维生素C含量测定方法综述主题讲座课件.ppt

,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,摘要,目前研究维生素C测定方法的报道较多，如滴定法、光度分析法、高效液相色谱法等，各种方法各有特点。特别是高效液相色谱法是近年来发展较快的一种方法。本文对近年来有关维生素C的测定方法进行了综述。,关键词,维生素C,滴定法,光度分析法,高效液相色普法等,概述,维生素C是可溶于水的无色结晶，是一种分子结构最简单的维生素。维生素C有防治坏血病的功能，所以在医药上常把它叫做抗坏血酸。维生素C能保持巯基酶的活性和谷胱甘肽的还原状态，起解毒作用等。其广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量尤为丰富。准确测定维生素C的含量，对饮食健康、医疗保健都具有十分重要的意义。近年来报道的测定方法主要有滴定法、光度法、高效液相色谱法等。,维生素C的结构式,维生素C：六碳的多羟基内酯,测定方法,滴定法测定,维生素C,分光光度测,定维生素C,高效液相色谱法,测定维生素C,1 滴定法测定维生素C,1.1 2，6一二氯靛酚法,1.2 微量滴定法,2,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量,其能还原2,6-二氯酚靛酚染料。,维生素C具有还原性的烯二醇基，我们通过氧化还原滴定来测定维生素C,2，6-二氯靛酚法,原理,2，6-二氯靛酚是一种染料，其氧化型在,酸性,介质中为,红色,，,碱性,介质中为,蓝色,，与Vc反应后，生成无色的还原型酚亚胺，因此，在酸性条件下，用2，6-二氯靛酚滴定至溶液显,玫瑰红色,，即为终点；无需另加指示剂。,2，6-二氯靛酚法,方法,取本品适量（约相当于,Vc50mg,），用适量水溶解，置,100ml,量瓶中，加,偏磷酸,-,醋酸试液,20ml,再用水稀释置刻度，摇匀；,精密量取稀释液适量（约相当于,Vc2mg,）置,50ml,的锥形瓶中,加,偏磷酸,-,醋酸试液,5ml,用,2,6-,二氯靛酚滴定液,滴定,至溶液显,玫瑰红色,并持续,5s,不褪；,空白试验：,取偏磷酸,-,醋酸试液,5.5ml,，加水,15ml,，用,2,，,6-,二氯靛酚滴定液滴定。,计算：,(V-V,0,),F,T,W,W,标示量,标示量%=,反应摩尔比,100,维生素C 2,6-二氯酚靛酚 维生素C 2,6-二氯酚靛酚,（还原型）（氧化型，粉红色）（氧化型）（还原型）,+,+,=,2,6-二氯酚靛酚染料的钠盐在水溶液中显蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。,碘量法,原理：,由于维生素C分子中的烯二醇基有极强的还原性，能被碘氧化，用碘滴定VC,EC,6,H,6,O,6,/C,6,H,8,O,6,=0.18 ,EI,2,/I,-,=0.535,终点：,淀粉为指示剂，溶液出现稳定的蓝色即为终点,反应式：,碘量法,碘的浓度由已知浓度的,Na,2,S,2,O,3,标准溶液标定,反应式：,计算式：,Wvc,=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc)*100%,碘量法,注意！,测定时：加,HAC,使溶液呈弱酸性,原因,:,(1),Vc,还原性很强，在空气中很容易被氧化，在碱性介质中更甚,(2)I2,在碱性介质中会发生歧化反应,加,HAC,可减少,VC,的副反应，避免实验误差,电位滴定法,原理,：根据滴定过程中电池电动势的变化来确定反应终点.,Pt为指示电极，甘汞作参比电极,E,池,E,+,-E,-,+E,液接电位,EI,2,/I,-,+k(常数),电位滴定法,原理,(具体来说:),随着滴定剂的加入，由于发生化学反应，待测离子浓度将不断变化；,从而指示电极电位发生相应变化；,导致电池电动势发生相应变化；,计量点附近离子浓度发生突变；引起电位的突变，因此由测量工作电池电动势的变化就能确定终点。,电位滴定法,右图：电位滴定法基本仪器装置,计算式：,(与碘量法相同),Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc)*100%,优点：,解决了滴定分析中遇到有色或浑浊溶液时无法指示终点的问题,2 分光光度测定维生素C,2.1 2，4一二硝基苯肼分光光度法,2.2 钼蓝比色法,2.3 其他方法,2，4一二硝基苯肼分光光度法,原理：,维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸,反应式：,2，4一二硝基苯肼分光光度法,pH5,脱氢抗坏血酸内环开裂，形成二酮古洛糖酸,二酮古洛糖酸,2,4一二硝基苯肼分光光度法,脱氢抗坏血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎,脎在500nm波长有最大吸收,脎的结构：,分光光度法,样品溶液与VC标准溶液按上述方法同样处理,500nm处测吸光度,下图：721型分光光度计,钼蓝比色法,马占玲等用钼蓝比色法测定青椒中还原型维生素C含量的基本原理和方法。测定波长839 nm，维生素C含量在00040024 mgmL范围内呈线性关系，回收率为972。该方法简单、快速、准确。,钼蓝比色法,逯家辉等提出了一种测定维生素C的新方法，它是基于Folin B试剂与抗坏血酸在pH=3的三氯乙酸酸性介质中反应生成脱氢抗坏血酸，反应产物在910 nm波长处有最大吸光度进行定量分析。该方法的线性范围为0500gmL，相关系数r=0999 86，回收率为981210215。,差示旋光法,原理,方法,结果,维生素C片在不同PH值的溶液中旋光度有显著差异，而片剂辅料旋光度保持不变,差示旋光法消除辅料的影响，直接测出该制剂的含量,讨论,与,差示旋光法,方法,TEXT,1）标准溶液的配制,准确称取维生素C精制品5.0g，乙二胺四乙酸钠0.37g,置于100mL容量瓶中,用新沸冷却的蒸馏水溶解,加水到指定刻度,配制成,50mg/mL,的维生素C标准溶液。,TEXT,原理,方法,结果,讨论,与,差示旋光法,2）比旋光度与溶液pH值的关系,量取10.0mL维生素C标准液于50mL量瓶中,用水稀释至50mL。测定溶液的pH及旋光度,然后逐次分批加入氢氧化钠固体(每次约50mg),每次溶解后,测定一次溶液的pH及其旋光度,得到维生素C溶液的pH及旋光度关系,原理,方法,结果,讨论,与,差示旋光法,选定pH为,2.2,和,6.2,差示旋光法,2）差示旋光度与溶液浓度关系,吸取2.0、4.0、8.0、16.0、20.0mL的维生素C标准液各两份,分别置于50mL的容量瓶,一份用,pH2.2的盐酸盐缓冲液,定容；一份用,pH6.2的磷酸盐缓冲液,定容，静置3min后,用220mm测定管，以前者为空白，测定后者的差示旋光度(a)。,文献结果,：线性方程为,a=0 205*C+005，r=09964,原理,方法,结果,讨论,与,差示旋光法,3）辅料干扰试验,取混合辅料20mg(淀粉、硬脂酸镁、E,D,TA、糊精等按处方比例混匀)两份,分别置于50mL的容量瓶,一份用,pH2.2的盐酸盐缓冲液,定容,一份用,pH6.2的磷酸盐缓冲液,定容,滤去不溶物,滤液在两种pH值测定差示旋光度。,文献结果,：辅料的差示旋光度为零，说明辅料对维生素C含量的测定不干扰。,原理,方法,结果,讨论,与,差示旋光法,4）稳定性试验,同一测试样品，在120min内，每隔3min测定一次差示旋光度。,文献结果,：差示旋光度基本不变,原理,方法,结果,讨论,与,差示旋光法,5）回收率试验,精密称取维生素C精制品500.0mg两份，分别置于50mL容量瓶中，各加入20mg辅料，分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液，测定差示旋光度。,文献结果,：平均回收率为,97.8，,变异系数cv为,1.03,原理,方法,结果,讨论,与,差示旋光法,方法,TEXT,6）样品测定,取维生素C片剂10片，称重研碎后分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液(相当于含Vc 20mg/mL)，滤去不溶物，测定滤液的差示旋光度，根据回归方程计算其含量。,TEXT,原理,讨论,方法,结果,与,差示旋光法,方法,TEXT,1）维生素易被氧化,空气及水中的氧均可使其氧化分解，配制溶液时使用,新沸冷却水,同时加人,EDTA作为稳定剂,；,2）样品测定时，片剂部分物质不能完全溶解，必须,过滤,除去，然后测定滤液的差示旋光度。,TEXT,原理,讨论,方法,结果,与,3 高效液相色谱法测定维生素C,3.1 HYPERSILC8色谱柱法,3.2 VenusilXBPC18柱法,3.3 其他方法,HYPERSILC8色谱柱法,采用HYPERSILC 8色谱柱，用01低浓度的草酸作流动相，陈昌云等采用005 molL磷酸二氢钾缓冲液：甲醇=80：20(vv)作流动相。流速为10mLmin，二极管阵列检测器，检测波长为254 nm。,3.2 VenusilXBPC18柱法,系统采用VenusilXBPC18柱(46x250 mm，5g)，用02的偏磷酸的水溶液作为流动相，流速1 mlmin，检测波长240 nm；维生素C浓度在01-10 mgmL范围内有良好的线性关系。该方法回收率9989，标准偏差091，操作简便、灵敏、可靠,薄层扫描法,原理,维生素C具有 较强,还原性,，可使,蓝色,染料2，6-二氯靛酚钠定量地还原成无色的酚亚胺，而本身被氧化成去氢抗坏血酸，利用此特征进行薄层扫描法测定含量。,薄层扫描法,操作方法与结果,（1）试纸的制备,2,6-二氯靛酚钠(DCP-Na)溶于无水乙醇配成0.05%的,DCP-Na乙醇溶液，,滤纸在盛有DCP-Na乙醇溶液的展开缸中浸渍3min，边浸边摇展开缸，使滤纸均匀着色，充分被染料溶液所饱和。取出悬挂于暗处，晾干后，立即放入干燥器中避光保存，备用。,薄层扫描法,（2）缓冲溶液的配制,称取柠檬酸水合物10g，放入1000ml容量瓶中，加入1M 氢氧化钠 420ml，并用蒸馏水稀释至刻度，此溶液的pH应为3.5。否则，用酸或碱调整 pH值，保存于冰箱中。,薄层扫描法,3）扫描条件确定,在制备的染料试纸上定量点上维生素C对照品进行扫描，维 生素 C在,290nm 处有最大吸收，420nm处无吸收,，故选择,1,=290nm，,2,=420nm双波长反射式锯齿扫描。,原理,方法,结果,讨论,与,薄层扫描法,4）线性实验,4.1）对照品溶液的配制,精密称取维生素C标准品100mg，用缓冲溶液配成lmg/ml的标准溶液。精密称取维生素C标准溶液1、2、3、4、5ml，分别置于10ml容量瓶中，用缓冲溶液稀释至刻度。,4.2）测定,用5,l定量毛细管，分别吸取上述溶液各5,l，点于试纸上。点样后晾干，并将试纸 固定在20cm20cm玻璃板上，放入薄层扫描仪。测定A 的积分值(峰面积)作为纵坐标Y，点样量为横 坐标X，得一直线方程,Y=15692X+130225，r=09991,原理,方法,结果,讨论,与,薄层扫描法,方法,TEXT,5）样品的含量测定,取维生素 C片10片，研细，精密称取平均片重一片的粉末，放入100ml容量瓶中，加入缓冲液至刻度，振摇，使维生 素 C溶解，放置、澄清，用吸液管取3ml 移至10ml容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度。用 5,l定量毛细管点样品溶液与不同浓度的标准液于同一试纸上，然后扫描 测定峰面积，由工作曲线法计算维生素C片中的维生素C含量。,TEXT,原理,方法,结果,讨论,与,薄层扫描法,6）回收率实验,精密称取维生素C对照品20mg，其它原辅料适量，置 10ml容量瓶中，加缓冲液稀释至刻度，振摇，滤过，弃初滤液。分别吸取续滤液与对照品维生 素 C液各5,l点于同一试纸上，按上述条件进行扫描测定。,薄层扫描法,点样时各点间距应大于,10mm,，扫描测不定期波长可做少量变动，但每次测定必须固定同一测定波长,点样量 在,3,8,l,之间线性关系较好，当点样量为,10,l,，线性关系较差,。,原理,方法,结果,讨论,与,结束语,总之，维生素C的测定方法很多，各种方法各有特点，常用的滴定法方法简单，但在滴定有色物质终点不易判断，分光光度法操作费时，高效液相色谱法是目前发展较快的一种方法，方法灵敏，选择性好，有较好的发展前景。毛细管电泳n51是近几年新兴的分析方法，具有效率高、分析时间短、样品处理简单等特点，但有待于进一步完善。,参考文献,1吴春艳水果中维生素C含量的测定及比较J武汉理工大学学报，2oo7，29(3)：9091,2王元秀，庄海燕微量滴定法测定猕猴桃中维生素C的含量J1济南大学学报(自然科学版，2001，15(4)：374，,3张颖，等不同产地枸杞子中维生素C含量测定J中国医院药学杂志，2004，24(8)：500501,4袁叶飞，甄汉深，欧贤红分光光度法测定大枣中的维生素C含量J安徽中医学院学报，2006，25(2)：40-41,5马占玲，等青椒中还原型维生素C含量的测定J渤海大学学报(自然科学版)，2006，27(2)：111-113,参考文献,6逯家辉，等F0lin B分光光度法测定蔬菜中维生素C的含量J分析检测，2oo5，26(8)：171172,7王艳颖，等高效液相色谱法测定草莓中维生素C含量J大连大学学报，2006，27(2)：2122,8姜波，范圣第，刘长建，花艳红菠萝中维生素C的高效液相色谱分析J大连民族学院学报，2003，5(1)：5253,9刘长建青椒中维生素C的高效液相色谱分析J大连轻工业学院学报，2004，23(3)：229230,10陈昌云，李小华，刘莉莉高效液相色谱法测定蜜柚中维生素C的含量J化工时刊，2oo7，21(8)：1921,参考文献,11王爱月，张向兵，李发生高效液相色谱法测定食品及保健品中维生素C含量的研究J】中国卫生检验杂志，,2006，16(10)：1175-1176,12雍莉，等高效液相色谱法快速测定保健食品和果蔬中的VitCJ现代预防医学，2005，32(3)：247248,13胡志群，王惠聪，胡桂兵高效液相色谱测定荔枝果肉中的糖、酸和维生素CJ果树学报，2005，22(5)：582,14张秀梅，等高效液相色谱法测定菠萝果实维生素C含量J福建果树，2oo7，140(1)：2021,15杨建洲，张荣莉毛细管区带电泳分析果蔬中的维生素C含量J分析化学，2oo2，30(1)：120,谢词,本文是在徐洁老师的精心指导下独立完成的。为此，我首先要感谢徐老师，她对我的论文提出了实践性的建议，徐老师教学严谨，踏踏实实，对我的影响极大。从她身上我知道了该如何对待自己的工作，该如何做好自己的工作，为我以后踏上工作岗位有很大的帮助，使我对工作有了更新的态度，在以后的学习工作中我会加倍努力以回报老师的辛勤。再次感谢徐老师的言传身教。,