紫外分光光度法测定蛋白质含量.ppt

紫外分光光度法测定蛋白质含量,实验目的,学习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。,掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验技术。,掌握,TU-1901,紫外-可见分光光度计的使用方法并了解此仪器的主要构造。,本实验采用紫外分光光度法测定蛋白质含量。蛋白质中酪氨酸和色氨酸残基的苯环含有共轭双键，因此，蛋白质具有吸收紫外光的性质，其最大吸收峰位于280,nm,附近（不同的蛋白质吸收波长略有差别）。在最大吸收波长处，吸光度与蛋白质溶液的浓度的关系服从朗伯,-,比耳定律。,280nm,275nm,实验原理,实验预习,预习紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理。,预习紫外分光光度法测定蛋白质含量的实验步骤。,了解,TU-1901,紫外,-,可见分光光度计的主要构造。,TU-1901,紫外,-,可见分光光度计，比色管，吸量管,标准蛋白质溶液：5.00,mg.mL,-1,溶液,0,.9,%,NaCl,溶液，待测蛋白质溶液,仪器与试剂,1.启动计算机，打开主机电源开关，启动工作站并初始化仪器。,2.在工作界面上选择测量项目（光谱扫描，光度测量），本实验选择光度测量，设置测量条件（测量波长等）。,3.将空白放入测量池中，点击,START,扫描空白，点击,ZERO,校零。,4.标准曲线的制作。,基本操作,实验步骤,1.,标准曲线的制作,：,用吸量管分别吸取1.0、1.5、2.0、2.5、3.0,mL,5.00 mg.,mL,-1,标准蛋白质溶液于5只10,mL,比色管中，用0.9%,NaCl,溶液稀释至刻度，摇匀。用1,cm,石英比色皿，以0.9%,NaCl,溶液为参比，在280,nm,处分别测定各标准溶液的吸光度,A,280,，,记录所得读数。,2.,样品测定,：,取待测蛋白质溶液3,mL,，,按上述方法测定280,nm,处的吸光度。平行测定三份。,1.以蛋白质浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。,2.根据样品溶液的吸光度，从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。,数据处理,注意事项和问题,1.紫外吸收法与,Folin,-,酚比色法测定蛋白质含量相比，有何缺点及优点？,2.若样品中含有核酸类杂质，应如何校正？,