用荧光分光光度法测定中药配方颗粒对自由基的清除作用.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,用荧光分光光度法测定中药配方颗粒对自由基的清除作用,答辩人：张承,导师：蔡继文教授,选题意义,1.,自由基是一种外层轨道上含有未配对电子的原子、原子团或呈特殊状态的分子。,2.,机体内自由基大量产生或清除过缓,使积累超过临界水平后,就会对机体产生损伤，,各种炎症、癌症、脏器损伤、老化等都与自由基密切相关,。,(,一,),自由基概述及其危害,(,二,),中药以及中药配方颗粒,中药抗氧化剂具有经济和毒、副作用小等明显的优点,在中草药中,有许多药物都对自由基有清除作用,。,中药配方颗粒品质优良，效果客观，使用简便快捷，必将成为,21,世纪中医药配方的主流。因此研究它的药性有着重要的意义。,(,三,),测定自由基清除率的方法,电子自旋共振法、高效液相色谱法、化学发光法、紫外分光光度法、荧光分光光度法等。,本实验采用用仪器简单，操作方便的荧光分光光度法对中药消除自由基的性能进行研究。,1.,实验原理,Fe,2+,EDTA,在弱碱性介质中可还原溶解氧产生,OH,，,其进攻对苯二甲酸产生强荧光羟基化产物,2,羟基对苯二甲酸,(HOTP).OH,清除剂加入后,导致,HOTP,的生成量减少,从而体系荧光强度明显降低。,实验内容,2.,仪器,日本 岛津,RF-5301PC,荧光分光光度计，激发波长,316 nm,，,测定发射光谱。,3.,试剂及反应体系,对苯二甲酸钠溶液,(1.0 10,-4,mol/L);Fe,2+,(,硫酸亚铁溶液,1.0 10,-3,mol/L),；,EDTA(1.0 10,-3,mol/L),；,磷酸钠缓冲溶液,(0.2 mol/L;pH=7.4),山茱萸等中药配方颗粒。,依次加入对苯二甲酸溶液,0.50,mL,EDTA,溶液,0.3,mL,中药颗粒,溶液,0.5,mL,；,Fe,2+,溶液,0.30,mL,缓冲液,2.00,mL,稀释至,10.0,mL,反应,6 min,后测定体系荧光强度。,4.,实验内容及其结果讨论,(1).,不加中药时体系的发射光谱,1,2,3,由此可见,羟基对苯二甲酸是体系的唯一的强荧光物质，自由基或者是对苯二甲酸本身不产生荧光。峰值位置为,426nm,1:,对苯二甲酸,+Fe,2+,+EDTA,2:,与,1,相比,无对苯二甲酸钠,3:,与,1,相比,体系中没有加入,Fe,2+,(2),测定中药自身的发射光谱，激发波长,316nm,为减小误差，选择了在,426nm,处的荧光强度值相对较小的中药,:,半支莲，山茱萸，茶多酚，黄芩，红花，桂枝，地龙，柴胡，猪苓,(3),对各种中药进行抑制自由基的测定,无中药 荧光强度,F,0,中药名,C=,0.03g/L,中药自身荧光强度,F,加入中药后荧光强度,F,清除率（）,F,0,-(F-F,)/F,0,黄芩,63.803,154.984,74.1,红花,109.52,241.016,62.6,桂枝,83.272,211.284,63.6,地龙,88.537,233.338,58.8,柴胡,87.727,231.923,59.0,猪苓,59.979,217.035,55.3,各种中药对自由基的清除率,(4),用不同浓度的半支莲，山茱萸和茶多酚进行研究,无中药,半支莲对自由基的抑制作用,山茱萸对自由基的抑制作用,无,中药,茶多酚对自由基的抑制作用。,无中药,（,5).,山茱萸和半支莲不同比例的混合物对自由基的 抑制作用,荧光强度值没有明显的提高或降低，没有发现有明显的协同或负协同效应。,空白,茶多酚,半支莲,山茱萸,浓度,/g/l,F,清除率,/%,浓度,/g/l,F,清除率,/%,浓度,/g/l,F,清除率,/%,0.10,189.5,73.6,0.10,120.3,46.7,0.10,200.5,77.9,0.08,175.4,68.1,0.08,131.2,51.0,0.06,189.9,73.8,0.06,159.1,61.8,0.06,118.9,46.2,0.04,170.4,66.2,0.04,143.7,55.8,0.04,129.9,50.5,0.02,141.3,54.9,0.02,126.2,49.0,0.01,103.5,40.2,0.01,93.32,36.2,0.008,113.6,44.1,0.008,86.8,33.7,0006,100.0,39.0,0.006,85.9,33.4,0.004,97.4,37.8,0.004,80.4,31.2,0.002,88.4,34.4,0.002,73.5,28.5,不同浓度的中药及其清除率,5.,数据处理,茶多酚,半支莲,山茱萸,斜率 3.07,相关系数0.999,斜率 15.3,相关系数 0.974,斜率 8.94,相关系数,0.978,用,对苯二甲酸羟基化反应体系可以评价中药清除,OH,的作用能力。可以粗略的得到一定浓度下各种中药的清除率。,可以看出在一定的浓度范围内，中药颗粒浓度与其清除率大致成线性比例。,在较高浓度范围山茱萸的清除自由基能力好于半支莲，而在低浓度时相反。,三 实验结论,创新点,当前对中药的提取物的清除自由基研究已经比较多。而对使用的越来越广泛的中药配方颗粒的清除自由基的研究报道较少。本实验采用了市售的中药颗粒配方进行研究。,致谢,感谢导师蔡继文教授给我这样一个独立的科学探索的机会，感谢实验室所有的师兄师姐对我的帮助，特别要感谢梁建洪师兄和周悦芸同学。最后要感谢化学院创新研究基金的大力支持。,