自身抗体风湿病中的应用.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,自身抗体风湿病中的应用,狼疮细胞（,1948,，,Hargrave),一、概述,自身抗体的定义：,以自身组织成分为靶抗原而出现的相应抗体,风湿免疫病自身抗体,抗核抗体谱,抗磷脂抗体,类风湿关节炎抗体,肌炎抗体,血管炎抗体,自身免疫性肝病抗体,自身抗体在自身免疫病中的意义,1,、是自身免疫病的标记,2,、有助于弥漫性结缔组织病（,CTD,）,的诊,断和鉴别诊断,3,、,判断疾病的活动性,4,、,预测疾病的预后,二、,自身抗体的检测方法,1,、,间接免疫荧光法（,IFT,）,2,、,ELISA,3,、免疫印迹法,4,、放射免疫法,5,、免疫双扩散,抗核抗体（核仁型,Mi-2,、,PM-SCL,、,RNA Polymerase I,）,抗核抗体（核膜型,dsDNA,）,抗核抗体（均质型,Histone-DNA,）,三、常见的自身免疫性疾病的抗体,ANA,谱及其临床意义,定义：是一种对细胞内脱氧核糖核酸,(DNA),核糖核酸,(RNA),蛋白或这些物质的分子复合物的自身抗体，因此,ANA,应称为抗核抗体谱。,间接免疫荧光法（,IFT,）,:HEp-2,细胞,灵长类肝,脏冰冻组织切片,1,、完整的抗原谱,(,细胞核、细胞浆,)2,、,ANA,检测的金标准，具有最高的敏感性和特,异性,3,、质量控制容易,4,、除,ANA,外，还可获得一些对临床医生有用的,其他信息 (如,ANCA),ANA,的检测方法,ANA,的检测方法,ELISA:,用高度纯化的抗原来筛查,ANAs,1,、抗原谱比,IIF,窄,2,、对所用的靶抗原具有很高的敏感性和特异性,3,、操作简便、快速,ANA,分类,抗,DNA,抗体,抗,DNA,抗体：,ssDNA/dsDNA,抗原：,单链,DNA，,变性的,DNA(,嘌呤,和,嘧啶碱基,),双链,DNA，,天然,DNA(,脱氧核糖核酸骨架,),相关疾病：,ssDNA dsDNA,SLE 80.8%30%,Sjgrens,综合征 40.0%,硬皮病,44.0%,类风湿性关节炎 12.3%,健康献血员 6.8%,ANA,分类,抗非组蛋白抗体,抗,ENA,抗体,：此组抗体不含组蛋白，可以溶,于盐水而被提取,检测方法：免疫印迹法,抗,ENA,抗体,抗,Sm,抗体,抗原:与,U1-、U2-、U4-、U5-,或,U6-nRNA,相关的,6,种不同的蛋白分子,(,核心蛋白,B、B、D、E、F、G),相关疾病:,SLE:,5%-30%,抗,ENA,抗体,抗核糖体蛋白抗体,靶抗原:由3个蛋白质分子组成的核糖体,60S,亚单位：,P0、P1、P2(38、16、15 kD),在碳末端具有,相同的免疫反应性表位,相关疾病:,SLE:,5%-15%,抗,ENA,抗体,抗,SS-A,抗体,靶抗原:与,Y1、Y3、Y4,或,Y5,型,RNA,相关 的,2种蛋白分子,(52 kDa,和60,kDa),相关疾病:干燥综合征,:40%-95%,SLE:34.7%,抗,ENA,抗体,抗,SS-B,抗体,靶抗原:与小分子,RNA(U6-RNA、tRNA,前体)结合的,磷蛋白,(48 kDa),相关疾病:干燥综合征：,40%-95%,SLE:,10%-20%,抗,ENA,抗体,抗,U1-nRNP,抗体,靶抗原:三种与,U1-nRNA,相关的蛋白,(70KD、A,和,C,蛋白),相关疾病:,MCTD:95%-100%SLE:,15%-40%,抗,ENA,抗体,抗,Scl-70,抗体,靶抗原:,DNA,拓扑异构酶,I(100 kDa),相关疾病:硬皮病:79.7%,(,25%-75%),抗,ENA,抗体,抗,J0-1,抗体,靶抗原:组氨酰-,tRNA,合成酶(50,kDa)，,细胞浆磷蛋白,相关疾病:多肌炎/皮肌炎:25%-35%,伴有肺间质纤维化的多肌炎,:70%,ANA,分类,抗非组蛋白抗体,2,、抗着丝点抗体,靶抗原:着丝点中的4种蛋白分子：,A-(17 kDa)、,B-(80 kDa)、C-(140 B-(80 kDa)、C-(140 kDa)、,D-,蛋白(50,kDa),主要的靶抗原是着丝点蛋白,B,相关疾病:硬皮病,:18%,局限型,(,CREST,综合征,),:80%-95%,ANA,分类,抗组蛋白抗体,抗原:组蛋白,H1,H2A,H2B,H3,H4 (,主要的靶抗原为,H1,和,H2B),相关疾病:,药物诱导性,LE:100%,（标志性抗体）,SLE:,40%-80%在其他风湿病中很少见,ANA,分类,抗核仁抗体,靶抗原:,核仁内的,RNA,多聚酶、原纤维,和,To/Th,抗原,相关疾病,：,SSc 4%,SLE,患者特异性自身抗体,靶抗原 阳性率(%),ssDNA 70-95,dsDNA 30-90,组蛋白 40-80,U1-nRNP 15-40,Sm 5-30,SS-A 20-60,SS-B 10-20,核糖体,P,蛋白 5-15,增殖性细胞核抗原,I(PCNA)3,心磷脂，,2-糖蛋白1 20-40,Ku 5-10,抗核小体抗体,90,多肌炎和皮肌炎抗体谱,靶抗原 阳性率,(%),ssDNA40-50,Jo-125-35,PM-Scl(,重叠综合征)8,Mi-2 5,Ku(,与硬皮病的重叠综合征,)1-7,PL-7、PL-12、OJ、EJ、KJ 2-3,原发性干燥综合征抗体谱,靶抗原 阳性率(%),SS-A 40-95,SS-B 40-95,ssDNA 40-95,进行性系统性硬化症抗体谱,靶抗原 阳性率(%),着丝点 80-95,Scl-70 25-75,ssDNA 30-60,原纤维蛋白 5-10,RNA,多聚酶 4,PM-Scl(,重叠综合征)3,NOR-90(,核仁形成区)少见,Ku(,与多肌炎的重叠综合征,)1-7,可出现,ANA,的感染、药物,疟疾,血吸虫,结核,麻风,沙门氏菌,克雷伯菌,EB,病毒,HIV,肯定的药物,肼苯哒嗪,普鲁卡因酰胺,异烟肼,可能的药物,(,近,80,种）,米诺环素,SASP,Etanercept,Infliximab,可出现,ANA,的肝病,慢性活动性肝炎,原发性胆汁性肝硬化,自身免疫肝炎,自身免疫胆管炎,可出现,ANA,的肺病,特发性肺纤维化,石棉导致的纤维化,原发性肺动脉高压,可出现,ANA,的肿瘤,白血病,黑色素瘤,实体瘤（卵巢瘤、乳腺癌、肺癌、肾癌）,淋巴瘤,可出现,ANA,的血液病,特发性血小板减少性紫癜,自身免疫性溶血性贫血,可出现,ANA,的内分泌病,1,型糖尿病,Grave,病,Hashimoto,甲状腺炎,RA,自身抗体谱及临床意义,RF 60,RA,中出现，量与,RA,活动性及,严重性呈正相关。亦在其它,CTD,出现,抗,CCP,在,50,RA,中出现,（,聚角蛋白微丝,蛋白）,特异性较高,AKA,（,抗角蛋白抗体）,在,40,RA,阳性,APF,（,抗核周因子）在52,RA,阳性,抗,RA33RA,阳性率为35,抗,Sa,在部分,RA,阳性,类风湿因子（,RF),抗原：变性的,IgG Fc,段,意义,RA,阳性率,70%,，阳性预测值,24%,。,滴度与疾病活动平行,其他风湿病可阳性,感染、非感染疾病、正常人可阳性,非风湿病中的,RF,状态,RF,频率（,%,）,年龄（,60,）,5-25%,感染,细菌性心内膜炎,25-50,乙型或丙型肝炎,20-75,结核,8,梅毒,13,寄生虫病,20-90,麻风,5-58,病毒感染,15-65,肺病,结节病,3-33,肺间质纤维化,10-50,矽肺,30-50,石棉肺,30,各种各样疾病,原发性胆汁性肝硬化,45-70,恶性肿瘤,5-25,多次免疫接种后,10-15,抗核周因子,-(,APF),靶抗原位于人颊粘膜细胞的核周颗粒中,间接免疫荧光法检测,对,RA,诊断的特异性高达,90%,以上,APF,阳性与病情相关，往往提示预后欠佳（尤其对,RF,阴性的患者）,抗角蛋白抗体,-,（,AKA,）,取,6,周龄雄性,Wistar,大鼠的中,1/3,食道切片为底物,间接免疫荧光法,以典型的角质层板层状、线状沉积的荧光为阳性,对,RA,诊断的敏感性,44.13%,、特异性,89%,与,RA,的病情严重程度相关,提示预后不良,抗,Sa,抗,体,新鲜胎盘提取,免疫印迹法,分子量为,50,和,/,或,55KD,部位出现条带者为阳性,敏感性,36.7%,、特异性,91.6%,HLA-DR4,相关是慢性、严重,RA,的早期标记,RA,的滑液中也有高浓度的抗,Sa,抗检出，提示在滑膜可能发生原位免疫反应,抗,RA33/36,抗体,从,Hela,细胞或,Ehrilich,瘤细胞核中提取,免疫印迹法,分子量,33,或,36KD,区带出现阳性者为阳性,敏感性,35.8%,、特异性,99.6%,抗环瓜氨酸多肽,(CCP),抗体,1998,年 证实抗,filaggrin,相关抗体识别的主要抗原决定簇成分是瓜氨酸,2000,年 合成环瓜氨酸肽（,CCP,），并将抗,CCP,抗体用于,RA,检测,ELISA,法检测,对,RA,诊断高度敏感和特异,阳性者骨破坏较阴性者严重,对,RA,的早期诊断和预后评估都很有意义,抗,肽酰基精氨酸脱亚氨酶,(,PADI4),抗体,RA,抗,PADI4,抗体阳性率为,47%,抗,PADI4,抗体对,RA,诊断的敏,感性为,43%,特异性为,92%,。,RF,阴性患者,PADI4,抗体阳性,50%;AKA,阴性的患者,PADI4,抗体阳性,43%;,抗,CCP,抗体阴性的患者抗,PADI4,抗体阳性,60%,。,抗突变型瓜氨酸化波形蛋白,(MCV),抗体,136,例,RA,患者抗,MCV,抗体敏感性和特异性分别为,95.6%,和,80.8%,。,抗,MCV,抗体与抗,CCP,抗体、,AKA,和,RF,的重叠阳性率分别为,91.9%,、,52.8%,和,76.5%,。,血管炎相关抗体,cANCA,靶抗原：,PR-3(,蛋白酶,3,pANCA,靶抗原：,MPO(,髓过氧化酶,),弹性蛋白酶,乳铁蛋白,Wegener,肉芽肿,其量指示病情活动,其它血管炎及炎性,肠病,抗丝氨酸蛋白酶（,PR3),抗体,抗原：丝氨酸蛋白酶（,PR3,）,意义,主要出现在,Wegner,肉芽肿和显微镜下多动脉炎,在,Wegner,肉芽肿、显微镜下多动脉炎,cANCA,持续高滴度或滴度升高常与疾病复发相关,(2/3),。,针对蛋白酶,3,的,cANCA,的意义,疾病,频率（,%,）,Wegener,s,肉芽肿,90,显微镜下多动脉炎,50,结节性多动脉炎,5-10,变应性肉芽肿性血管炎,10,过敏性血管炎,Rare,光敏性紫癜,Rare,IgA,肾病,Rare,感染后肾小球肾炎,Rare,系统性红斑狼疮,Rare,川崎病,+,对照,抗髓过氧化物酶（,MPO,）抗体,抗原：髓过氧化物酶（,MPO,）,意义,可出现于多种血管炎性疾病。,也可见于,SLE,、药物等,针对,MPO,的,pANCA,的意义,疾病,频率（,%,）,显微镜下多动脉炎,50-70,特发性坏死性肾小球肾炎,50-85,变应性肉芽肿性血管炎,70-85,Goodpasture,综合征,10-30,Wegener,肉芽肿,5-10,结节性多动脉炎,+,多血管炎重叠,+,系统性红斑狼疮,+,肼苯哒嗪诱导的肾炎,+,川崎病,+,cANCA(,胞浆型,丝氨酸蛋白酶,),pANCA,(,核周型）,1,、髓过氧化物酶,2,、弹力酶,3,、组织蛋白酶,G,4,、乳铁蛋白,5,、溶酶体,6,、细菌增透蛋白,7,、,Azurocidin,8,、,原发性胆汁性肝硬化抗体谱,靶抗原 阳性率(%),AMA M2 85-95,AMA M4 40-60,AMA M9 35,Sp-100(,核点)30,肌动蛋白 10-20,AMA M2,靶抗原:由3种不同的乙酰基转移酶,组成的多酶复合物：,-,丙酮酸脱氢酶(74,kDa)-2-,酮酸脱氢酶(50,kDa)-2-,酮戊二酸脱氢酶(50,kDa),与丙酮酸脱氢酶复合物相关,的蛋白,X(52 kDa),相关疾病:,PBC:,85%-95%,自身免疫性肝炎抗体谱,靶抗原 阳性率(%),肝特异性蛋白(,LSP)50-100,肝细胞膜抗原(,LMA)35-100,唾液酸糖蛋白受体,80-90,肌动蛋白 40-90,ANA 30-40,核膜?,SLA/LP 15-30,肝肾微粒体(,LKM-1)7,LC-1?,抗磷脂抗体,(APA),APA,定义：是一大类针对各种负电荷磷脂一蛋白复合,物的自身或同种抗体。,APA,的检测方法：,ELISA,法,ACL,LAC,的检测方法：,白陶土凝血时间,激活的部分凝血活酶时间,复钙凝血时间,鲁塞尔蝰蛇毒凝血时间等。,所测得时间延长,而不能为正常血浆所纠正时,则提示有,LAC,存在。,LAC,和,ACL,可出现于多种自身免疫病：,溶血性贫血,ITP,（近,30%,）,幼年关节炎,RA,（,7-50%,）,银屑病关节炎,(28%),硬皮病（,25%,）,白塞病（,20%,）,干燥综合征,(25-42%),MCTD,（,22%,）,PM/DM,风湿性多肌痛,(20%),慢性盘状狼疮,雷诺氏现象,APL,也可出现在感染和使用某些药物病人中,甲肝,流行性腮腺炎,败血症,HIV,梅毒,HTLV-1,疟疾,卡氏肺囊虫,感染性单核细胞增多症,风疹,氯苯嗪,苯妥英,肼苯哒嗪,普鲁卡因酰胺,奎尼丁,奎宁,丙戊酸盐,阿莫西林,普洛奈尔,可卡因,磺胺嘧啶,乙胺嘧啶,链霉素,抗,b2,糖蛋白,-1(b2GP-1),抗体,抗原：,b2,糖蛋白,-1(,与磷脂结合的凝血抑制因子,),意义,常与其他抗磷脂抗体同时出现，但有,11%,的,APS,病人仅有抗,b2GP-1,。,抗,b2GP-1,较单独抗心磷脂抗体与,APS,相关性更好。,感染、药物病人,APL,无抗,b2GP-1,活性。,哪些患者需要查自身抗体,不明原因发热,不明原因蛋白尿、血尿、浮肿,不明原因多关节炎,雷诺现象,面部对称性红斑,反复口腔溃疡,不明原因带肌疼痛,长期口干、或眼干,不明原因肺部间质性炎症,不明原因多系统损害等,谢 谢,