第九章-二氢吡啶类-钙通道阻滞药物的分析文档.ppt

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第九章-二氢吡啶类-钙通道阻滞药物的分析文档,第一节 结构与性质,一、常见药物的结构,二氢吡啶类药物的基本骨架：,为活性必需，变成吡啶环或六氢吡啶环活性消失,为活性必需，若为乙酰基或氰基活性降低，若为硝基则激活钙通道,邻、间位有吸电子基团活性较佳，对位取代活性下降,取代基与活性关系次序：,H,甲基环烷基苯基或取代苯基,影响作用部位，,3,5,位取代酯基不同，为手性中心。,硝苯地平,尼群地平,尼莫地平,苯磺酸氨氯地平,非洛地平,二、主要理化性质,1.,二氢吡啶环的还原性,氧化还原反应鉴别或氧化还原滴定法含量测定,2.,硝基的氧化性,重氮化,-,偶合反应鉴别,ChP 尼莫地平的鉴别：,理论板数按尼莫地平峰计算不低于8000，尼莫地平峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。,尼可刹米为中枢兴奋药,（二）尼可刹米中有关物质的检查,避光操作。,取硝苯地平对照品、杂质对照品与杂质对照品各适量，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中各约含1mg、10g与10g的混合溶液，取20l，注入液相色谱仪，杂质峰、杂质峰与硝苯地平峰之间的分离度均应符合要求。,人血浆中氨氯地平对映体的固相萃取LC-MS/MS法测定：,（二）与氢氧化钠试液反应,水中易溶，乙醇中微溶、乙醚中极微溶,二、紫外-可见分光光度法,二氢吡啶类药物遇光极不稳定，易发生光化学歧化作用，引入杂质，因此各国药典标准中均规定在避光条件下进行有关物质检查，大多采用HPLC法。,3.,二氢吡啶环氨基质子解离性,4.,稳定性,5.,旋光性,6.,吸收光谱特性,第二节 鉴别试验,一、化学鉴别法,（一）与亚铁盐反应,二氢吡啶类药物苯环上硝基具有氧化性，可将氢氧化亚铁氧化为红棕色氢氧化铁沉淀。,ChP 尼莫地平的鉴别：,取本品约20mg，加乙醇2ml溶解后，加新制的5%硫酸亚铁铵溶液2ml，硫酸溶液1滴与氢氧化钾溶液1ml，强烈振摇，1分钟内沉淀由灰绿色变为红棕色。,（二）与氢氧化钠试液反应,ChP 硝苯地平的鉴别：,取本品约25mg，加丙酮1ml溶解，加20%氢氧化钠溶液35滴，振摇，溶液显橙红色。,（三）沉淀反应,ChP 尼莫地平注射液的鉴别：,取本品适量（约相当于尼莫地平20mg），置分液漏斗中，加乙醚30ml振摇提取，静置，分取乙醚层，置水浴上蒸干，放冷，残渣加乙醇2ml，搅拌使溶解，移至试管中，加1%氯化汞溶液3ml，即发生白色沉淀。,（四）重氮化,-,偶合反应,BP 硝苯地平的鉴别：,取本品25mg，加10ml盐酸-水-乙醇混合溶液（5），温热，加入锌粒，放置5分钟，滤过，滤液加亚硝酸钠溶液（10g/L）5ml，放置2分钟，再加入氨基磺酸铵溶液（50g/L）2ml，摇匀，加入盐酸萘乙二胺溶液（5g/L）2ml，即显红色（持续5分钟以上）。,二、分光光度法,（一）紫外分光光度法,ChP 尼群地平软胶囊的鉴别：,避光操作。取本品的内容物约1g，置100ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，取10ml，置100ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，在353nm与303nm的波长处分别测定吸光度，在353nm与303nm的吸光度比值应为。,（二）红外分光光度法,ChP 尼群地平片的鉴别：,避光操作。取本品（约相当于尼群地平100mg），研细，加丙酮10ml，振摇使溶解，滤过，滤液暗处挥干，残渣经减压干燥，依法测定。本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱（光谱集600）一致。,五、色谱法,（一）高效液相色谱法,ChP 尼莫地平片的鉴别：,在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。,（二）薄层色谱法,BP 硝苯地平的鉴别：,取本品加甲醇制成每1ml 中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；另取硝苯地平对照品适量，加甲醇制成每1ml 约含1mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶F254薄层板上，以乙酸乙酯-环己烷（4060）为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视，供试品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的主斑点一致。,第三节 有关物质的检查,二氢吡啶类药物遇光极不稳定，易发生光化学歧化作用，引入杂质，因此各国药典标准中均规定在避光条件下进行有关物质检查，大多采用,HPLC,法。,硝苯地平在光照和氧化剂存在条件下分别生成两种降解氧化产物：,杂质,I,：,2,6-,二甲基,-4-(2-,硝基苯基,)-3,5-,吡啶二甲酸二甲酯,杂质,II,：,2,6-,二甲基,-4-(2-,亚硝基苯基,)-3,5-,吡啶二甲酸二甲酯,ChP 硝苯地平有关物质的检查：,避光操作。取本品，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，作为供试品溶液；另取2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯(杂质)对照品与2,6-二甲基-4-(2-亚硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯(杂质)对照品，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中各约含10g的混合溶液，作为对照品贮备液；分别精密量取供试品溶液与对照品贮备液各适量，用流动相定量稀释制成每1ml中分别含硝苯地平2g、杂质1g与杂质1g的混合溶液，作为对照溶液。,对照高效液相色谱法试验。用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇,-,水,(60:40),为流动相；检测波长为,235nm,。取硝苯地平对照品、杂质,对照品与杂质,对照品各适量，加甲醇溶解并稀释制成每,1ml,中各约含,1mg,、,10g,与,10g,的混合溶液，取,20l,，注入液相色谱仪，杂质,峰、杂质,峰与硝苯地平峰之间的分离度均应符合要求。取对照溶液,20l,，注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使硝苯地平色谱峰的峰高约为满量程的,50%,；,再精密量取供试品溶液与对照溶液各,20l,，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的,2,倍。供试品溶液的色谱图中如有与杂质,峰、杂质,峰保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，均不得过,0.1%,；其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液中硝苯地平峰面积（,0.2%,）；杂质总量不得过,0.5%,。,第四节 含量测定,一、铈量法,硝苯地平与硫酸铈反应的摩尔比为,1,2,。,终点时:微过量的,Ce,4+,将指示剂中的,Fe,2+,氧化成,Fe,3+,，,使橙红色配合物离子呈淡蓝色或无色，以指示终点的到达。,ChP 硝苯地平的含量测定：,取本品约，精密称定，加无水乙醇50ml，微热使溶解，加高氯酸溶液（取70%高氯酸，加水至100ml）50ml、邻二氮菲指示液3滴，立即用硫酸铈滴定液（）滴定，至近终点时，在水浴中加热至50左右，继续缓缓滴定至橙红色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硫酸铈滴定液（）相当于的C17H18N2O6。,二、紫外,-,可见分光光度法,ChP 尼群地平软胶囊的含量测定：,避光操作，取本品10粒置小烧杯中，用剪刀剪破嚢壳，加无水乙醇少量，振摇使溶解后，将内容物与嚢壳全部转移至具塞锥形瓶中，用无水乙醇反复冲洗剪刀及小烧杯，洗液并入锥形瓶中，将锥形瓶密塞，置40水浴中加热15分钟，并时时振摇，将内容物移入100ml量瓶中，用无水乙醇反复冲洗嚢壳和锥形瓶，洗液并入量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml，置100ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，在353nm的波长处测定吸光度；另取尼群地平对照品适量，精密称定，用无水乙醇溶解并定量稀释制成1ml中约含20g的溶液，同法测定，计算，即得。,取本品（约相当于尼群地平100mg），研细，加丙酮10ml，振摇使溶解，滤过，滤液暗处挥干，残渣经减压干燥，依法测定。,（1）还原反应酰肼基团的反应,白色的结晶性粉末,(3)沉淀反应 吡啶环特性,结论：在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点,共同点是：都具有氮杂原子六元环。,色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；,（2）缩合反应酰肼基团的反应,SRM氨氯地平的LC-MS/MS离子流图,另取2,6-二甲基-4-(2-硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯(杂质)对照品与2,6-二甲基-4-(2-亚硝基苯基)-3,5-吡啶二甲酸二甲酯(杂质)对照品，精密称定，加甲醇溶解并定量稀释制成每1ml中各约含10g的混合溶液，作为对照品贮备液；,中国药典：原料药和注射剂中的游离肼,二氢吡啶类药物遇光极不稳定，易发生光化学歧化作用，引入杂质，因此各国药典标准中均规定在避光条件下进行有关物质检查，大多采用HPLC法。,另取硝苯地平对照品适量，加甲醇制成每1ml 约含1mg的溶液，作为对照品溶液。,取硝苯地平对照品、杂质对照品与杂质对照品各适量，加甲醇溶解并稀释制成每1ml中各约含1mg、10g与10g的混合溶液，取20l，注入液相色谱仪，杂质峰、杂质峰与硝苯地平峰之间的分离度均应符合要求。,空白血浆添加的氨氯地平消旋体,空白血浆添加的氨氯地平消旋体,取本品约，精密称定，加无水乙醇50ml，微热使溶解，加高氯酸溶液（取70%高氯酸，加水至100ml）50ml、邻二氮菲指示液3滴，立即用硫酸铈滴定液（）滴定，至近终点时，在水浴中加热至50左右，继续缓缓滴定至橙红色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。,三、高效液相色谱法,ChP 尼莫地平分散片的含量测定：,色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-水（353827）为流动相；检测波长为235nm。理论板数按尼莫地平峰计算不低于8000，尼莫地平峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。,测定法,避光操作。取本品,20,片，精密称定，研细，精密称取适量,(,约相当于尼莫地平,10mg),，置,50ml,量瓶中，加流动相适量，超声处理,15,分钟使尼莫地平溶解，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，离心,10,分钟,(,每分钟,3000,转,),，精密量取上清液,5ml,，置,50ml,量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取,10l,注入液相色谱仪，记录色谱图；另取尼莫地平对照品，精密称定，用流动相溶解并定量稀释制成每,1ml,中约含,20ug,的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。,第五节 体内二氢吡啶类药物的分析,氨氯地平分子结构中含有一个手性碳原子，故具有一对光学异构体,R,-(+)-,氨氯地平与,S,-(-)-,氨氯地平，仅,S,-(-)-,氨氯地平具有血管扩张作用，其中左旋氨氯地平药效是消旋氨氯地平的,2,倍，因此需进行血浆中氨氯地平对映体的手性分离与立体选择性药动学研究。,人血浆中氨氯地平对映体的固相萃取,LC-MS/MS,法测定：,样品处理：,血浆样品，与用流动相制备的内标溶液,(10 ng/ml),混合后，取上载至,C,18,固相萃取柱,(,萃取柱预先用含,2.5%,氨的甲醇洗涤,2,次，再用,5mmol/L,醋酸铵溶液冲洗平衡,),，分别用,5mmol/L,醋酸铵溶液和水,-,甲醇洗涤，再用含,2.5%,氨的甲醇洗脱，洗脱液在,60,下于旋转蒸发器上蒸发至干，残渣物加,250l,流动相溶解，吸取,100l,注入液相色谱,-,质谱联用系统进行分析。,色谱与质谱条件,色谱柱为,Chiral-AGP,柱，,5m),，流动相为,10 mmol/L,醋酸铵缓冲液,(pH4.5)-,正丙醇,(99:1),，流速,0.9 ml/min,，柱温,30,。,APCI,离子源，温度,350,，辅助气,(N,2,),流速,2 L/min,，气帘气,(N,2,),压力,410kPa,流速,1.2 L/min,，电晕放电电流,2,A,，正离子选择反应监测,(SRM)M+H,+,离子，,N,2,碰撞能量,15eV,，用于定量分析的离子反应分别为,m,/,z,409,238(,氨氯地平,),和,m,/,z,260,116(,S,-(-)-,普萘洛尔,),。,SRM,氨氯地平的,LC-MS/MS,离子流图,A.,空白血浆,B.,空白血浆添加的氨氯地平消旋体,吡啶类药物,共同点是：都具有氮杂原子六元环。,讨论的典型药物：异烟肼、尼可刹米、硝西地平,一、基本结构与主要化学性质,（一）典型药物的结构,（二）主要化学性质,1,、异烟肼的性质,（,1,）性状：,白色的结晶性粉末,水中易溶，乙醇中微溶、乙醚中极微溶,（,2,）吡啶环的特性：,吡啶环上的氮原子具有碱性,可以和某些重金属离子形成沉淀,（,3,）还原性：,位酰肼基取代,有较强的还原性，和氧化试剂（氨制硝酸银）反应,2,、尼可刹米的性质,（,1,）性状：,尼可刹米为中枢兴奋药,白色或淡黄色的油状液体,能和水、乙醇、乙醚、氯仿等任意混溶,（,2,）具有弱碱性,易水解，遇碱水解后，释放出具有碱性的二乙胺，能使湿润的红色石蕊试纸变蓝色，故可以此进行鉴别,位上酰胺基,二、鉴别试验,1、异烟肼的鉴别试验,（1）还原反应酰肼基团的反应,中国药典(年版)的鉴别方法为:取本品约l0mg，置试管中，加水2m1溶解后，加氨制硝酸银试液lml，即产生气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。,（,2,）缩合反应,酰肼基团的反应,异烟肼与香草醛的缩合反应为：,测定缩合产物腙的熔点,含羰基的试剂,鉴别方法：采用异烟肼与香草醛缩合反应鉴别异烟肼。异烟肼与香草醛反应，生成异烟肼衍生物（异烟腙），再测定其熔点，以供鉴别。,异烟腙黄色结晶物的熔点为,228,231,，熔融同时分解。,注意：鉴别时测定的熔点是异烟腙的熔点，而非异烟肼的熔点。异烟肼的熔点为,170,173,。,此外：异烟肼还可以和对二甲氨基苯甲醛、水杨醛等芳醛缩合，也可以与,1,，,2-,奈醌,-4-,磺酸在碱性条件下缩合呈红色。,(3),沉淀反应,吡啶环的特性,吡啶环具有碱性，可以和重金属盐类以及苦味酸形成沉淀。,例：异烟肼与氯化汞可生成白色沉淀，反应如下,:,异烟肼与硫酸铜,枸椽酸试液反应，,异烟肼铜盐的绿色沉淀,肼基将,Cu,2+,还原为红棕色氧化,亚铜沉淀,2,、尼可刹米的鉴别试验,（,1,）戊烯二醛反应,吡啶环的开环反应,尼可刹米的专属鉴别试验,鉴别方法为,:,取本品,1,滴，加水,50ml,，摇匀，分取,2ml,加溴化氰试液,2m1,与,2.5%,苯胺溶液,3m1,，摇匀，溶液渐显黄色。,注意：,异烟肼也可发生戊烯二醛反应，但需先用高锰酸钾或溴水氧化为异烟酸，再与溴化氰作用。,戊烯二醛衍生物的颜色随所用芳香第一胺的不同而有所不同：,如与苯胺缩合形成黄至黄棕色产物,如与联苯胺缩合则形成淡红至红色产物,(2),分解产物的反应（）,(3),沉淀反应,吡啶环特性,和重金属离子反应,三、有关物质的检查,（一）异烟肼中游离肼的检查,1,、薄层色谱法,杂质来源：原料引入、降解产生,中国药典：原料药和注射剂中的游离肼,检查方法,：,ChP,薄层色谱法（,TLC,）、杂质对照品法,方法为,:,供试品的配制：,50mg/lml,对照品的配制：,取硫酸肼加水制成,50g,游离肼,/lml,点样：吸取供试品溶液,l0l,与对照溶液,2l,结论：在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点,异烟肼斑点呈棕橙色，,R,f,值约为,游离肼斑点呈鲜黄色，,R,f,值约为，肼的检测限为，控制限量为,0.02%,2,、比浊法,JP(14),采用样品中加水杨酸的乙醇溶液观察浑浊的方法专属性差,3,、差示分光光度法,肼对,-,二甲氨基苯甲醛黄色缩合物（对,-,二甲氨基苯甲醛连氮）,465nm,波长有最大吸收,异烟肼对,-,二甲氨基苯甲醛缩合物（对,-,二甲氨基苄叉）,465nm,波长无吸收,加入,3%,丙酮，可使得黄色缩合物（对,-,二甲氨基苯甲醛连氮）变为无色的二甲基甲酮连氮，继而作为参比，用于测定,A,465nm,，并以对照品比较法计算游离肼的含量。专属、准确、灵敏，最低检测限可达,（二）尼可刹米中有关物质的检查,杂质的结构不明,用,TLC,中的高低浓度对照法,感谢观看,