2025年大学大四（生物技术）分子生物学实验技术测试题及答案.doc

2025年大学大四（生物技术）分子生物学实验技术测试题及答案

（考试时间：90分钟 满分100分）
班级______ 姓名______

第I卷（选择题，共40分）
（总共20题，每题2分，每题只有一个正确答案，请将正确答案填在括号内）
1. 以下哪种技术常用于DNA片段的分离和纯化？（ ）
A. 聚合酶链式反应
B. 凝胶电泳
C. 蛋白质印迹法
D. 免疫沉淀
2. 在分子克隆中，常用的载体不包括以下哪种？（ ）
A. 质粒
B. 噬菌体
C. 人工染色体
D. 核糖体
3. 关于限制性内切酶，下列说法错误的是（ ）
A. 能识别特定的DNA序列
B. 切割DNA产生粘性末端或平末端
C. 可用于构建重组DNA分子
D. 只作用于单链DNA
4. 进行DNA测序时，常用的方法是（ ）
A. 桑格测序法
B. 化学降解法
C. 焦磷酸测序法
D. 以上都是
5. 以下哪种技术可用于检测基因表达水平？（ ）
A. Northern印迹
B. Western印迹
C. 原位杂交
D. 免疫组化
6. 构建cDNA文库时，需要用到的酶是（ ）
A. 逆转录酶
B. DNA聚合酶
C. RNA聚合酶
D. 限制性内切酶
7. 用于蛋白质表达和纯化的系统是（ ）
A. 大肠杆菌表达系统
B. 酵母表达系统
C. 昆虫细胞表达系统
D. 以上都是
8. 基因编辑技术CRISPR/Cas9的作用靶点是（ ）
A. DNA
B. RNA
C. 蛋白质
D. 多糖
9. 检测蛋白质与DNA相互作用的技术是（ ）
A. 凝胶迁移实验
B. 染色质免疫沉淀
C. 酵母双杂交
D. 以上都是
10. 以下哪种方法可用于鉴定重组质粒？（ ）
A. 酶切分析
B. 测序
C. 菌落PCR
D. 以上都是
11. 分子生物学实验中，常用的缓冲液是（ ）
A. Tris-HCl缓冲液
B. PBS缓冲液
C. 醋酸缓冲液
D. 以上都是
12. 用于RNA提取的试剂是（ ）
A. Trizol试剂
B. 氯仿
C. 异丙醇
D. 以上都是
13. 蛋白质定量常用的方法是（ ）
A. Bradford法
B. BCA法
C. 考马斯亮蓝法
D. 以上都是
14. 进行PCR反应时，需要的成分不包括（ ）
A. 模板DNA
B. 引物
C. dNTP
D. 核糖体
15. 以下哪种技术可用于分析基因的甲基化状态？（ ）
A. 亚硫酸氢盐测序
B. 甲基化特异性PCR
C. 染色质免疫沉淀
D. 以上都是
16. 分子克隆中，连接反应常用的酶是（ ）
A. DNA连接酶
B. 限制性内切酶
C. 逆转录酶
D. 蛋白酶
17. 用于细胞转染的方法有（ ）
A. 脂质体转染
B. 电穿孔转染
C. 病毒介导转染
D. 以上都是
18. 检测蛋白质磷酸化的技术是（ ）
A. 蛋白质印迹法
B. 免疫沉淀
C. Western印迹
D. 以上都是
19. 以下哪种技术可用于分析基因的拷贝数变异？（ ）
A. 荧光定量PCR
B. 基因芯片
C. 二代测序
D. 以上都是
20. 分子生物学实验中，常用的离心机转速单位是（ ）
A. rpm
B. g
C. rad/s
D. m/s

第II卷（非选择题，共60分）

（总共5题，每题12分）
1. 简述PCR反应的基本原理和步骤。

2. 请详细说明构建重组DNA分子的一般步骤和方法。

3. 举例说明蛋白质印迹法的原理、操作流程及应用。

4. 阅读以下材料：在研究某基因与疾病的关系时，发现该基因在患病组织中的表达水平明显高于正常组织。为进一步探究其作用机制，科研人员设计实验。首先提取患病组织和正常组织的总RNA，并逆转录成cDNA。然后利用荧光定量PCR技术检测该基因在两种组织中的表达量，同时检测一些相关基因的表达情况。请分析该实验设计的合理性，并说明荧光定量PCR技术在其中的作用。

5. 阅读材料：在基因治疗研究中，科研人员尝试利用CRISPR/Cas9技术对某致病基因进行编辑。他们设计了针对该致病基因的sgRNA，并将其与Cas9蛋白一起导入细胞中。一段时间后，检测细胞中该致病基因的突变情况以及相关蛋白的表达变化。请分析该实验的目的、操作过程及可能面临的问题，并提出解决策略。

答案：
1. B
2. D
3. D
4. D
5. A
6. A
7. D
s8. A
9. A
10. D
11. D
12. D
13. D
14. D
15. D
16. A
17. D
18. D
19. D
20. A

第II卷答案
1. PCR反应的基本原理是在模板DNA、引物、dNTP和DNA聚合酶等存在的情况下，通过变性、退火和延伸三个步骤的循环，使特定DNA片段得以大量扩增。步骤包括：变性，将模板DNA加热至95℃左右使其双链解开；退火，降温至合适温度使引物与模板结合；延伸，在DNA聚合酶作用下，以dNTP为原料合成新的DNA链，温度一般在72℃左右。
2. 构建重组DNA分子一般步骤：获取目的基因，可通过PCR扩增、从基因组文库或cDNA文库中筛选等方法；选择合适载体，常用质粒、噬菌体等；用限制性内切酶切割目的基因和载体，产生互补粘性末端或平末端；用DNA连接酶将目的基因与载体连接形成重组DNA分子；导入宿主细胞，如大肠杆菌，通过转化、转导等方法；筛选阳性克隆，可利用载体上的抗性基因、蓝白斑筛选等方法。
3. 蛋白质印迹法原理：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质，然后将其转移到固相膜上，再用特异性抗体与目标蛋白结合，最后通过显色或发光等方法检测目标蛋白。操作流程：样品处理，提取蛋白质并定量；电泳分离，将样品加样到凝胶孔中进行电泳；转膜，将凝胶上的蛋白质转移到膜上；封闭，用封闭液封闭膜上非特异性结合位点；孵育一抗，加入特异性抗体与目标蛋白结合；孵育二抗，加入能与一抗结合并带有标记的二抗；检测，通过显色或发光检测目标蛋白条带。应用：可用于检测蛋白质表达水平、分子量大小、蛋白质间相互作用等。
4. 该实验设计合理。提取总RNA并逆转录成cDNA为后续检测基因表达量做准备。荧光定量PCR技术可准确测定该基因在患病组织和正常组织中的表达量，通过对比能明确其表达差异。同时检测相关基因表达情况，有助于进一步探究该基因与其他基因的关系及在疾病发生发展中的作用机制。
5. 实验目的是利用CRISPR/Cas9技术编辑致病基因，探究对基因及相关蛋白表达的影响。操作过程包括设计sgRNA，将其与Cas9蛋白导入细胞。可能面临的问题：脱靶效应，即Cas9可能切割非目标基因；导入效率低。解决策略：优化sgRNA设计，提高特异性；采用合适的导入方法，如优化脂质体转染条件或选择高效病毒载体，提高导入效率；通过深度测序等方法检测脱靶情况，对可能的脱靶位点进行分析和验证。