菊花提取物中残留有机溶剂的测定_浙江大学_22页.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,菊花提取物中残留有机溶剂的测定,第一小组：黄红霞等,第二小组：王峰等,第三小组：丁祖德等,杭白菊,(HangZhou White C hrysanthemum),，又名杭菊，产自浙北杭嘉湖平原以桐乡市为主,是“浙八味”之一。新的研究表明杭白菊提取物具有清除活性氧自由基，对抑制肿瘤、延缓衰老及增强人体免疫力有一定功效。,引言,目的,菊花一般用乙醇进行粗提取，还用到大孔树脂以及萃取等方法。因此菊花提取物中会残留甲醇，乙醇，氯仿，乙酸乙酯等有机溶剂。,其中有些溶剂对人体有害，残留在药物中势必会影响药物的安全。为此需要进行残留有机溶剂的测定。,注,本实验杭白菊提取物是药物分析研究室研制的新药。,ICH,规定项下的第一至第四类残留溶剂,:,第一类,:,避免使用的溶剂,第二类,:,限制使用的溶剂,第三类,:,具有低毒性的溶剂,第四类,:,尚无适当毒性数据的溶剂,注,菊花提取物中残留的有机溶剂归属如下：氯仿属于第二类，乙酸乙酯属于第三类，甲醇与乙醇属于第四类。,有机溶剂残留量测定方法,中国药典采用,气相色谱法,检查有机溶剂,第一法,毛细管柱顶空进样等温法,(,适用与挥发性大的组分,),第二法,毛细管柱顶空进样程序升温法,第三法,溶液直接进样法,标准溶液加入法,(,新,),ChP,（,2005,）规定：,顶空进样时，因供试品与对照品处于不同的基质中，采用标准溶液加入法可消除基质效应的影响，当其他定量方法与标准溶液加入法不一致时，以后者为准。,杂质对照液,+,供试液,外标法或,内标法,测定总量,总量,-,加入的杂质对照品量,=,杂质量,文献,1,测定有机残留溶剂为乙醇等,色谱条件,色谱柱：毛细石英柱,(30 m320m0.25 m),；,FID,检测,温度,250,进样口温度,250,柱温,100,载气：高纯氮，流速,20 ml/min,；,H,2,流速,40 ml/min,，空气流速,400ml/min,分流比,20:1,，恒压模式；,文献,2,测定有机残留溶剂为乙醇、乙酸乙酯等,色谱条件,色谱柱：,OV101,（油状甲基聚硅氧烷）,毛细管色谱柱（,30mX0.22mm,）,FID,检测，温度,220,气化室温度：,200,0,C,柱温程序升温,:35,0,C,保持,5min,以,40,0,C/min,升至,80,0,C,保持,10min,载气：氮气；流速,30ml/min,；分流比约,20:1,文献,3,（顶空进样）,测定有机残留溶剂为甲醇、乙醇等,色谱条件,色谱柱,:DBWAX,毛细管色谱柱,(30 m0.53 mm),FID,检测器,检测室温度,150,柱温,:70,进样口温度,80,气化室温度,150,载气,:,高纯氮气；流量,2.43 ml/min,；分流比,20,：,1,设计方案,参考相关文献中测得菊花提取物中残留的有机溶,剂主要是甲醇和乙醇，我们实验以测定有机溶剂,甲醇,和乙醇,为目的进行实验设计。,考虑到顶空进样需要足够高的蒸汽压且进样器费昂,贵。本次实验选用,溶液直接进样法,。,色谱条件,色谱柱：石英毛细管柱,(30 m320m0.25 m),柱温：,35,进样口温度,:200,检测器温度：,250,检测器：氢火焰离子化检测器,载气：氮气,;,空气：氢气为,10,：,1,气体流速,:30ml/min,根据三篇文献，选择常用的色谱柱长度与分流比作为参考参数。,选择,氢火焰离子化检测器因为它具有专,属性强，灵敏度高，响应快等特点。,色谱柱的选择参考文献,1,，其参考柱温的设定根据“低柱温”原则，参考相应文献得出。,样品沸程不宽不需要程序升温。,实验内容,1,定位,取甲醇,1 uL,乙醇,1 uL,进样 测定保留时间,2,溶液配置（,中国药典,2005,版,附录,P,残留溶剂测定法规定，药品中甲醇含量不得超过,0.3%,，乙醇含量不得超过,0.5%,）,（,1,）根据甲醇溶液密度为,0.792g/ml,乙醇溶液密度为,0.790g/ml,分别配置含甲醇,0.3%,，乙醇,0.5%,的溶液作为对照品溶液。,（,2,）取杭白菊适量（制成浓度为,0.10g/ml,）漏斗过滤 滤膜过滤 样品溶液,3.,色谱条件的优化,4,残留溶剂甲醇乙醇含量的测定（限量法测定）,讨论,一 实验难点,实验需测的有机溶剂甲醇乙醇是,同系物,，一般条件下比较难分离；加上有机溶剂中其它组分（杂质）的存在会对两者的分离造成一定干扰，所以选择合适的条件对两者进行分离并且尽量排除其它组分干扰是本实验的重点也是难点。,我们将从,柱温的选择,和,气体流速,两方面，根据,色谱系统适应性,实验的相应指标，参考相关参数，对实验条件进行优化。,附,中国药典规定，在测定残留溶剂前应作,色谱系统适应性,实验。,系统适用性试验：,毛细管柱效,n 5000,填充柱柱效,n 1000,分 离 度,R 1.5,内标法定量,RSD,5%,（,n=5,）,外标法定量,RSD,10%,（,n=5,）,二 色谱条件的优化,（,1,）柱温的选择,分别以参考柱温,35,，,40,和,30,进样,，参考理论,塔板数，拖尾因子等参数，比较分离效果和峰形等。,低柱温有利于分离但传质阻力增加，使色谱峰扩张,甚至拖尾；柱温高有利于传质并减少拖尾，但太高会,使固定液流失。,柱温的选择的,原则,是在能保证,R,的前提下，尽量使,用低柱温，但应保证适宜的,tR,及峰不拖尾，减小检测,本底。,（,2,）气体流速的选择,气体流速的改变对分离效果影响比较大。可以先在参考流速,30ml/min,条件下进样，再,小幅度改变气体流速，比较改变前后分离效果和峰形。最后得出最优气体流速。,三 实验中可能出现的问题及原因分析：,出现的问题 可能的原因,峰展宽,1.,进样体积过大,2.,毛细管流速选择不合理,3.,进样速度太慢,4.,保留时间过长,峰拖尾,1.,柱温选择不合理,2.,峰干扰,3.,死体积或柱外体积过大,4.,柱效下降,出现的问题 可能的原因,保留时间变化,1.,柱温变化,2.,进样条件改变,3.,柱污染,注,因为我们要测的甲醇乙醇是比较容易挥发的，所以操作尽量快些，可以将配好的溶液分装在多个不同容器中，用时只打开其中一个，以减少挥发，提高实验的准确性。实验前应对载气等进行检漏。,参考文献：,1,、国家药典委员会编,.,中华人民共和国药典,2005,年版二部附录；,54-57.,2,、李福高，蒋惠娣，王向军，曾苏,.,杭白菊挥发油中,B-,榄香烯、樟脑及龙脑含量的测定,.,中国药学杂志,2005,年,2,月第,40,卷第,3,期；,228-230.,3,、姚彤炜编著,.,药物分析实验与药物分析习题集,.,浙江大学出版社,.2003,年,1,月第,1,版,.22-26.,4,、王海芳，李海燕,.,有机溶剂残留量的检测研究,.IM&P,化工矿物与加工,2002,年第,9,期；,21-22.,5,、杨 俊，蒋惠娣，徐娟华，杭白菊总黄酮的提取工艺及其含量的动态变化研究 中草药，,2002,年第,33,卷第,11,期,谢谢观赏！,