公共卫生突发事件样品采集与处理.ppt

,.,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,公共卫生突发事件样品采集与处理,1,.,传 染 病 的 分 类,甲类传染病是指,：,鼠疫、霍乱,。,乙类传染病是指：,病毒性肝炎、,细菌性和阿米巴性痢疾、伤寒和副伤寒、,艾滋病、淋病、梅毒、脊髓灰质炎、麻疹、,百日咳、白喉、流行性脑脊髓膜炎、猩红热、,流行性出血热、狂犬病、,钩端螺旋体病、,布鲁氏菌病、,炭疽,、流行性和地方性斑疹伤寒、流行性乙型脑炎、黑热病、疟疾、登革热。,丙类传染病是指,：肺结核、血吸虫病、丝虫病、包虫病、麻风病、流行性感冒、流行性腮腺炎、风疹、新生儿破伤风、急性出血性结膜炎、,除霍乱、痢疾、伤寒和副伤寒以外的感染性腹泻,病。,2,一、,鼠疫取材,（一）疑似病人的取材,疑似鼠疫病人应在服用抗茵药物前，依其症状和体征，按以下规定部位采取检材。,各型疑似鼠疫患者，除采取相应部位材料外，均应采取静脉血35,mL，,供栓菌和血清学诊断用。,1、疑似腺鼠疫病人取材,选取肿大之淋巴结，用碘酒、酒精局部消毒，以左手姆指、食指固定，用灭菌注射器（1216号针头）刺入淋巴结，抽取组织液适量，保存于灭菌试管内或直接接种于血琼脂平板。,淋巴结肿大不明显者，可先向淋巴结注射0.30.5,mL,灭菌生理盐水，稍停后再行抽取。,感染后期可在肿大的淋巴结周围穿刺抽取组织液。,3,2、疑似肺鼠疫病人取材,令病人对血琼脂平板咳嗽，或将带血痰液标本收集于灭菌平皿或广口瓶内备检。,用灭菌棉拭子涂擦咽部分泌物，将拭子保存于灭菌试管或灭菌生理盐水管内备检。,3、疑似败血型鼠疫应采取静脉血液1,mL,以上。,4、疑似眼鼠疫应用棉拭子或无菌毛细吸管，采取眼的分泌物。,5、疑似肠鼠疫应取病人粪便备检。,6、疑似皮肤型鼠疫取材,水泡、脓泡期，可将脓泡表面用酒精消毒，以灭菌注射器由泡的侧面刺入泡内，抽取内容物备检。,溃疡、结痂期以灭菌镊子持灭菌棉球涂擦溃汤面和痂皮下的创面，将棉球保存于灭菌试管或灭菌盐水内备检。,4,7、疑似脑膜炎型鼠疫的病人用腰椎穿刺法抽取脑脊液备检。,8、疑似鼠疫尸体的取材,首例疑似鼠疫尸体应作解剖取材。,取材前应作好解剖器材、场所选择和尸体处理的准备。,以无菌手续采取肝、脾、肺、心血及有可疑病理改变的淋巴结等，分别置于灭菌平皿或试管内保存。尸体有腐败迹象时，必须取长骨材料。,如不能解剖，可行局部取材，用腰椎穿刺器按淋巴结、心、肝、脾及肺的顺序穿刺采取组织，分别保存于灭菌试管内，尸体腐败时可穿刺取骨髓。,5,凡所取材料均应保存于灭菌器皿内；组织块可保存于灭菌生理盐水中，或用510,mL Broke,氏液保存；亦可应用,Cary Bleir,培养基保存运送材料。容器用石蜡密封。,1、检材应包装严密，保存场所适宜，保存温度不高于4,2、准确详细填写送检单。,3、指派二名人员（其中一名专业人员），乘快速交通工具送检材。直接送达负责该地区检验工作的专业实验室。,4、接交材料时首先检查包装，绝对不能有破损、污染，如有破损应立即消毒并报告有关单位处理。材料接交按清单点清种类、数量，并准确记录签字。,6,应在调查范围内选择有代表性地段捕获所需动物并同时在全范围内收集自毙动物送检。,取材方法,：将获得的全部应检动物分类编号登记，单只装入小布袋内，活动物处死后，拣净体外寄生虫，进行动物分类鉴定，然后按下述方法剖检。,自毙、染病萎糜动物,：按常规方法解剖后，分别观察腺、肝、脾、肺、心等有无病变，并取相应材料作细菌学检查，使用的器械每用一次，必须进行检查。,腐败动物：,多采取骨髓和脑组织作检查。,（二）动物材料的采集,7,昆虫材料包括：,蚤类、蜱类、螨类、虱子等，以蚤类为重点。,蚤的采集：,动物体蚤的采集：,收集的体蚤及其他昆虫，拣入装有0.510-5龙胆紫、2%盐水的小瓶内，注明寄主、采集地点、采集日期。,洞道蚤的采集：用顶端固定白色法兰绒或毛巾的探蚤棒收集，,巢穴蚤的采集：,主要靠挖掘穴内的窝巢及表层泥土而获得。必须一巢装一袋，然后放入大白搪瓷盆内检蚤，收集的蚤分装并登记。,地面游离蚤的采集：,常用粘蚤纸收集，将粘蚤纸按要求放在房屋地面的一定位置，昏置晨查，搜集蚤纸上的蚤类，分装并登记。,将以上收集的蚤类进行分类鉴定并进行细菌学检验。,昆虫材料的采集,8,（三）鼠疫细菌检验基本要求与处理,鼠疫细菌检验必须在专用实验室内进行。,检验人员必须事前熟悉实验室管理制度，自身防护制度，技术操作规程等。,凡进入毒菌室操作，必须两人以上同时工作。,及时准确做好检验的各项实验记录。,9,动物接种,病人、尸体材料，特别是腐败材料必须在进行细菌培养的同时接种小白鼠（1820,g）,或豚鼠（250300,g）,脏器块，置于消毒乳钵内，用灭菌剪刀剪碎并研成匀浆，加入适量生理盐水，制成悬液备用。,新鲜材料可用腹腔或皮下接种，豚鼠接种0.51.0,mL，,小白鼠接种0.20.4,Ml。,腐败材料可采用经皮接种，剃去动物腹毛，并造成轻微划痕，将材料以棉拭子涂布于剃毛之皮肤上并擦之，涂擦时应以平皿盖掩盖，以防材料四溅。,接种实验动物后，做好标记，放入饲养笼内，挂牌记载编号、接种日期、途径等。每日饲养12次，直到动物死亡或经7,d,后杀死剖检。,如,7,d,动物没有死亡，应处死动物，取动物的脾脏及有可疑病变组织制成匀浆，接种第,2,组动物，动物死亡或观察,7,d,后处死，同时采集血清，做被动血凝试验。无阳性发现方可做出阴性报告。,10,二、猩红热,是由,A,组链球菌引起的急性呼吸道传染病，常侵犯515岁儿童，是儿童常见传染病之一，少数病人在病后可出现变态反应性心、肾并发症，在一定程度上，影响儿童的身体健康。是我国乙类的法定传染病之一。,A,组链球菌的分离,标本采集：,采取咽拭子、伤口炎性分泌物等标本,分离培养：,可直接草线接种血琼脂平板进行分离培养。观察菌落形态及溶血现象，形成灰白色、透明或不透明、表现光滑、有乳光、直接,0.50.75,mm,，,圆形突起的小菌落，菌落周围形成,24,mm,宽、界限分明、完全透明的溶血环。进一步涂片行革兰染色，证实为呈链状排列的革兰阳性球菌，菌呈圆形或卵圆形，直接,0.51.0,m,，,链状排列，长短不一。分纯后进一步鉴定。,11,三、钩端螺旋体病,钩端螺旋体病,是由钩端螺旋体属的不同血清型致病性钩端螺旋体（,Leptospira interrogans,）,引起的一种人兽共患病。它广泛分布于全世界，我国本病危害严重。由于钩端螺旋体侵犯人的多种脏器，所以临床表现复杂。全年均有病人发生，但常在夏秋季、稻田收割季节和洪涝害引起发病和流行。人普通对本病易感。以青壮年发病较多。,12,1、钩端螺旋体直接镜检和分离,病人血液的直接镜检,取早期病人血一滴，加蒸馏水一滴，使血细胞溶解，在暗视野显微镜下检查有否活动的钩端螺旋体。,取早期病人静脉血12,mL,于无菌试管中待凝固。离心沉淀，吸取血清与血细胞交界处略显白色的悬液。涂片后暗视野显微镜检查有否活动的钩端螺旋体。,差速离心暗视野检查法：采集早期病人静脉血,1,mL,，,加于含,2,mL,枸橼酸钠盐水管中，,1000,r/min,离心,10,min,，,吸上层血浆置另一清洁管中，,30003500,r/min,离心,3060,min,。,弃上清，取沉淀物一滴于玻片上，暗视野显微镜检查有否活动的钩端螺旋体,13,2、培养分离病原体,病人血液、尿液培养：采集早期病人血液，无菌操作接种于23管,Korthof,培养基中，每管接种13滴。血培养管置28培养。每隔57,d,取培养物暗视野显微镜下观察有无钩端螺 旋体生长，若有生长，即为分离阳性。若未见生长，需继续培养60,d，,仍不见钩端螺旋体方作阴性处理。,接取病后两周以上的病人中段尿3050,mL,于无菌离心管中35004000,r/min,离心1,h。,取沉渣染，可在采集尿标本的前一天晚上给病人服碳酸氢钠（,NaHCO,3,）24g，,同时，在培养基中加入100400,g/mL5-,氟脲嘧啶或1/2000的磺胺嘧啶。,病人血液、尿液接种金黄地鼠或幼龄豚鼠（体重120140,g,之间）。,菌株分群，分型鉴定：应用分群血清与新分离的钩端螺旋体作凝集试验，确定菌群。应用交叉凝集素吸收试验或分型因子血清来确定菌型。,14,四、白 喉,白喉,是由白喉杆菌引起的急性呼吸道传染病。其感染特征为咽、喉、鼻部等处粘膜充血，肿胀并有灰白色假膜形成，以及细菌外毒素引起的全身中毒症状，严重者常合并心肌炎和末梢神经麻痹。由于白喉菌苗（百白破三联制剂）的广泛应用，典型白喉逐渐减少，不典型白喉或轻型白喉日渐增多，尤其成人白喉的发病应引起关注。,15,实验室诊断,白喉棒状杆菌分离培养阳性并证明能产生外毒素，,咽拭子直接涂片镜栓可见革兰氏阳性棒状杆菌，并有异染颗粒。,病人双份血清特异性抗体四倍以上增长。,以无菌棉拭子或无菌拭子吸附新鲜配制的亚碲酸钾、甘油盐水保存液从疑似患者咽喉假膜边缘蘸取标本或同时采取鼻咽拭子，放入灭菌试管内同时送检。,带菌者或疑似病人,由于未见到明显的假膜，故应采集鼻咽部或扁桃体粘膜上的分泌物送检。,16,五、伤寒、副伤寒,伤寒、副伤寒,是一种急性肠道传染病，是中华人民共和国传染病防治法中规定报告的乙类传染病。,17,1、标本收集,按不同病期采集不同种类的标本。,血标本宜在病程的第12周采集，但只要发热未退，两周以后仍可获得阳性结果，采血量不少于510,mL，,已用氯霉素者取血凝块作培养。,骨髓培养宜在病程的第12周送检,粪便标本在病程的第34周送检。,尿标本宜在病程的第34周送检，阳性率较低，采集时应避免粪便污染。,玫瑰疹的刮取物或活检切片。,18,2、培养,血液和骨髓穿刺液先进行增菌培养，粪、尿（沉渣）可直接接种于鉴别培养基，经3724,h,培养后挑选可疑菌落，进一步作生化反应和血清学鉴定。,伤寒的经典血清学诊断方法是肥达氏反应（试管法），目前已采用微量疑集试验。,19,六、细菌性痢疾,细菌性痢疾,（以下简称菌痢）是由志贺菌（又称痢疾杆菌）引起的急性肠道传染病，是常见多发病，其发病率在我国法定报告的甲、乙类传染病中居首位，而且往往引起暴发或流行。,20,急性非典型菌痢,症状轻，可仅有腹泻、稀便,急性普通型（典型）菌痢,急性起病、腹泻（除外其他原因的腹泻）、腹痛、里急后重、可伴发热、脓血便或粘液便、左下腹部压痛。,21,急性中毒型菌痢,发病急、高热、呈严重毒血症症状，小儿起病时可无明显腹痛腹泻状，常需经灌肠或肛试做粪检，才发现是菌痢。根据主要临床表现有以下类型：,休克型（周围循环衰竭型）：有感染性休克症，如面色苍白、四肢厥冷、脉细速、血压下降、皮肤发花、发绀等。,脑型（呼吸衰竭型）：有脑水肿表现，如烦燥不安、惊厥、嗜睡或昏迷、瞳孔改变，甚至出现脑疝、呼吸衰竭。,混合型：同时出现休克型、脑型的症候，是最凶险的一型。,22,标本的收集,患者粪便标本的收集,可采用便盒留便、肛拭或采便管采便,便盒留便：留取粪便,A,时应采集新鲜粪便的脓血部分、粘液部分、水样便或稀便。便量15,g。,集体腹泻或食源性暴发患者粪便采集的数额，应根据患者人数的多少，决定采取标本的数量。,当怀疑患者为菌血症时，应以无菌操作，从静脉血管采取1015,mL,血液，放入加有,EDTA,抗凝剂瓶中送检。,所采取的粪便标本应尽快送检，不得越过,2,h,送到化验室，否则标本应放入,Cary-Blair,运送培养基中，运送时间超过,2,h,者，应冰浴条件下送检。,23,七、新生儿破伤风,新生儿破伤风,是破伤风杆菌由脐部，偶可由新生儿外伤处侵入而引起的急性感染性疾病。新生儿破伤风是发现中国家的严重卫生问题。,24,标本采取,于脐部未进行消毒处理和注射破伤风抗霉素之前，用无菌棉棒于脐部化脓部位深处取脓汁及坏死组织，至少应同时取两份标本，一份用做涂片镜检，另一份做动物试验。,流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）是由脑膜炎奈瑟氏菌（,Neisseria meningitidis,Nm,）,通过呼吸道传播所引起的化脓性脑膜炎，常在冬春季节引起发病与流行，患者以儿童为多见，流行时成年人发病亦增多。,25,标本的采集,CSF：,无菌操作，吸出,CSF2mL，,立即放到无菌试管内离心（20003000,r/min，30min），,用灭菌过的毛细管吸取沉淀物直接接种到10%羊血巧克力色琼脂上（,CSF,上清液部分供检测,Nm,特异抗原，亦可将其置于-20待测），5%二氧化碳环境37培养2472,h，,每日检查细菌生长的情况，及时分离纯培养物供鉴定。,血液：采取病人急性期静脉血液,6,mL,，,无菌操作往盛有,30,mL,增菌用的葡萄糖肉汤三角瓶内注入,4,mL,血液（余下的,2,mL,血液同上离心后吸出血清，供检测,Nm,特异抗原和抗体，亦可将其置于,-20,待测），同上述条件培养,24-72,h,，,每日进行分离培养。,26,八、感染性腹泻,感染性腹泻,广义系指各种病原体肠道感染引起之腹泻。本标准则仅指除霍乱、痢疾、伤寒、副伤寒以外的感染性腹泻。为中华人民共和国传染病防治法中规定的丙类传染病。主要包括细菌、病毒、原虫等病原体引起之肠道感染，较常见的如沙门菌肠类、肠致泻性大肠肝菌肠炎、致泻性弧菌肠炎、空肠弯曲菌肠炎、小肠结肠炎耶尔森菌肠炎、轮状病毒肠炎、蓝氏贾第鞭毛虫肠炎等,。,27,肠产毒性大肠杆菌（,ETEC）,标本：霍乱样水样便,肠侵袭性大肠杆菌（,EIEC）,标本：细菌性痢疾样便,肠出血性大肠杆菌（,EHEC）,标本：早期为水样便，后为血便。,28,九、炭疽（,Anthrax,）,炭疽（,Anthrax,）,是由炭疽芽孢杆菌（,Bacillus anthracis,）,引起的一种人与动物共患传染病，主要存在于食草动物和牲畜群落之中，并能造成环境的广泛污染。由于炭疽芽孢具有对外界环境极强的抵抗力，造成这种污染常持续存在。人类主要通过接触患病的牲畜、进食感染本病的牲畜肉类、吸入含有该菌的气溶胶或尘埃，以及接触污染的毛皮等畜产品而罹患本病。,29,采取标本时必须遵循的两条原则,尽可能在抗生素治疗开始前采取标本,除必要时并在具备操作病毒细菌条件的实验室内，不得用解剖的方式获取标本。所需的血液与组织标本，均应以穿刺方式取得。,30,血液标本,所有的疑似人类病例和病畜，都应采取血液样本，标本量至少应满足下列检查的需要。,涂片进行显微镜检查,接种培养基进行细菌分离培养,分离血清检查抗体,常规血液检查。,31,粪便与呕吐物标本,表现消化道症状的可疑病人收集粪便或呕吐物标本，特别注意选取其中混有血液的部分，置无菌容器中。,痰与咳碟标本,表现为呼吸道症状的可疑病人应收集其痰液标本，无痰液者，应取供细菌分离培养用的培养基，打开平皿盖置病人口鼻10,cm,处；令病人对平皿咳嗽，然后迅速盖上平皿。,脑脊液标本,表现脑膜刺激症状的病人，腰椎穿刺获取脑脊液，标本量参照,A1.2,的要求。,32,尸体标本,食草动物死于炭疽时，通常会从口、鼻、肛门等腔道开口流出血液，这种血液应是首先采取的标本。如果血液已渗入土壤，则应收集混有血液的土壤作为标本，没有血液流出，或已不可不可能获取血液标本时，可通过穿刺心脏获得血液或穿刺肝脏等实质性脏器获得组织标本。,肉类标本,如果怀疑罹患炭疽的家畜已被宰杀，或对商品肉类进行常规检查时，可剪取小块肉类标本。如有可能，特别应剪取肝脏、脾脏等富含血液以及含淋巴组织的标本。,毛皮或其他可疑污染物品标本,剪取小块毛皮或其他可疑物品，剪碎置无菌试管内，加适量无菌无菌生理盐水浸泡。,33,水标本,检查水体污染时，用广口瓶收集水样。如须取深层水样时，将带盖广口瓶伸入水中，然后将用绳系住的瓶盖提起。,土壤标本,在牲畜死亡或宰杀的地点，应取土壤标本以供检查。,34,十、霍乱,霍乱,是由,01,群和,0139,群霍乱弧菌引起的急性肠道传染病，是发病急、传播快、波及面广、危害严重的甲类传染病，也是当今三种国际,检疫传染病中最严重的一种。,35,谢谢大家！,36,.,