免疫血液学2、第五章血液成分制备.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,输血前免疫血液学检查及血液成分制备,输血前检查的目的和要求,选择与患者血型配合的各种血液成分，使之能在患者体内有效地存活，无不良反应。,即输入的红细胞在患者体内必须不溶血，,输入的血浆成份不导致患者红细胞破坏，,也就是供者与患者之间的血液在免疫血液学方面“相溶”从而达到安全、有效输血的目的。,二、输血前检查的内容,包括以下几个方面：,1,、患者的病史和标本等的检查、核对及处理。,2,、受血者、献血者,ABO,和,Rh,血型鉴定。,3,、不规则抗体的筛选和鉴定。,4,、交叉配血试验,5,、标签和发血。,（一）标本的要求,1,、标本必须经鉴定和标记，确实来自患者和献血者。,2,、符合患者体内状态，能代表患者当前的免疫学情况，,3,、防止血样的稀释和溶血的产生。（输液患者对侧抽血）,4,、最好用血清（血浆有纤维蛋白原的干扰）配血,5,、输血后所有标本（患者及供者）保存,2-8,一周。,（二）,ABO,血型鉴定,用抗,A,和抗,B,试剂检测红细胞抗原，称之正定型，,用,A,型和,B,型、,O,型红细胞检测血清中抗体称之反定型,人,ABO,血型由红细胞抗原和血清抗体所决定，其正、反定型相符。,见表,ABO,血型常规定型,正定型（检查红细胞抗原）反定型（检查血清中抗体）,血型,红细胞标本,+,抗体试剂 血清标本,+,标准红细胞试剂,抗,A,抗,B A,细胞,B,细胞,O,细胞,A,型,+-+-,B,型,-+-,O,型,-+-,AB,型,+-,2,、,ABO,血型正反定型不符及其原因,可能因为操作技术，管理上问题,也可能是红细胞和血清标本问题,（,1,）技术操作、管理错误,假阴性结果：试管中未加入抗体试剂或血清,未能认识溶血也是阳性反应,血清或试剂与红细胞比例太小,离心速度时间不够,使用了失效的抗体和红 细胞试剂,没能正确地记录和解释试验结果。,假阳性结果：离心速度过大和离心时间过长,使用了受到细菌污染的试剂,使用了不干净的试管、器皿,错误记录、解释试验结果,（,2,）红细胞标本相关问题,某些,ABO,亚型、白血病或其它恶性疾病病人红细胞,ABO,抗原太弱（或缺乏），抗,A,抗,B,试剂未能出现预期的凝集反应。,红细胞获得性或遗传性的异常，如获得性,B,抗原红细胞或,T n/T,多凝集红细胞，试剂可与这些异常的红细胞反应,悬浮红细胞的血清或血浆中含的型物质浓度高，中和了抗体试剂，出现假阴性，如卵巢囊肿病例。,病人红细胞自凝，病人血清中高活性，高浓度自身凝集严重致敏（包被）自身红细胞，以至在稀释液存在下，自发地发生凝集，而不是抗体试剂的特异性作用。,近期输血：输入过与自身血型不一致的血液，使标本成为“混合外观凝集”,（,3,）血清标本的问题,异常的血浆蛋白：受检查血浆中异常的白蛋白，球蛋白比例（某些肝病、传染病如结核、多发性骨髓瘤等疾病患者球蛋白增加）,高浓度的纤维蛋白原（心梗、感染、外伤、肿瘤患者）均易使红细胞发生缗钱状凝集现象。,免疫抑制疾病或免疫抑制治疗的病人血清中,ABO,抗体减少或消失。,年龄：老年人随年龄增高，,ABO,抗体减弱，婴儿血清抗体是阴性或很弱（,0-6,月不做反定型）,不规则抗体的存在：反复多次输血者妊娠者血清中有,ABO,血型以外的同种异型抗体，如盐水抗,M,、高效价冷凝集素抗,I,。,（三）,Rh,（,D,）定型和定型中应注意的问题,假阳性结果：受检细胞已被免疫球蛋白致敏，,受检细胞与血清孵育的时间过长,多凝集细胞造成定型的假阳性,器材或抗血清被污染，造成的假阳性,假阴性结果：受检细胞浓度太高，与抗血清比例失调,漏加或错加定型血清,定型血清使用方法错误,抗血清保存不当，导致失效,关于弱,D,（传统称,D,u,型）,弱,D,型（,D,u,型）是,D,的弱抗原，这种抗原与大部分盐水抗,D,试剂不产生直接凝集反应，而与部分的,IgG,抗,D,血清用间接抗球蛋白试验反应阳性,弱,D,（,D,u,型）鉴定：三种不同批号的,IgG,抗,D,定型,如果全部阴性方可认定患者为,RhD,阴性，否则为弱,D,弱,D,临床意义：作为供血者,D,u,RhD,阳性,作为受血者,D,u,RhD,阴性,（四）不规则抗体筛选和鉴定,1,对受血者的血清做抗体筛选，以发现有临床意义的不规则抗体，不规则抗体是指抗,A,抗,B,以外的血型抗体,抗体筛选的原则让受检血清与已知的试剂红细胞起反应，以发现在,37,中有反应的抗体,方法：盐水法、凝胶法、聚凝胺法、抗球蛋白试验等,抗体筛选阳性的，则须做鉴定试验，以确定其特异性,（五）交叉配血试验,1,、要求及内容,主侧：受血者血清,+,供者红细胞,检测对供者红细胞起反应的抗体。,次侧：供者血清,+,受者红细胞,检测对受者红细胞起反应的抗体。,自身对照：,Rs+Rc,显示自身抗体、直抗阳性。,2,、方法,盐水交叉配血试验：检出,IgM,类抗体。,检测不完全抗体的交叉配血试验,蛋白酶（木瓜酶、波萝酶）,传统抗人球蛋白试验,新方法：,促凝剂（凝聚胺）,微柱凝胶试验,3,、配血中异常原因与处理,缗线状假凝集,特点：显微镜下红细胞膜完整，细胞界限清晰地成线串聚集,37,、室温结果一样，不受温度影响，但加盐水即可散开。,解决方法：被检细胞用盐水洗涤后再配血。,自身抗体造成配血不合，共同特点是患者血清能凝集自身红细胞,天然自身冷凝激素,获得性病理性自身冷抗体：直抗阳性,/,室温较,37,强,/Rs+OcRs+Rc,自免溶贫血清中的温型自身抗体，直抗阳性,/37,室温,血清中的不规则凝集素,三、常规和紧急情况下的发血程序,血液的申请：医生填写输血申请单,护士抽取血样，送至血库,检验师进行血型鉴定、抗体筛选,选择血液，交叉配血,填写输血记录单,发血给护士,第七节 新生儿溶血病,一、新生儿溶血病的发病机制,二、新生儿溶血病的临床症状,三、新生儿溶血病的血清学检查,四、新生儿溶血病治疗与预防,五、新生儿换血和输血,什么是新生儿溶血病？,新生儿溶血病（,hemolytic disease of the newborn,）简称,HDN,。指母婴血型不合，孕母体内存在着与胎儿红细胞不配合的,IgG,性质的血型抗体，该抗体通过胎盘进入胎儿体内，作用于胎儿红细胞使之产生不同程度溶血。,二、临床症状,被,IgG,抗体体致敏的胎儿红细胞在分娩前后加速破坏，这在临床上有多种表现，严重可致胎儿宫内死亡，轻者只在血清学中有所表现，婴儿却很健康，,HDN,的病理变化主要同红细胞溶解所引起的，大量红细胞破坏使红细胞数目减少，引起贫血，组织和脏器因供氧减少而发生缺氧、并可影响其功能主要表现为水肿、黄疸、贫血、肝脾肿大、核黄疸。,水肿,全身性、伴低蛋白血症；胸水、腹水、心 包积液。,黄疸,进行性黄疸增高,胆红素,51.3mol/L,（,3mg%,）脐带胶质黄疸,68.4-102.6mmol/L,（,4-6 mg%,）面部淡黄,256.5-307.8,（,15-18 mg%,）面部,+,躯干橙黄，手心足底、呈淡黄,342,（,20 mg%,）手足橙黄色,贫血,组织缺氧：心律快、组织增高、嗜睡、少 吃、少哭、心衰。,肝脾肿大,骨髓外造血组织来代偿引起,核黄疸,未结合胆红素是对中枢神经系统有毒害的物质，婴儿大脑发育未成熟，血脑屏障不健全，过多的未结合胆红素可影响脑组织,脑神经基底核，使脑神经细胞发生变性,表现为发热、嗜睡、吸吮反射弱、痉挛、肌张力 病死率高，存活后有智力不全，运动障碍。,三、血清学检查,1,、测母子（父）,ABO,血型，确定,ABO,相合,/,不相合,2,、患儿标本检查：,（,1,）直接抗球蛋白试验：,ABO,溶血病患儿红细胞上抗体结合得很少，常得到阴性结果,（,2,）释放试验：阳性，红细胞上有,IgG,抗体,（,3,）游离抗体：阳性，就证明新生儿病情会继续加重,新生儿血清中游离抗体检查,与指示红细胞反应 结果判定,Ac Bc Oc,有游离的抗,A,抗体,有游离的抗,B,抗体,有游离的抗,A,、抗,B,或抗,A,，,B,抗体 有游离的,ABO,系统以外抗体,无游离的抗体,患儿红细胞抗体释放试验,与指示红细胞反应 结果判定,Ac Bc Oc,释放出,IgG,抗,A,抗体,释放出,IgG,抗,B,抗体,释放出,IgG,抗,A,、抗,B,或抗,A,，,B,抗体,未释放出抗体,释放出,ABO,血型系统以外的抗体,新生儿,ABO,HDN,血清学试验,直接抗球 游离抗体 抗体释放 结果 意义,蛋白试验 试验 试验 判定,确诊,ABO,HDN,确诊,ABO,HDN,确诊,ABO,HDN,可疑 可疑,ABO,HDN,可疑 可疑,ABO,HDN,否定,血清学试验未能证实,HDN,四、治疗,（一）药物治疗：葡萄糖、白蛋白,（二）光照（蓝光照射）：胆红素能吸收光，以波长,450-460m,作用最强，未结合胆红素（,Z,）转化为异物体（,E,）后者不能进入脑组织，为无毒水溶性，双吡咯，易从尿内排出，使血清胆红素浓度降低。,（三）换血：换出抗体和致敏红细胞，减轻溶血，纠正贫血，防心衰，换血清胆红素，防核黄疸。,ABO,系,HDN,：,O,型洗涤细胞加,AB,血浆,/,同型浆,Rh,系,HDN,：,ABO,血型同患儿，,Rh,血型同母亲,如子,B,型母,Accdee,血清含有抗,D,选,B,型,D,阴性血。,（一）宫内输血,（二）提早分娩,64,妊娠期内的治疗：,（三）药物治疗 孕妇服,Vc,、,VE,、,VK,注射葡萄糖，吸氧，苯巴比妥为酶的诱导剂，促进肝脏清除胆红素，新生儿输白蛋白，能结合胆红素防核黄疸。,预防：,对未致敏的,Rh,阴性妇女在分娩,Rh,阳性婴儿,72,小时内，肌注,30mg,（,145-435mg,）抗,Rh(D)IgG,，通常可预防,Rh,阴性妇女发生同种免疫。,第五章 血液成份制备,第一节 血液的生理功能,输送氧气和二氧化碳，在肺脏和人体组织间进行气体交换。,输送养分到组织，从组织带走代谢产物。,输送激素，维生素和各种药物。,维持渗透压、酸碱度以及电解质平衡,保持体温恒定,防御微生物或异物入侵,有效的凝血和纤维蛋白溶解机制,细 红细胞,人体的内呼吸，向机体组织运送,O2,、带走,CO2,、由,Hb,完成,胞 白细胞,粒细胞,中性、嗜酸、嗜碱、免疫系统，吞噬破坏入,侵细胞,成 淋巴细胞,T,细胞参与细胞免疫,B,细胞参与体液免疫,分,40-45%,血小板,粘附，释放凝固、收缩,非（血浆）白蛋白保持渗透压和体液平衡；载体蛋白的作用，传递运输,细,胞 免疫球蛋白,血浆中具有抗体活性的球蛋白的统称，它,包括所有血液中的抗体。,成,分 凝血因子共,14,个、血浆中含除组织因子（,FIII,）外所有因子,55-60%,凝血过程分三个阶段，凝血酶原激活物的形成，,凝血酶原激活形成凝血酶；,纤维蛋白原分解形成纤维蛋白。,分内源性途径、外源性途径和共同途径。,第二节 全血,保养液,ACD,CPD,CPDA-1,组成成分,枸橼酸,-,枸橼酸三钠、葡萄糖,Acid-Cutrate,-,Dextrose,枸橼酸盐、磷酸盐、葡萄糖,Citrate-Phosphate-Dextrose,添加腺嘌呤（,A,）,枸橼酸盐：抗凝,葡萄糖：维持红细胞代谢,枸橼酸：降,PH,到,5.0,解决葡萄糖焦糖化,磷酸盐：调节,PH,到,5.6,以利于维持血液中,2,、,3-DPC,（,2,，,3,二磷酸甘油酸）维持细胞放氧能力。,腺嘌呤（,A,）是,ATP,的一个成分，能增加,ATP,合成,保存期限,*,21,天,21,天,35,天,血液成分的最佳保存条件,红细胞：,42,血小板：,222,水平振荡，如,4,贮存，,24h 50%,以上丧失功能，,48 h,减小显著，,72h,基本无止血作用，,5,天全部遭破坏。,白细胞：室温 ，,24h,微量减弱，,3-5,天显著减弱，,7,天完全消失,凝血因子：,-20,以下冷冻保存,第三节 血液细胞成分的制备,一、制备原理：利用血液细胞比重、体积等因素的不同通过离心分层而得到浓度较高的单一成分。如图所示。,二、制备方法,1,、手工法；,2,、血细胞分离机单采法,三、红细胞制品,浓缩红细胞,：全血中大部分血浆分离后剩余部分即为浓缩红细胞。,比积,0.65-0.80 42,悬浮红细胞,：全血中大部分血浆分离后，向剩余部分加入红细胞添加液制成的成分即为悬浮红细胞。,有,MAP,（甘露醇,-,腺嘌呤,-,磷酸盐）等添加液,比积,0.50-0.65 42,少白细胞的红细胞,：离心或过滤去除白细胞,比积,0.60-0.75 42,洗涤红细胞,：用生理盐水洗去大部分非红细胞成分。,较彻底地去除血浆（,98%,）和白细胞（,80%,）,红细胞回收率,70%42,冰冻解冰去甘油化红细胞,6,日内血，红细胞保护剂为甘油，低温,-80,保存，使用时去甘油化后加生理盐水制成,红细胞回收率,80%42,用于稀有血型和自体血保存,辐射红细胞,：用射线（钴,60,）辐照，灭活红细胞制品中淋巴细胞,预防输血相关性移植物抗主病,四、白细胞制品：单采用血细胞分离机及配 套耗材一次从单一献血者采集的粒细胞为,1,人份，容量,200ml,，含 量,1.010,10,室温静置保存,24,小时,五、血小板制品：单采用血细胞分离机及配套耗材一次从单一献血者采集的血小板为,1,人份，容量,200ml,，含量,2.510,11,20-24,振荡保存，,24,小时（普通袋）,5,天（专用袋）,第四节 血液非细胞成分的制备,新鲜冰冻血浆：全血采集后,6h(ACD,保养液,),、,8h,（,CPD,保养液）分离出血浆制成的成分称为新鲜冰冻血浆，,-20,保存,1,年转为普浆。,含全部凝血因子，白蛋白、免疫球蛋白,普通冰冻血浆：和新鲜冰冻血浆比较，只缺少不稳定凝血因子,V,和,，,-20,保存,5,年,冷沉淀：以,400ml,全血分离的,200ml,新鲜冰冻血浆制备的冷沉淀为,1u,，容量,20-30ml,，含,80ID,纤维蛋白原,150mg,纤维结合蛋白,250-500mg/L -30,保存,1,年,根据轻、中、重度出血所需剂量为,10IU,、,25IU,、,40IU/kg,体重，,用于儿童血友病甲：血管性血友病，纤维蛋白原缺乏症及手术后出血，严重外伤及,DIC,等治疗。,血浆蛋白制品,白蛋白,免疫球蛋白：肌肉注射免疫球蛋白，静脉注射免疫球蛋白,凝血因子,浓缩制剂,凝血酶原复合物,