尿液自动化分析(5).ppt

单击此处编辑标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,第七节,尿液分析,仪检验,检验医学教研室,自动尿液分析系统,尿液干化学分析仪 尿沉渣分析仪,计算机联控,分析报告,2,尿液检验流程,3,尿液自动化分析,4,第一节,尿液干化学分析仪,目前临床广泛使用尿干化学分析系统，将检测尿液各种成分的试剂附着在纸（或胶片）上做成试纸（或干片），采用反射光原理检测试剂颜色变化。具有操作简便、效率高，100,-360,份样本/,h,作为尿液的过筛检查。,5,尿液干化学分析的发展,1956,年：,美国人,Ames,和,Lilly,发明了尿糖干化学试带,1957,年：,利用,“,蛋白质误差,”,的原理推出尿蛋白检测试带，,1958,年：,推出尿糖、尿蛋白二联试带,1959,年：,推出尿糖、尿蛋白、尿,pH,三联试带,20,世纪,70,年代,：第一台干化学分析仪问世,现代尿液分析自动化的标志,试带逐步发展到多项,，八联、十联、十一联、十二联,从目测发展到自动化仪器检测,，由半自动化到全自动化,国产试剂代替进口试剂。,6,一、尿干化学分析仪分类,按自动化程度分,1.,半自动尿液分析仪：,2.,全自动尿液分析仪：,按检测项目分,8,项,：,pH,、,PRO,、,GLU,、,KET,、,BIL,、,URO,、,BLD,、,NIT,10,项,：,8,项,+LEU,、,SG,11,项,：,10,项,+,VitC,12,项,：,10,项,+,颜色、透明度,7,各种尿干化学分析仪,8,尿干化学试带种类,单项试纸：,PRO、GLU、BLD、BIL,等,多联试纸：,3,A、8A、10A、,11A,、,12A,等。,9,二、尿干化学分析仪与试带的基本结构,（一）,尿干化学分析仪基本结构,1.,机械系统：,将试带传送到检测区，检测后再将试带送,到废物盒。,半自动尿仪,:,支架式、传送带式,全自动尿仪,：浸入式加样、点式加样,2.,光学系统,：,光源、单色光处理、光电转换（,CCD,技术）,3.,电路及计算机系统：,光电转换系统、,I/V,转换系统、,CPU,、显示器、面板。,10,二、干化学尿液分析仪的原理和特点,种类较多，目前国产尿仪质量也很稳定。,【,原理,】,光学系统采用,球面积分仪,、,双波长反射式光度计,，整个光学系统在试纸条表面上移动，逐次测量试纸面上反射光与参比光的比例。三个光电管和特定波长滤光片，分别进行测量。,参比光,为,深红色滤光片,（720,nm）,；测量光电管中加有,绿色滤光片,（550,nm）,对,NIT、KET、BIL、URO,进行测量；另一个加,红色滤光片,（620,nm），,对,PH、GLU、PRO、BLD,进行测量。经电荷耦合（,CCD,）技术进行,光电转换，,再经,数字模拟转换，,用微电脑进行处理后输出（显示屏、打印机、外接电脑等）。,11,尿液自动分析仪结构图,CPU,12,(,二,),试带的结构,塑料基质载体,吸水层,试剂层,2,（碘酸盐层）,尼龙保护膜,透明膜,试剂层,1,试带的多层膜结构,13,尿试带的多层膜结构,（,1,）过滤层,：,尼龙膜，起保护作用，,防止大分子物质对反应的影响,（,2,）反应层：,绒制品，包括,过碘酸盐区,（有的无此区）和,试,剂区,，过碘酸盐区可破坏,VitC,的干扰；试剂区含有,试剂成分主要与所测物质发生反应，产生颜色反应,（,3,）吸水区：,可使尿液均匀快速深入，并能抑制尿液流到相,邻反应区。,（,4,）支持层：,不被尿液浸润的塑料片做支持层。,空白块,：,用于消除尿自身颜色在试剂块上产生颜色的干扰。,14,三、尿干化学分析仪原理与试带反应原理,（一）检测原理,试带上,试剂,块分别与尿中,相应的成分,发生化学反应并呈现不同的颜色，颜色深浅与尿液中相应成分含量成正比。空白快作为,“,补偿区,”,。,试带上的模块被双波长（参考波长,720nm,、测定波长,620nm/550nm,）光照射，,色块颜色越深，吸收光亮越大，反射光亮越小，反射反射率越小,色块颜色越浅，吸收光亮越小，反射光亮越大，反射反射率越大,检测试块反射率、空白反射率、总反射率计算,R,试剂,=T,m,/T,s,R,空白,=C,m,/C,s,R,总,=,T,m,C,s,/(T,s,C,m,）,R:,反射率；,T:,试块,;C:,空白块；,m:,测量波长反射强度；,s:,参考波长反射强度,15,（二）尿试纸法的项目和反应原理,项 目 代号 反应原理 试剂主要成分,酸碱度,pH,pH,指示剂 甲基红、溴麝香草酚蓝,蛋白质,PRO,指示剂的蛋白质误差法 溴酚蓝、枸橼酸钠、表面活性剂,葡萄糖,GLU,葡萄糖氧化酶 葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、色原受体,隐血,BLD,Hb,类过氧化酶法,过氧化氢茴香素或过氧化氢枯烯、色原受体,胆红素,BIL,偶氮反应法,2,4-,二氯苯胺重氮盐,尿胆原,URO,醛反应法,对二甲氨基苯甲醛或对甲氧基苯重四氟化硼,酮体,KET,亚硝基铁氰化钠法 亚硝基铁氰化钠,亚硝酸盐,NIT,亚硝酸盐还原法 氨基苯砷酸、,1,2,3,4-,四氢并喹啉,-3,酚,白细胞,LEU,酯酶法 吲哚酚酯、重氮盐,比密,SG,多聚电解质离子解离法,甲氧乙烯顺丁烯二酸、溴麝香草酚蓝,抗坏血酸,VitC,吲哚酚法,2,6-,二氯酚靛酚钠,16,(二)试带使用注意事项,1.,严格按操作说明书要求进行操作；,2.,试带要在有效期内使用；,3.,试带从冷藏变成室温前不要打开瓶盖，用后盖紧瓶盖；开过盖的试带瓶不建议放在冷藏温度，可放阴凉、干燥、避光处。,4.,禁止用手触摸试剂区，,5.,不同厂家的同类试纸，其原理、方法、结果 不相同，不可混用。,17,尿干化学方法学评价,优点：,具有操作简便、检测快速、同时获得多项结果,缺点：,影响因素多，必须结合尿理学检查、显微镜检查，,互相验证、综合分析,目前国内采用方法：,干化学法,LEU,、,BLD,、,PRO,、,NIT,四项皆（,-,），可不镜检。,其中任一项出现异常时，则必须镜检。,注意事项：,以尿沉渣作为诊断依据或观察疗效时，不宜用干化学过筛,尿外观与尿沉渣有关，当尿外观异常时，应注意镜检,干化学干扰因素多，且有一定的假（,-,），因此无论干化学结果如何，必要时需做镜检,有泌尿系统疾病，不宜用干化学过筛，应全部进行镜检。,18,(三)试纸分析的假阳性和假阴性,1.,尿中含高浓度,VC,可使试纸法葡萄糖和隐血结果呈,假(一);,2.尿蛋白试纸是利用,PH,指示剂的蛋白质误差原理,白蛋,白的反应性最强,球蛋白的反应性弱,一些高分子化学,物(如聚乙烯吡咯酮)可产生假,(+),;,3.,某些药物（如氯丙嗪、酚噻嗪、吩嗪类药物）可使尿,BIL、URO,等呈假,（+）,；,4.,尿,PH,超过8.0以上，,PRO,呈假,(+),；,19,尿试纸法产生假（,+,）、假（,-,）的常见原因,项目,假（,+,）,假（,-,）,pH,尿液久置，使结果升高,浸入尿中时间过长，使结果偏低,SG,高蛋白质、酸性尿使结果偏高,碱性尿使结果偏低,PRO,尿,pH,8.0,、氯乙烯、磷酸盐、季胺类消毒剂,大量青霉素尿、庆大霉素尿、,pH,8.0,GLU,强氧化剂次氯酸钠、过氧化物,VitC,500mg/L,KET,肌酐、酞、苯丙酸,试剂带潮解、标本防止时间过长,BIL,大量氯丙嗪、盐酸苯偶氮吡啶,VitC,500mg/L,、亚硝酸盐、光照,URO,胆色素原、吲哚、吩噻嗪类、,Vit,K,亚硝酸盐、光照,BLD,Mb,、菌尿、氧化剂、不耐热的触酶,PRO,、,GLU,、,VitC,100mg/L,NIT,陈旧尿、亚硝酸盐及偶氮剂污染、含硝酸盐丰富的食物,VitC,、尿量过多、食物含硝酸盐过低、尿于膀胱中储存,4h,，不含硝酸盐还原酶的细菌感染,LEU,甲醛、氧化剂、高浓度,BIL,PRO,、,GLU,、,VitC,、大量庆大霉素、呋喃妥因,VitC,硫代硫酸钠、内源性酚,碱性尿,20,三、,干化学分析仪的局限性,1.,试剂条的因素,2.,尿本身的因素：如标本采集不不合格等,3.,操作原因：如仪器的校准、维护、环境温度。,4.,皆为定性分析，只能做过筛试验。其次是不,能检测尿有形成分，因而不能代替尿沉渣检,查。,21,第二节,尿沉渣分析仪,尿沉渣分析仪是用显微镜或专用设备对尿液有形成分检查的仪器，摆脱了繁琐和费时的操作程序，做到尿沉渣分析的标准化、自动化。目前使用的尿沉渣分析仪，主要有：,图像识别法、流式细胞仪法，,以及,尿液分析工作站,等几种类型。,22,运用,流式细胞术,及,特殊荧光染色,的原理，将尿标本染色后进入鞘液流动池时，每个有形成分单个纵列通过流动池中心轴线，每个粒子均被氩激光光束照射，并各自发出不同的荧光强度,(,信号,),。信号表达为,3,类：即,前向散射光,、,荧光,和,电阻抗,。,（一）流式细胞式尿沉渣分析仪,23,流式细胞式尿沉渣分析仪原理,激光束,(,=488m),荧光强度,fl,：,前向散射光强度：,细胞大小,RND,、,DNA,强度,前向散射光脉冲宽度：,细胞长度,荧光脉冲宽度,(F1w,),：,细胞染色质长度,电阻抗：,反映细胞体积,24,流式细胞式尿沉渣分析仪原理,前向散射光强度,(,Fsc,),：,细胞大小,前向散射光脉冲宽度,(,Fscw,),：,细胞长度,荧光信号,荧光强度,(Fl),：,细胞染色质,(DNA/RNA),的强度,荧光脉冲宽度,(,Flw,),：,细胞染色质长度,电阻抗,：,反映细胞体积,前向散射光信号,25,仪器将这种荧光，散射光和电阻抗的信号转变为电信号，综合分析这些电信号，得出细胞大小、长度、染色强度和染色部分长度以及细胞的体积资料，并给出每类细胞的,散射图,和,直方图,，并计算出每微升尿中各种细胞的数量进行报告。,26,SYSMEX UF-100,尿沉渣分析仪,27,UF-100,尿沉渣分析系统原理,28,UF-100,尿沉渣分析系统散点图,29,UF-100,尿沉渣分析系统散点图,30,流式细胞术尿沉渣分析仪检测,需采集尿液标本约,9ml,最少需尿标本,4ml,，,实际吸样量,0.8ml,，,检测尿标本量,9,l,相当于显微镜检测尿沉渣,50,个高倍视野，,每小时检测,100,个样本，,检测总粒子数,0-40000,个。,31,流式细胞术尿沉渣分析仪,检测参数,红细胞,(RBC),均一性红细胞（,Isomorphic RBC,）,%,非均一性红细胞（,Dysmorphic,RBC,）,%,非溶血性红细胞数量（,Non-,Lysed,RBC,#,）,非溶血性红细胞百分比（,Non-,Lysed,RBC%,）,白细胞（,WBC,）,上皮细胞（,EC,）、小圆上皮（,SRC,）,管型（,CAST,）,病理管型（,Path.CAST,）,细菌（,BACT,）,酵母细胞（,YLC,）,精子细胞（,SPERM,）,结晶（,X,TAL,）,尿液电导率（,conductivity,）,32,尿沉渣分析仪,检测参数,参考范围,RBC,：,男性,010/,L,；,女性,024/,L,WBC,：,男性,010/,L,；,女性,026/,L,EC,：,015/,L,CAST,：,02/,L,BACT,：,08 000/,L,Conductivity,：,1325 ms/cm,33,UF-100,尿沉渣分析仪检测窗口,34,治疗前后散点图对比,35,病 例,张某，男，39岁，急性肾小球肾炎。图示该患者尿液标本,UF-100,分析仪测试结果。,尿干化学分析结果：,SG：1.025 KET：,neg,NIT：,neg,LEU：25/l BIL：,neg,GLU：norm PRO：5.0g/L pH：7.0 UBG：norm ERY：250/,l,镜检结果：,WBC：5-10/HP RBC：,满视野/,HP EC：0-2/HP,尿蛋白定量：2.20,g/24h,尿沉渣分析仪结果：,红细胞位于散射图的左下方,非均一,性红细胞占99.7%;经相差显微镜检查证实为多形性红细胞,36,急性肾小球肾炎,37,方法学评价,1.,优点：,不需离心尿液，可自动进样；,所需标本量少；,检测速度快，效率高，可报告多项参数；,检测过程计数的粒子数,0,40000,，提高了准确性；,操作程序同一，易于标准化和质量控制。,2.,局限性,:,对尿液中的某些成分不能准确辨认，仍需显微镜进行,分类和确认。,应用时间短，普及面窄，临床实际应用经验欠缺；,尚未建立公认的参考范围；,38,仪器采用流式细胞术、高速频闪光源和电视摄相的光学系统，计算机对图像进行分析等技术。,【,工作原理,】,是将混匀的尿液注入仪器的标本口，自动加染色液，尿液经染色后导入鞘流液内，在平板式流动池中作层流动，使管道中间的定量液体通过显微镜下的专用尿分析定量板，当尿液中的有形成分通过显微镜视野时，以每秒,60,次的高频闪光作光源，经电视摄像得到连续的静止图像。用计算机对形态资料进行对比、识别和分类，计算出各自的浓度。,（二）图像识别尿沉渣分析仪,39,图像识别尿沉渣分析仪,40,AVE-763,尿沉渣智能分析仪,41,自动进样系统,42,尿沉渣定量计数池,43,操作界面,44,图像识别尿沉渣分析仪,方法学评价,国内进入较晚，尚未普及，应用经验少，试剂应用效果尚待进一步探讨。,使用光学流动计数池，体积准确恒定，视野清晰，由于是密闭的管道，标本不污染工作环境，安全性好。,由于尿液有形成分复杂，且易发生变形，有时图像识别软件难以识别。,不能识别的成分如何处理，是否删除处理。,如细胞管型、细胞重叠、模糊的图像和碎片等,其误差如何评估，如何去除干扰,如何合理的组合尿干化学与影像学的结果,45,尿干化学分析仪,+UF-100,尿沉渣分析仪,+,显微镜检查,尿干化学分析仪,+,图像识别尿沉渣分析仪,（三）尿液自动化分析工作站,46,尿液自动化分析,尿干化学分析仪,+UF-100,尿沉渣分析仪,+,显微镜检查,47,尿液自动化分析,48,尿干化学分析仪,+,图像识别尿沉渣分析仪,49,尿液分析报告单,50,思考题,1,、尿液沉渣检查应注意哪些事项？,2,、尿沉渣检查的方法有哪几种？,3,、尿沉渣镜检可见哪些有形成分？并分别简述其临床意义。,4,、简述尿管型形成的必要条件。,5,、简述尿沉渣检验的操作步骤。,51,