实验一 紫外可见分光光度计的性能检验.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,*,*,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验一 紫外可见分光光度计的性能检验,一、实验目的,1,、掌握紫外可见分光光度计性能的检验方法,2,、学会,UV1100,型紫外可见分光光度计的使用方法,二、实验原理,对分光光度计进行性能检查，以保证测定结果的准确。,三,、仪器与试剂,UV,1100,型紫外可见分光光度仪,石英比色皿（一对）,擦镜纸,蒸馏水,6mg/100ml K,2,Cr,2,O,7,溶液,0.002mol/mol KMnO,4,溶液,四,、实验内容及操作步骤,1,、比色皿的配对性,注入,蒸馏水,两个比色皿,分别,440nm,以一个比色皿,为空白（,T,1,100,）,测定,另一个比色皿的,T,2,T=T,1,-T,2,T0.5%,两个比色皿配对,两个比色不配对，应进行校正,2,、波长精度的检查,以蒸馏水为空白,测定,KMnO,4,溶液的吸收曲线,若测得的最大吸收波长在,5251nm,以内,说明,仪器波长精度符合使用要求,500,800,0.4,0.2,(nm),A,0,3,、重复性的检查,以,0.02mol/L,的,H,2,SO,4,为空白,在,257nm,处,同一,K,2,Cr,2,O,7,溶液的,T,，,连续测定,7,次,测定,求出极差,若极差,0.5%,仪器的重复性符合使用要求,4.吸收,值,准确度,的检查,235nm,、,257nm,分别测定,K,2,Cr,2,O,7,溶液,吸光度,并计算吸收系数,以,0.02mol/L,的,H,2,SO,4,为空白,(T,100%,）,313nm,、,350nm,与下表规定的,吸收系数比较,若相对偏差在,1%以内,说明,仪器符合使用要求,波长,/nm,吸收系数,235,123.0,126.0,257,142.8,146.2,313,47.0,50.3,350,105.5,108.5,五、思考题,1,、同种比色皿透光度的差异对测定有何影响？,2,、检查分光光度计的重复性对测定有什么实际意义？,实验二 吸收曲线的测绘及吸收系数的测定,一、实验目的,1,、掌握测绘吸收曲线的方法,2,、学会测定吸收系数,二、实验原理,1,、若溶剂固定不变，化合物吸收曲线所出现的,max,、,min,或,(S,),为一定值，且数目也一定，为鉴别化合物提供了有力的证据。,2,、百分吸收系数是指当溶液浓度为,1%,，液层厚度为,1cm,时的吸光度。,即,三、仪器与试剂,UV,1100,型紫外可见分光光度计,石英比色皿（一对）,95%,乙醇（,A.R,）,0.005%,丹皮酚对照品溶液,四,、实验内容及操作步骤,丹皮酚对照品,10mg,95,乙醇溶解,定容至,10ml,摇匀,精密吸取,5,ml,置,100ml,量瓶,95,乙醇定容,作为母液备用,母液中丹皮酚的含量为0.005%,1,、吸收曲线的测绘,精密吸取,母液,1,ml,置,10ml,量瓶,95,乙醇定容,以,95,乙醇为空白，进行光谱扫描，得到吸收曲线图。,2,、吸收曲线的测绘,利用上述溶液，在,274nm,波长处测定其吸光度并计算百分吸收系数。,实验三 分光光度法测定槐花中总黄酮的含量,一、实验目的,1,、掌握用标准曲线法测定槐花中总黄酮含量的方法,2,、巩固紫外可见分光光度计的操作方法,二、实验原理,黄酮类化合物分子中的羰基、羟基等结构可与金属盐类试剂如铝盐、铅盐等生成有色配合物，可用于定量分析。,三,、仪器与试剂,UV,1100,型紫外可见分光光度仪,石英比色皿（一对）,5%NaNO,2,溶液,10%Al(NO,3,),3,溶液,NaOH,试液,芦丁对照品,槐花药材,其余试剂均为分析纯,；,四,、实验内容及操作步骤,1,、对照品溶液的制备,加甲醇，水浴使溶解,芦丁对照品,50mg,置,25ml,量瓶中,放冷，加甲醇至刻度，摇匀,精密吸取,10ml,置,100ml,量瓶中,加水至刻度，摇匀,即得（每,1ml,中含无水芦丁,0.2mg,）,2,、标准曲线的制备,精密量取对照品溶液,0,、,1,、,2,、,3,、,4,、,5ml,分别置,25ml,量瓶中,各加,H,2,O,加,5%NaNO,2,1ml,摇匀,放置,6min,10%Al(NO,3,),3,1ml,摇匀,放置,6min,加,加,NaOH,试液,10ml,加水至刻度,摇匀，放置,15min,至,5ml,=500nm,以相应试剂为空白,测定吸光度（,A,）,以,吸光度,为纵坐标，,浓度,为横坐标，绘制标准曲线,吸光度,浓度（,mg/ml,）,3,、供试品溶液的制备,槐花粗粉,1g,精密称定,置,索氏提取器,中,加,乙醚,加热回流至,提取液无色,放冷,弃乙醚液,加,甲醇90ml,加热回流至,提取液无色,移至,100ml,量瓶中,甲醇少量多次洗涤容器,洗液并入量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,精密吸取,10,ml,置,100ml,量瓶中,加水至刻度，摇匀,即得,4,、样品的测定,精密吸取,供试品,溶液,3,ml,置,25ml,量瓶中,照标准曲线制备项下的方法,自“加水至5ml”起,从标准曲线上,求,出供试品溶液中芦丁的重量,，,即得,依法测定吸光度,槐花中含总黄酮以无水芦丁（C,27,H,30,O,16,）计，,不得少于8.0%。,五、注意事项,1,、对照品和样品应同时显色,2,、显色剂加入的顺序、加入量和显色时间要正确,六、思考题,1.,分光光度法有哪些影响因素？,2.,试述标准曲线法的优点。,实验四、薄层板的制备,一、实验目的,掌握薄层板的制板方法。,二、仪器与试剂,天平（,0.1g,）研钵,玻璃板,10 cm20cm,CMC-Na,水溶液（,3,）,蒸馏水,薄层层析用硅胶,GF,254,（青岛海洋化工厂）,三、实验内容及操作步骤,1.,洗板 选取板面平整的玻璃板，洗净后放置在干净、平整的台面上，阴干备用。,2,匀浆 将吸附剂,1,份（,3.0g,）和水,3,份在研钵中向同一方向研磨混合均匀。,3,铺制 将已调制好的吸附剂匀浆倒至玻璃板的一端，用研棒将匀浆引到玻板的各个边缘，轻轻震动，使吸附剂均匀铺开成一薄层。置水平台上阴干。,4,活化,将阴干的薄层板至于,110,烘箱中活化,30,分钟，置于有干燥器中备用。,四、思考题,1,薄层板的铺制过程中应注意哪些问题？,实验五 薄层色谱定性分析 （五味子的定性鉴别）,一、实验目的,1.,掌握薄层色谱的定性分析方法,。,2.,熟悉薄层板的点样方法。,二、实验原理,中药五味子中，五味子甲素为其主要有效成分之一，为了更好的进行定性鉴别，选用五味子甲素对照品和五味子对照药材进行对照，根据相同的组分在相同的条件下，应该有相同的颜色和比移值来作为定性鉴别的依据。,五味子植株,五味子药材,三、仪器与试剂,定量毛细管,已制备好的薄层板（硅胶,GF,254,）,展开缸,所用试剂均为分析纯,五味子粉末,定量毛细管,双槽展开缸,对 照 品,四、实验内容及操作步骤,1.,供试品液的制备：取五味子粉末,1g,，加三氯甲烷,20ml,，加热回流,30,分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷,1ml,使溶解，作为供试品液。,2.,对照药材溶液的制备：取五味子对照药材,1g,，同法制成对照药材溶液。,3.,对照品溶液的制备：取五味子甲素对照品，加三氯甲烷制成每,ml,含,1mg,的对照品溶液。,4.,吸取上述三种溶液各,2l,，点于同一硅胶,GF,254,薄层板上，以石油醚（,30,60,）甲酸乙酯甲酸（,1551,）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（,254nm,）下检视。供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。,五、思考题,1,如何克服薄层展开过程中的边缘效应？引起边缘效应的因素有哪些？,实验六、高效液相色谱仪的使用,一、实验目的,掌握高效液相色谱仪的使用方法,了解高效液相色谱仪的结构,高效液相流程图,1,溶剂,贮,器,2,泵,3,流量与速度检测装置,4,进样阀,5,预柱,(,保护柱,),6,分离柱,(,色谱柱,),7,检测器,8,数据记录及处理系统,9,废液瓶,二、仪器与试剂,L-2000,液相色谱仪（,L-2400,紫外检测器）,C,18,反相键合色谱柱（,250 mm4.6 mm,）,微量进样器（,25l,）,过滤器（,0.45m,）及脱气装置,苯、甲苯、萘,甲醇（色谱纯）,重蒸馏水,三、实验内容与步骤,（一）流动相的预处理,1,过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。,2,对抽滤后的流动相进行超声脱气,10-20,分钟。,（二）安装色谱柱,按色谱柱标示意流液方向安装好色谱柱。,（三）,液相色谱仪的使用方法,1.,启动液相色谱仪,2.,排除管道内空气,3.,泵流速的设定,4.,检测器波长的设定,5.,打开,T2000P,色谱工作站,6.,色谱柱预平衡,7,进样,8.,数据采集完毕后，点击停止进样,9.,点击,“,再处理,”,和,“,报告,”,图标对图谱进行再处理，出报告图,10.,实验完毕后冲洗色谱柱,11.,关闭工作站，关闭输液泵电源，关闭检测器电源、关闭仪器电源,练习液相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和进样量,色谱条件 流动相为甲醇,水（,8020,）；固定相,:C18,反相键合色谱柱；,检测波长为,254nm,；,流速：,1ml/min,。,样品溶液 含苯、甲苯、萘浓度分别为,1g/ml,的甲醇溶液。,进样量：,10l,。,四、思考题,流动相在洗脱前为何要进行脱气？,一、实验目的,1.,掌握利用高效液相色谱法进行定性,及定量分析。,2.,巩固高效液相色谱仪的使用方法。,实验七、高效液相色谱定性及定量分析,中药赤芍中芍药苷的定性鉴别和含量测定,二、实验原理,1.,采用与已知化合物对照,对组分进行定 性分析。,2.,采用外标一点法进行含量测定。,三、仪器与试剂,L-2000,液相色谱仪（,L-2400,紫外检测器）,C,18,反相键合色谱柱（,250 mm4.6 mm,）,微量进样器（,25l,）,芍药苷对照品；赤芍药材,其余试剂均为分析纯,四、实验内容及操作步骤,色谱条件,C,18,反相键合色谱柱；,流动相：甲醇,-0.05mol/L,磷酸二氢钾缓冲溶液（,4065,）；,检测波长为,230nm,。,对照品溶液的制备,精密称取五氧化二磷干燥,36,小时的芍药苷对照品适量，加甲醇配制成每,1ml,含,0.5mg,的溶液，即得。,供试品溶液的制备,取本品粗粉约,0.5g,，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇,25ml,，称定重量，浸泡,4,小时，超声处理,20,分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。,测定,分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各,10l,，注入液相色谱仪，测定，即得。,本品含芍药苷（,C,23,H,28,O,11,）不得少于,1.8%,。,五、思考题,1,外标一点法的主要误差来源是什么？,2,紫外检测器的优缺点是什么？,实验八、气相色谱仪的使用,一、实验目的,1.,掌握气相色谱仪的使用方法,2.,了解气相色谱仪的结构,二、实验原理,气相色谱法是采用气体作流动相（载气）流经色谱柱进行分离分析的方法。主要由气源部分、进样部分、色谱柱、柱温箱、检测器和数据处理系统组成。,三、仪器与试剂,岛津,GC-2014,气相色谱仪（,FID,检测器）,樟脑对照品溶液,试剂均为,A.R,纯,四、实验内容及操作步骤,（一）启动,GC-2014,气相色谱仪,（二）参数的设定,（三）打开,N2000,色谱工作站,（四）运行,GC-2014,气相色谱仪,（五）进样,（六）待数据采集完毕后，点击停止采集；,（七）待样品分析结束后，在离线处理数,据，察看数据报告，打印报告。,（八）关机,附,:,练习气相色谱仪使用的色谱条件、样品溶液和进样量,色谱条件：聚乙二醇（,PEG,）,-20M,毛细管柱（柱长,30m,，内径,0.25mm,，膜厚度,0.25m,）；柱温为,160,。,样品溶液 樟脑对照品溶液。,进样量：,1l,。,五、思考题,使用气相色谱仪时，应该注意那些问题？,实验九、气相色谱法定性及定量分析,樟脑、冰片和薄荷脑混合样品中樟脑的定性鉴别和含量测定,一、实验目的,掌握采用内标法进行定量分析的方法,熟悉利用气相色谱仪进行定性分析,二、实验原理,实际工作中，在已知待测组分的情况下，得到的气相色谱图可以借助对照品加以对照，利用保留值进行定性。,利用气相色谱进行定量分析时，主要采用内标法进行定量，以消除由于进样和仪器稳定等原因造成的误差。,三、仪器与试剂,岛津,GC-2014,气相色谱仪（,FID,）；,10l,微量进样器；,内标物：萘；,樟脑对照品；,混合样品溶液（由樟脑、冰片和薄荷脑组成）；,其余试剂均为,A.R,纯；,四、实验内容及操作步骤,仪器条件,聚乙二醇（,PEG,）,-20M,毛细管柱（柱长,30m,、内径,0.25mm,、膜厚度,0.25,m,），柱温,160,。,校正因子的测定,取萘适量，精密称定，加无水乙醇制成每,1ml,含,4mg,的溶液，作为内标溶液。取樟脑对照品,6mg,置,10ml,量瓶中，精密加入内标溶液,1ml,，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。吸取,1l,，注入气相色谱仪，计算校正因子。,测定法,精密吸取样品溶液,1ml,，置,50ml,量瓶中，精密加入内标溶液,5ml,，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。吸取,1l,，注入气相色谱仪，测定，计算，即得。,五、思考题,1,内标法定量的优点是什么？,2,内标法定量有哪些不足？,