医学课件食品大肠菌群的测定平板计数法.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,1:10,1ml,1ml,1:1000,1:100,1ml,1:10000,加入,46,结晶紫中性红胆盐琼脂,(VRBA),培养基,1215ml,待琼脂凝固后，再加,3-4mL,培养基覆盖。,VRBA,的主要成分,乳糖、胆盐、结晶紫、,中性红及细菌生长所,必需的营养成分如,:,蛋,白胨、酵母膏等。,结晶紫和中性红为,VRBA,的指示剂系统，在酸性条,件下为紫红色。,大肠菌群分解乳糖所,产生的酸与胆盐结合，,可形成沉淀。,25g,或,ml,样品,1ml,生理,盐水,1ml,1ml,1ml,典型菌落为紫红色,菌落周围有红色的胆盐沉淀环。菌落直径为,0.5mm,或更大。,挑选菌落接种,BGLB,实践操作,任务一 仪器试剂准备,任务二 仪器试剂灭菌,任务三 样品稀释制备,检样处理,以无菌操作取经过充分摇匀的检样,25mL,，放入含有,225mL,灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内做成,1:10,的均匀稀释液。,样品稀释,用,1mL,灭菌吸管,吸取,1:10,稀释液,1mL,沿管壁徐徐注入含有,9mL,灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液,),充分振摇试管，使之混合均匀,制备成,1:100,的稀释液。另取,1mL,灭菌吸管,按上项操作顺序，作,10,倍递增稀释液,如此每递增稀释一次,即换用,1,支,1mL,灭菌吸管。,全过程遵循无菌操作程序，考虑如何满足要求？,任务四 平板制备,选择适宜的稀释样液 根据对标本情况的估计,选择,3,个适宜稀释度,吸取该稀释度,1mL,稀释液于灭菌平皿内。,待培养基冷却至,46,左右，以无菌操作侵入无菌培养皿中。每个平皿倒入约,15-20mL,培养基，利用培养基冲散菌液，,混匀,。冷却凝固后，再在表面加,3-4mL,培养基,。,从样品稀释到平板,涂布要求在,15min,内,完成。,任务五 典型和可疑菌落计数,选择菌落数在,15150,之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。,典型菌落为紫红色，菌落周围有胆盐与酸形成的沉淀环，菌落直径为,0.5mm,或更大。,任务六 证实试验,从,VRBA,平板上挑取,10,个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于,BGLB,肉汤管内，进行证实试验。,BGLB,肉汤管产气者，所对应的菌落即为大肠菌群阳性菌落。,任务七 结果报告,经最后证实为大肠菌群阳性的,BGLB,管的百分比乘以计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每,g(mL),样品中大肠菌群数。,例：,10,-4,样品稀释液,1ml,在,VRBA,平板上有,100,个典型和可疑菌落，挑取,10,个接种,BGLB,肉汤，证实,6,个为阳性。则样品大肠菌群数为：,1006/1010,-4,/g(mL)=6.010,5,cfu/g(mL),注意事项,1,、选择稀释度时，应以对含菌量的估计为依据，具体情况所选稀释度不同。,2,、两种检测方法的比较,平板计数法相对于,MPN,法来说，检验结果更精确。,适合用于污染比较严重的样品，但对于污染菌量太少的样品，还是,MPN,法更有优势。,