、酵母菌的纯培养,（,1,）,原理,（,2,）,材料用具,（,3,）方法步骤,（,4,）结果分析与评价,分,散的,微生物在适宜的,固体培养基,表面或内部可以繁殖形成,肉眼可见,的、,有一定形态结构,的,子细胞群体,，这就是,菌落,。,采用,平板划线法,和,稀释涂布平板法,将,单个,微生物分散在,固体培养基,上，之后得到的,单菌落,一般是由,单个,微生物形成的,纯培养物,。,在,马铃薯琼脂培养基,上进行,酵母菌,的,纯培养,。,（,1,）,原理,（,2,）,材料用具,酵母菌培养液、马铃薯、葡萄糖(或蔗糖)、琼脂、蒸馏水、天平、小刀、纱布、烧杯、锥形瓶、棉塞、牛皮纸(或报纸)、皮筋、培养皿、接种环、酒精灯、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、干热灭菌箱和恒温培养箱等。,A,、配,制培养基,称,取去皮的,马铃薯,200 g，切成小块，加水 1 000 mL，,加热煮沸,至马铃薯软烂，用纱布,过滤,。向滤液中加入 20 g,葡萄糖,(也可用,蔗糖,代替)，15 20 g,琼脂,，用,蒸馏水,定容至 1 000 mL,。,B,、灭菌,将配制好的培养基转移到,锥形瓶,中，,加棉塞,包上牛皮纸,，并用,皮筋勒紧,，再放入,高压蒸汽灭菌锅,中，在压力为 100 KPa、温度为 121,的,条件下，灭菌 15 30 min。将 5 8 套,培养皿,包成一包，用,几层牛皮纸,包紧，放入,干热灭菌箱,内，在 160 170 灭菌 2h。,（,3,）方法步骤,配制培养基,C,、倒,平板,待,培养基,冷却,至,50,左右时，在,酒精灯火焰,附近倒平板。倒平板的具体操作步骤如下。,接,种和分离酵母菌,通过,接种环,在,固体培养基,表面,连续划线,的操作，将,聚集的菌种,逐步,稀释分散,到培养基的表面。经,数次划线,后培养，可以,分离,得到,单菌落,。,平板划线,的具体操作见下面的流程图。,平板划线法注意事项,:,接种环,只蘸一次菌,液,，,但,要在培养基不同位置,连续划线多,次,。,划,线时,最后,一,区域不要与第,一区,域相连,。,每次,划线前,接种环进行灭,菌,，最后一次划线结束后，也要,灼烧接种环,。,划线,后,，,培,养皿,倒置培,养,。,划线,用力,要,大小适当,，防止用力过大将培养基,划破,。,灼,烧后,的接种环，要,冷却,后才能继续操作，以免温度太高杀死菌种。,在实验室中，,切不可,吃东西、喝水，离开实验室时一定要,洗手,，以防止被微生物感染。,使,用后,的培养基在,丢弃前,一定要进行,灭菌,处理，以,免污染环境,。,培,养酵母菌,完成,平板划线后,，待菌液被培养基,吸收,，将,接种后的,平板和,一个未接种的,平板,倒置,，放入,28,左右（培养温度因酵母菌种类的不同而稍有差异）的恒温培养箱中培,养,24 48h,。,（,4,）结果分析与,评,1.,未接种的培养基表面是否有菌落生长，如果有，说明了什么？,2.,在接种酵母菌的培养基上，你是否观察到了菌落？这些菌落的颜色、形状、大小是否一致，如果你观察到了不同形态的菌落，你能分析可能是哪些原因引起的吗？,在,未接种,的培养基表面应该,没有,菌落生长，如果,有,，说明培养基,被杂菌污染,。,如果观察到了,不同形态,的菌落，可能是接种的,菌种不纯,或,无菌操作不规范,等原因引起的。,评估论点的可信程度,有一段时间，水果“酵素”风靡各地。水果“酵素”制作的大致过程是：将洗净、切成块状的水果放入洁净的容器，再加入糖和水,密封，置于阴凉处发酵一至两周。有人说，吃水果“酵素”可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力。请评估这一论点是否可信。追问以下问题可以帮助你分析。,“酵素”是什么？水果“酵素”的制作原理是什么？水果“酵素”中可能含有哪些成分？它是否含有人们无法从其他食品中获取但又是维护健康所必需的成分？水果“酵素”中的所有成分都有益于人体健康吗？,如果要更加有力地支持或反驳水果“酵素”有益健康的论点，应该怎样获取证据？,所,谓“酵素”，就是,“酶”,的另一种说法。“酵素”制作就是利用微生物进行,无氧呼吸,的原理，进行像制作泡菜一样的,发酵,。这样制作的“酵素”中可能有,糖类,(包括-些简单的糖和膳食纤维等)、,蛋白质,(包括多种酶)、,有机酸,等成分，,不存在,它独有的、特殊的营养物质，其中甚至可能含有微生物发酵产生的,有毒物质,，食用后可能会危害人体健康。因此，“吃水果酵素可以美容、减肥、促进消化和提高免疫力,”,的论点,值得怀疑,。,评估论点的可信程度,再会,