动物细胞融合和单克隆抗体-(2).ppt

,单击此处编辑母版标题样式,*,*,单击此处编辑母版文本样式,温馨提示,1.本节课的学习任务为,2.2.2,单克隆抗体,2.请同学们拿出课本、学案、文具,3.,准备好积极热情的学习态度,谈,色变,专题,2,细胞工程,单克隆抗体,强调：,效应,B,淋巴细胞是能够产生抗体的,B,淋巴细胞，下文将其简称为,B,淋巴细胞,温故知新,抗体,1,、抗原和抗体是什么？,2,、抗体有什么特点？,3,、抗体由何种细胞产生？,抗体的传统生产方法,抗原,反复注,射动物,从动物的,血清,中分离抗体,该法制备抗体的缺点：,产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。,如何解决这个问题呢？,单克隆抗体！,（多种抗原决定簇）,（多种,B,淋巴细胞）,（多种抗体）,读下面一段资料，,找出单克隆抗体的概念,人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的,B,细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个,B,细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个,B,细胞进行无性繁殖，即克隆。,探究一：单克隆抗体的概念,单克隆,抗体：单个,B,细胞克隆产生的,化学性质单一、特异性强,的抗体,探究二：单克隆抗体的制备方法,思考问题：,1.B,淋巴细胞是一种高度分化的细胞，有没有可能通过细胞培养进行无限增殖？,2.,我们学过的什么细胞具有这样的能力？,3.,有什么办法让,B,淋巴细胞也具有这样的能力？,小组讨论,一个,B,淋巴细胞,只分泌一种特异性抗体,骨髓瘤细胞,能无限增殖,杂交瘤细胞,动物细胞培养技术,设计方案：,动物细胞融合技术,单克隆抗体,1975,年英国科学家,米尔斯坦,和德国科学家,柯勒,的实验,为什么给小鼠注射特定的抗原蛋白？,诱导动物细胞融合的方法有哪些？融合,后,会,出现几类细胞,？,杂交瘤细胞是如何筛选出来的？,是否所有的杂交瘤细胞都能产生所需的专一性抗体？,如何大规模进行培养得到大量的单克隆抗体？,探究三：单克隆抗体的制备过程（重点）,思考,BB,、,B,瘤,、,瘤瘤,（,B,、瘤）,（一选）,选择性培养基,：只有,杂交瘤细胞,才能存活,获得产生相应抗体的,B,细胞,细胞合成,DNA,有,D,和,S,两条途径，其中,D,途径能被氨基喋呤阻断。人淋巴细胞中有这两种,DNA,的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤中尽管没有,S,途径，但能不断分裂增殖。将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，然后在培养液中加入,氨基喋呤,。,B,BB,瘤,瘤瘤,B,瘤,BB,、,B,瘤,、,瘤瘤,（,B,、瘤）,（一选）,选择性培养基,：只有,杂交瘤细胞,才能存活,获得产生相应抗体的,B,细胞,（二选）：选出能产生所需,专一抗体的杂交瘤细胞,阳,性,孔,克隆化培养和抗体检测,首先将第一次筛选得到的杂交瘤细胞进行克隆化培养，得到更多的杂交瘤细胞，再将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每一个孔尽可能只含一个杂交瘤细胞，再由这些单细胞克隆生长，最终选出分泌预定特异性抗体的杂交瘤细胞。,BB,、,B,瘤,、,瘤瘤,（,B,、瘤）,（一选）,选择性培养基,：只有,杂交瘤细胞,才能存活,获得产生相应抗体的,B,细胞,（二选）：选出能产生所需,专一抗体的杂交瘤细胞,体外培养,小鼠腹腔内培养,一注射,二融合,三筛选,四培养,提醒注意,单克隆制备的过程经历了,两次筛选,。,比较项目,第一次筛选,第二次筛选,原理,在选择性培养基中添加某种药物，特异性杀死未融合细胞和融合的同种核细胞,抗原,抗体的特异性结合，进行抗体检测,目的,选出杂交瘤细胞,选出既能无限增殖，又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞,2.3,单克隆抗体的应用,诊断试剂,最广泛,准确、高效、简易、快速,想知道自己的血型吗？,单克隆抗体测定血型的原理,A,血型：,A,抗原,+,单克隆抗,A,抗体,=,发生凝集反应,A,抗原,+,单克隆抗,B,抗体 发生凝集反应,B,血型：,B,抗原,+,单克隆抗,A,抗体,发生凝集反应,B,抗原,+,单克隆抗,B,抗体,=,发生凝集反应,AB,血型：均发生凝集反应,O,血型：无凝集反应,“,生物导弹”抗癌细胞单克隆抗体药物,治疗疾病和运载药物,用癌细胞作为抗原，免疫小鼠，制备抗癌细胞单克隆抗体，并与抗癌药物连接，便制成了生物导弹，注入患者体内，借助单克隆抗体的导向作用，将药物定向带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞。这样既不损伤正常的细胞，又减少了药剂的用量。,单抗导向，药物为弹头,【,例,1】,科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）,A.,经过免疫的,B,淋巴细胞,C.,经过免疫的,T,淋巴细胞,B.,不经过免疫的,T,淋巴细胞,D.,不经过免疫的,B,淋巴细胞,【,例,2】,单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和,B,淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）,淋巴细胞小鼠骨髓瘤细胞,B,淋巴细胞自身融,合细胞小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞杂交瘤细胞,A,B,C,D,【,例,3】,用动物细胞工程技术获取单克隆抗体，下列实验步骤中错误的 是（）,A,将抗原注入小鼠体内，获得能产生抗体的,B,淋巴细胞,B,用纤维素酶处理,B,淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞,C,用聚乙二醇作诱导剂，促使能产生抗体的,B,淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,D,筛选杂交细胞，并从中选出能产生所需抗体的细胞群，培养后提取单克隆抗体,初试牛刀,A,C,B,单克隆抗体,21,本节小结,一、单克隆抗体的概念,二、单克隆抗体的制备方法,三、单克隆抗体的制备过程（,高考重点,）,一注射,二融合,三筛选,四培养,布置作业：,1,、完成学案,8,上的课后习题。,2,、预习下节新课，完成学案,9,上的有关预习内容。,谢谢,