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,考纲导学教材研读考点突破,栏目索引,单击此处编辑母版标题,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,考纲导学教材研读考点突破,栏目索引,考纲导学教材研读考点突破,栏目索引,*,*,考纲导学教材研读考点突破,栏目索引,*,*,考纲导学教材研读考点突破,栏目索引,*,*,考纲导学教材研读考点突破,栏目索引,*,*,单击此处编辑母版标题,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,单击此处编辑母版标题,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,江苏版 生物,第47课时微生物分离和培养,第1页,考纲内容,要求,命题特点,备考指南,(1)微生物分离和培养,B,考查内容:培养基制,备、无菌技术、微生物接种技术、微生物分离与计数等,考查形式:多结合微生物,代谢特点,考查微生物分离与培养相关内容,(1)用列表比较法,比较微生物所需营养物质、培养基种类、消毒与灭菌等,(2)经过实际操作,掌握无菌操作技术和接种技术,(3)联络人体健康、医学发展等知识,经过试验,掌握大肠杆菌分离、培养和计数方法,(2)微生物分离与培养,b,考纲导学,第2页,考点一微生物试验室培养,一、培养基,1.概念:为人工培养微生物而制备适合微生物,或,营养基质。,2.分类:按物理性质分,3.营养成份:各种培养基配方不一样,但普通都含有水、,(提供碳元,素物质)、,(提供氮元素物质)和无机物等最基本物质。,下表为牛肉膏蛋白胨培养基配方,分析回答。,教材研读,生长、繁殖,积累代谢产物,碳源,氮源,第3页,培养基组成,含量,牛肉膏,5.0 g,蛋白胨,10.0 g,NaCl,5.0 g,H,2,O,定容至1 000 mL,(1),该培养基中牛肉膏能够提供主要营养有,。,(2),该培养基中蛋白胨能够提供主要营养有,。,(3),该培养基中,NaCl,提供,。,碳源、氮源、磷酸盐和维生素,碳源、氮源和维生素,无机盐,第4页,(4)若要制备牛肉膏蛋白胨固体平板培养基,还应加入物质是,。,4.配制培养基所遵照标准,(1)目标要,应依据所培养微生物种类和试验目标,明确培,养基特定用途。,琼脂,明确,(2)营养要,配制培养基时必须要注意各种营养物质浓度和比,例,不然会产生不良后果。,(3)pH要,这是因为各种微生物适宜生长pH范围不一样。,二、无菌技术,1.消毒:指使用,物理或化学方法杀死物体表面或内部,(不包含芽孢和孢子)。,2.灭菌:指使用,理化原因杀死物体内外,包含芽孢和孢子。,协调,适宜,较为温和,部分微生物,强烈,全部微生物,第5页,三、试验操作,1.制备牛肉膏蛋白胨固体培养基步骤:计算称量溶化,。,2.纯化大肠杆菌惯用方法,(1)平板划线法:经过,在琼脂固体培养基表面,3.无菌技术主要方法及适用对象:,灭菌,倒平板,接种环,连续划线,第6页,操作,将,逐步稀释分散到培养基表面。,(2)稀释涂布平板法:将菌液进行一系列,然后将不一样稀,释度菌液分别,到琼脂固体培养基表面,进行培养。,四、菌种保留方法,1.对于频繁使用菌种,能够采取,方法。,2.对于需要长久保留菌种,能够采取,方法。,聚集菌种,梯度稀释,涂布,暂时保藏,甘油管藏,第7页,考点二微生物分离与数量测定,一、筛选菌株,1.自然界中目标菌株筛选依据是依据它对,要求,到相,应环境中去寻找。,2.试验室中微生物筛选原理:人为提供有利于,生长条,件(包含营养、温度、pH等),同时,或,其它微生物生,长。,3.选择培养基:在微生物学中,将允许,种类微生物生长,同时,其它种类微生物生长培养基,称作选择培养基。,二、统计菌落数目,1.惯用方法:,法。,生存环境,目标菌株,抑制,阻止,特定,抑制和阻止,稀释涂布平板,第8页,2.统计依据:当样品,足够高时,培养基表面生长一个菌落,起源于样品稀释液中一个,。经过统计平板上,数,就能推测出样品大约含有多少活菌。,3.平板选择菌落计数时普通选菌落数在,平板进行计数,计,数公式为每克样品中菌株数=,C代表某一稀释度下平,板上生长平均菌落数,V代表涂布平板时所用稀释液体积(mL),M代,表稀释倍数。,三、分解尿素细菌判定,1.分解尿素细菌合成,将尿素分解成,使培养基,增强。,稀释度,活菌,菌落,30300,(C,V),M,脲酶,氨,碱性,第9页,2.在以,为唯一氮源培养基中加入,指示剂培养细,菌,若指示剂变,可确定该种细菌能够分解尿素。,四、纤维素分解菌筛选,1.纤维素酶组成:是一个,酶,它最少包含三种组分,即,、,和,。,2.纤维素酶作用,纤维素,纤维二糖,葡萄糖。,3.纤维素分解菌筛选,(1)筛选方法:,法。,(2)筛选原理:刚果红能够与纤维素形成,当纤维素被,尿素,酚红,红,复合,C,1,酶,C,x,酶,葡萄糖苷酶,刚果红染色,红色复合物,第10页,分解后,刚果红纤维素复合物就无法形成,培养基中会出,现,为中心透明圈,我们能够经过是否产生,来筛选纤维素分解菌。,1.培养基中普通都含有水、碳源、氮源和无机盐四种成份。,(),2.在配制培养基时,除满足营养需求外,还应考虑pH、O,2,及特殊营养物质,需求。,(),3.培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素,培养霉菌时需将培养基,pH调至酸性。,(),4.依据物理状态不一样,培养基只有液体培养基和固体培养基两种类型。,(),纤维素酶,以纤维素分解菌,透明圈,第11页,5.惯用液体培养基分离取得细菌单菌落。,(),6.用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时都需要使用接种针进,行接种。,(),7.只有能合成脲酶微生物才能分解尿素。,(),8.筛选分解尿素细菌应以尿素作为培养基中唯一氮源。,(),第12页,突破一培养基配制及无菌技术,1.培养基中碳源和氮源,考点突破,营养物质,定义,作用,主要起源,碳源,凡能为微生物提供生长繁殖所需碳元素营养物质,用于合成微生物细胞物质和一些代谢产物,有些是异养微生物主要能源物质,无机化合物:CO,2,、NaHCO,3,;有机化合物:糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等,氮源,凡能为微生物提供所需氮元素营养物质,合成蛋白质、核酸以及含氮代谢产物,无机化合物:N,2,、NH,3,、铵,盐、硝酸盐;有机化合物:尿,素、牛肉膏、蛋白胨等,第13页,知能拓展(1)自养型微生物和异养型微生物营养比较,营养类型,碳源,氮源,生长因子,自养型,微生物,CO,2,、NaHCO,3,等含碳无机物,NH,3,、铵盐、硝酸盐等,普通不需要,异养型,微生物,糖类、脂肪酸等,铵盐、硝酸盐等,有些微生物需要,第14页,(2)划分依据:自养型微生物与异养型微生物划分主要依据是能否以无机,碳作为生长主要或唯一碳源,而与氮源无关。自养型微生物以CO,2,或碳,酸盐为唯一碳源进行代谢生长;异养型微生物必须以有机物作为碳源进行,代谢生长。,(3)自养型微生物能源:利用光能,如蓝藻等;依靠物质氧化过程中释,放能量,如硝化细菌能利用NH,3,氧化过程中释放化学能,NH,3,既作为氮,源,又作为能源。,(4)异养型微生物能源:主要起源于有机物氧化分解,碳源不但为异养,型微生物提供组成细胞物质,而且提供完成整个生命活动所需能量。,第15页,项目,条件,结果,惯用方法,应用范围,消毒,较为温和,物理或,化学方法,仅杀死物体表面或内部部分微生物,煮沸消毒法,日惯用具,巴氏消毒法,不耐高温液体,化学药剂,消毒法,用酒精擦拭双手,用氯气消毒水源,灭菌,强烈理,化原因,杀死物体内外全部微生物,包含芽孢和孢子,灼烧灭菌法,接种工具,干热灭菌法,玻璃器皿、金属用具,高压蒸汽,灭菌法,培养基等,2.消毒与灭菌比较,第16页,尤其提醒高温使微生物体内蛋白质和核酸等主要生物大分子变性而,到达杀灭微生物目标。消毒和灭菌原理是相同,仅仅是作用条,件不一样;抑菌和灭菌程度不一样。,3.牛肉膏蛋白胨培养基制备,项目,要求,操作,计算,依据配方百分比,计算配制100 mL培养基所需各种成份用量,称量,准确地称取,放在称量纸上称量,动作快速,及时盖瓶盖,溶化,预防琼,脂糊底,连同称量纸一起加水、加热,待牛肉膏溶化取出称量纸,添加蛋白胨、氯化钠、琼脂,玻璃棒不停地搅拌,补加蒸馏水至100 mL,灭菌,杀死芽孢,和孢子,培养基高压蒸汽灭菌,培养皿干热灭菌,第17页,倒平板,待培养基冷,却至50,左右,在酒精灯火焰旁操作,锥形瓶瓶口要快速经过火焰,左手将培养皿打开一条稍大于瓶口缝隙,右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿,左手马上盖上培养皿皿盖,待培养基凝固,将平板倒置,使皿盖在下,皿底在上,第18页,1.选择培养基及其应用,(1)选择培养基:培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要微生物生,长,促进所需要微生物生长。目标是培养、分离出特定微生物。,(2)选择培养基应用实例,培养基中加入青霉素能够分离出酵母菌和霉菌。,培养基中加入高浓度食盐可得到金黄色葡萄球菌。,培养基中缺乏氮源时,能够分离得到固氮微生物,因为非固氮微生物不能,在此培养基上生存。,第19页,当培养基某种营养成份为特定化学成份时,也含有分离效果。如石油,是唯一碳源时,能够抑制不能利用石油微生物生长,使能够利用石油,微生物生存,到达分离能消除石油污染微生物目标。,改变微生物培养条件,也能够到达分离微生物目标,如将培养基放在,高温环境中培养得到耐高温微生物。,2.纯化大肠杆菌注意事项,(1)倒平板操作注意事项,培养基灭菌后,需冷却至50左右时才能倒平板。,左手拿培养皿,右手拿锥形瓶,左手拇指和食指将培养皿打开一条稍大于,瓶口缝隙,不要完全打开。,整个操作在酒精灯火焰旁进行,防止杂菌污染。,第20页,平板冷凝后要倒置,以预防皿盖上冷凝水落入培养基,造成污染。,若倒平板时,培养基溅在皿盖和皿底之间部位,这个平板应丢弃。,(2)平板划线操作注意事项,第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环,划线操作结束时,仍需灼烧接种环。每次灼烧目标如表所表示:,第一次划,线前灼烧,每次划线之前灼烧,划线结,束时灼烧,目标,防止接种环上可能存在微生物污染培养基,杀死上次划线结束后,接种环上残留菌种,使每次划线菌种直接起源于上次划线末端,杀死接种环上残留菌种,防止细菌污染环境和感染操作者,第21页,接种环灼烧后,要冷却后才能接触菌种,以免温度太高杀死菌种。,划线时最终一区域不要与第一区域相连。,划线时用力要大小适当,预防用力过大将培养基划破。,(3)稀释涂布平板,系列稀释操作(如图1),图1,第22页,涂布平板操作(如图2),图2,注意事项,第23页,a.稀释操作时,每支试管及其中9 mL水、移液管均需灭菌;操作时,试管口和,移液管应在离火焰l2 cm处;移液管头不要接触任何物体。,b.涂布平板时,涂布器用体积分数为70%酒精消毒,取出时,多出酒精在烧,杯中滴尽,后将沾有少许酒精涂布器在酒精灯火焰上引燃。不要将过热,涂布器放在盛放酒精烧杯中,以免点燃其中酒精。酒精灯与培养皿,距离要适当。,第24页,比较项目,平板划线法,稀释涂布平板法,关键操作,接种环在固体平板培养基表面连续划线,一系列梯度稀释,涂布平板法操作,注意事项,每次划线先后均需灼烧接种环,稀释度要足够高,为确保试验成功可以增加稀释度范围,菌体获取,在含有显著菌落特征区域菌落中挑取菌体,从适宜稀释度平板上菌落中挑取菌体,优点,能够依据菌落特点取得某种微生物单细胞菌落,既能够取得单细胞菌落,又能对微生物计数,缺点,不能对微生物计数,操作复杂,需要涂布多个平板,3.纯化微生物接种方法,第25页,考向一以选择题形式综合考查培养基成份和配制,1.以下叙述正确是,(),A.培养基是为微生物生长繁殖提供营养基质,B.培养基只有两类:液体培养基和固体培养基,C.固体培养基中加入少许水即可制成液体培养基,D.微生物在固体培养基上生长时,能够形成肉眼可见单个细菌,答案A培养基是为人工培养微生物而制备、提供适合微生物生,长、繁殖或积累代谢产物营养基质,;,培养基种类依据划分依据不一样,而不一样,如依据化学成份不一样能够分为天然培养基、合成培养基和半合,成培养基等。固体培养基是液体培养基添加凝固剂形成,其它成份均与,液体培养基相同。微生物形体微小,肉眼无法看到,必须借助仪器才能看,到,在固体培养基上用肉眼观察到是一个菌落。,第26页,2.(江苏泰州一模,15,2分)以下关于制备牛肉膏蛋白胨培养基叙述,错,误,是,(),A.培养基应先调pH再进行灭菌,B.培养基应先灭菌再分装到培养皿,C.溶化琼脂时不能使培养基溢出或烧焦,D.高压蒸汽灭菌锅加盖时应按顺时针方向依次旋紧螺栓,答案D制备培养基时,需先调整pH,再灭菌,A正确;灭菌后培养基,才能进行分装,B正确;溶化琼脂时不能使培养基溢出,以防培养基被污染,也不能烧焦,C正确;高压蒸汽灭菌锅加盖时应对称旋紧螺栓,D错误。,第27页,考向二以选择题形式考查无菌操作技术及纯化微生物接种技术,3.用平板划线法或稀释涂布平板法都能够纯化大肠杆菌。二者共同点,有,(),能够用相同培养基,都要使用接种针进行接种,都需要在火焰旁进行接种,都能够用来计数活菌,A.B.C.D.,答案C平板划线法或稀释涂布平板法都是在固体培养基上进行,所以描述正确,;,平板划线法接种用接种针,稀释涂布平板法接种用涂布,器,所以错误,;,不论是平板划线法还是稀释涂布平板法都需要进行无菌操,作,在酒精灯火焰旁进行,所以描述正确,;,平板划线法不能用于计数活菌,只能用于分离菌种,;,稀释涂布平板法能够用来计数活菌,所以描述错误。,第28页,突破二微生物分离与计数,1.土壤中分解尿素细菌分离与计数,(1)分离原理,土壤中细菌之所以能够分解尿素,是因为它们体内能合成脲酶。这种,物质在把尿素分解成无机物过程中起催化作用。,第29页,试验室中微生物筛选原理:人为提供有利于目标菌株生长条件(包含,营养、温度和pH等),同时抑制或阻止其它微生物生长。,(2)分离分解尿素细菌所使用特定培养基为选择培养基,培养基中氮,源只有尿素,理论上只有能合成脲酶微生物才能在上面生长。其配方如,下:,KH,2,PO,4,1.4 g,Na,2,HPO,4,2.1 g,MgSO,4,7H,2,O 0.2 g,葡萄糖 10.0 g,尿素(唯一氮源)1.0 g,琼脂 15.0 g,第30页,将上述物质溶解后,用蒸馏水定容到1 000 mL。,(3)统计菌落数目标方法,普通选菌落数为30300一组平板为代表进行统计计数,每克土壤样品,细菌数=某一稀释度几次重复培养后菌落平均数,稀释倍数。,2.分解纤维素微生物分离,(1)纤维素分解菌筛选原理,刚果红能够与纤维素形成红色复合物,但并不和水解后纤维二糖和葡,萄糖发生这种反应。,纤维素分解菌能产生纤维素酶分解纤维素,从而使菌落周围形成透明,圈。,(2)土壤中纤维素分解菌筛选,第31页,方案:土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到判别纤维素分解,菌培养基上挑选产生透明圈菌落。,选择培养目标:增加纤维素分解菌浓度,确保能够从样品中分离到所,需要微生物。,包括微生物技术主要有:培养基制作、无菌操作技术、稀释涂布平,板法、土壤取样等。,第32页,比较,项目,间接计数法,(稀释涂布平板法),直接计数法,(显微计数法),原理,当样品稀释度足够高时,培养基表面生长一个菌落,起源于样品稀释液中一个活菌,经过统计平板上菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌,利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积样品中微生物数量,公式,每克样品中菌株数=(CV)M,其中,C代表某一稀释度下平板上生长平均菌落数,V代表涂布平板时所用稀释液体积(mL),M代表稀释倍数,每毫升原液所含细菌数:每小格平均细菌数,400,10 000,稀释倍数,缺点,当两个或多个菌体连在一起时,平板上观察到只是一个菌落,不能区分细胞死活,结果,比实际值偏小,比实际值偏大,1.微生物两种计数方法比较,第33页,2.微生物判别方法,(1)菌落特征判别法:依据微生物在固体平板培养基表面形菌落形状、,大小、隆起程度和颜色等特征进行判别。,(2)指示剂判别法:如培养基中加入酚红指示剂,培养某种微生物后,培养基,变红说明该种微生物能够分解尿素。,(3)染色判别法:如利用刚果红染色法,依据培养基中出现以纤维素分解菌,为中心透明圈来筛选分解纤维素微生物。,第34页,考向一以选择题形式考查选择培养基在微生物分离和筛选中应用,1.以下关于微生物筛选叙述中,不正确是,(),A.利用高温培养条件筛选耐热,Taq,细菌,B.用不含碳源培养基筛选出自养型微生物,C.用含酚红培养基筛选出能分解尿素菌株,D.用高浓度NaCl培养基筛选耐盐突变菌株,答案C,Taq,耐热菌需要利用高温来筛选,A正确;用不含碳源培养,基能筛选出自养型微生物,异养型微生物缺乏碳源不能存活,B正确;用,以尿素为唯一氮源培养基筛选分解尿素菌株,能够用含酚红培养基,进行判别,C错误;耐盐突变株应用含高盐培养基筛选,D正确。,第35页,2.(江苏盐城月考,18,2分)以下相关微生物培养说法,正确是,(),A.制备固体培养基操作次序为计算、称量、溶化、消毒、倒平板,B.分离能分解纤维素细菌,要以纤维素作为培养基中唯一碳源,C.配置培养不一样微生物培养基时都要将pH调至中性或微碱性,D.在无氮培养基中加入酚红指示剂可用来判定尿素分解菌,答案B制备牛肉膏蛋白胨固体培养基步骤是计算、称量、溶,化、灭菌、倒平板,A错误;以纤维素作为培养基中唯一碳源,可分离出能分,解纤维素细菌,B正确;配置培养不一样微生物培养基时pH应有所不一样,C,错误;在以尿素为唯一氮源培养基中加入酚红指示剂可用来判定尿素分,解菌,D错误。,第36页,考向二以非选择题形式考查微生物分离和培养相关知识,3.植物秸秆中纤维素可被一些微生物分解。回答以下问题:,(1)分解秸秆中纤维素微生物能分泌纤维素酶,该酶是由3种组分组成,复合酶,其中葡萄糖苷酶可将,分解成,。,(2)在含纤维素培养基中加入刚果红(CR)时,CR可与纤维素形成,色复合物。用含有CR该种培养基培养纤维素分解菌时,培养基上会出,现以该菌菌落为中心,。,(3)为从富含纤维素土壤中分离取得纤维素分解菌单菌落,某同学设计,了甲、乙两种培养基(成份见下表):,酵母膏,无机盐,淀粉,纤维素粉,琼脂,CR溶液,水,培养基甲,+,+,+,+,-,+,+,培养基乙,+,+,+,-,+,+,+,第37页,注:“+”表示有,“-”表示无。,据表判断,培养基甲,(填“能”或“不能”)用于分离和判别纤维,素分解菌,原因是,;培养基乙,(填“能”或“不能”)用于分离和判别纤维素分解菌,原因是,。,答案(1)纤维二糖葡萄糖,(2)红透明圈,(3)不能液体培养基不能用于分离单菌落不能培养基中没有纤维素,不会形成CR纤维素红色复合物,即使出现单菌落也不能确定其为纤维素,分解菌,第38页,解析(1)纤维素酶是一个复合酶,普通认为它最少包含三种组分:C,1,酶、,C,x,酶和葡萄糖苷酶,前两种酶使纤维素分解成纤维二糖,葡萄糖苷酶将纤维二糖分解成葡萄糖。(2)刚果红可与纤维素形成红色复合物,但并不与水解后纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。用含有刚果红纤维素培养基培养纤维素分解菌时,因为纤维素被分解,红色复合物无法形成,培养基中会出现以纤维素分解菌为中心透明圈。(3)培养基甲未使用琼脂,为液体培养基,不能用于分离单菌落。含有纤维素和刚果红(CR)培养基可分离和判别纤维素分解菌。,第39页,
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