核酸第一部分.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,前言,指导注册申请人，规范技术审评,根据产品特性对申报资料内容进行细化,不包括注册审批所涉及的行政事项，不作为法规强制执行,基于当前认知，适时调整,适用范围,核酸检测技术,以特定的流感病毒基因序列为检测目标，对人咽拭子、呼吸道洗液、抽吸液或其它呼吸道分泌物样本中的流感病毒进行体外定性检测的试剂,首次注册、许可事项变更,目录,背景知识,产品说明书,拟定产品标准及编制说明,注册检测,主要原材料研究资料,主要生产工艺及反应体系的研究资料,分析性能评估资料,参考值（范围）确定,稳定性研究资料,临床试验研究,背景知识,（,1,）,分型及特征,型别,流行性,亚型,甲型,最易流行,H,亚型,:H1-H16,*,N,亚型,:N1-N9,乙型,较易流行,丙型,极少流行,*,目前，,H1,、,H2,、,H3,、,H5,、,H7,和,H9,亚型分别有人感染的报道,背景知识,（,2,）,流感病毒的流行,季节性流感病毒,抗原漂移（,antigenic drift,）：,微小改变,。,传播范围局限，,发病率和死亡率低，,老年人和婴幼儿易感,主要集中在甲型,H3N2,和,H1N1,亚型,背景知识,（,5,）,流感病毒核酸（通用型）检测试剂：,用于流感的辅助诊断,甲型流感病毒各亚型的检测试剂：,区分季节性和新型甲型流感病毒,有关流感暴发的流行病学信息。,背景知识,（,6,）,命名：,6,个要素,型别,/,宿主,/,分离地区,/,毒株序号,/,分离年份（,Hn,和,Nn,）,例：,A/Shanghai/37T/2009,（,H1N1,）,背景知识,（,7,）,不建议,研发流感病毒核酸的,定量,检测试剂,样本采集无法标准化,无临床指导意义,甚至导致错误的医学解释，误导用药量的增减或其它诊疗措施,综述资料,产品预期用途,产品描述,*,有关生物安全性的说明,研究结果的总结评价,*,同类产品上市情况介绍,着重从方法学及不同类型毒株检出能力等方面写明拟申报产品与目前市场上已获批准的同类产品之间的主要区别。,产品说明书,指导用户操作、合理医学解释的依据；,符合,IVD,说明书指导原则,的要求,境外产品：中文说明书内容应尽量保持与原文说明书的一致性，翻译准确，表达清楚。,【,预期用途,】,(1),定性检测人鼻咽拭子、口咽拭子、呼吸道抽吸液、洗液和,/,或其它呼吸道分泌物样本的流感病毒,RNA,，适用样本类型的确定应结合实际的临床研究完成情况进行确认。,简单介绍待测目标的特征，如病毒种系渊源,。,产品说明书,【,预期用途,】,(2),待测人群特征介绍：如具有流感样症状的患者,；,强调：实验操作人员应接受过基因扩增或分子生物学方法检测的专业培训，具备相关的实验操作资格，实验室应具备合理的生物安全防备设施及防护程序。,产品说明书,【,主要组成成分,】,组分名称、数量、比例或浓度等信息,对照品,/,质控品,实验需要但不包含的组份,用于核酸提取分离,/,纯化的组分,产品说明书,【,储存条件及有效期,】,效期稳定性、开封稳定性、复融稳定性、运输稳定性,冻融次数要求,其他,产品说明书,【,样本要求,1,】,样本采集时间点的选择,对采样拭子、容器及样本保存液的要求,样本采集：样本类型、采集部位，医护人员防护；详述操作方法或列出指南文件（图示最佳）,产品说明书,【,样本要求,2,】,样本处理及保存：,提取前预处理,保存条件及期限,运输条件,冻融次数,产品说明书,【,适用机型,】,所有适用的仪器型号,指导用户操作的仪器信息,产品说明书,【,检验方法,1,】,实验条件：实验室分区、温度、湿度、空调气流方向,试剂：配制方法、注意事项,核酸提取（样本及质控品）：条件、步骤、方法、注意事项,产品说明书,【,检验方法,2,】,扩增反应前准备：加样体积、顺序等,RT-PCR,：温度、时间、循环数、注意事项,仪器设置：特殊参数、荧光通道选择,分析：基线、循环阈值（,Ct,值）的选择方法,产品说明书,【,检验结果的解释,1,】,综合阳性对照、阴性对照、内对照（内标）的,Ct,值,所有可能出现的结果组合及解释,产品说明书,【,检验结果的解释,2,】,检测灰区（如有）：处理方式,含两个或以上荧光探针：每个探针可能产生的结果组合及解释,重复检测：何时需要、可能的优化条件等,产品说明书,【,检验方法的局限性,1,】,检测结果与临床及其他检测结合分析,假阴性结果分析：,不合理的样本采集、转运及处理、样本中病毒滴度过低,待测靶序列的变异或其它原因导致的序列改变,产品说明书,【,检验方法的局限性,2,】,对于突发的新型甲型流感病毒，其最适样本类型及感染后的最佳采样时间未经验证，因此，在同一患者分次、多部位采集样本会降低假阴性结果的可能性,未经验证的其它干扰或,PCR,抑制因子,产品说明书,【,产品性能指标,】,（,1,）,对相应国家参考品（如有）检测的符合情况,阳性参考品,/,阴性参考品、灵敏度、精密度等。,产品说明书,【,产品性能指标,】,（,2,）,最低检测限（分析灵敏度）：列出最低检出浓度，确定方法以及对最低检出限验证所采用的病毒株信息。,产品说明书,【,产品性能指标,】,（,3,）,企业内部阳性,/,阴性参考品符合率，简单介绍阳性参考品的来源、浓度梯度、阴性参考品组成、来源以及浓度梯度设置等信息。,精密度：精密度参考品的组分、浓度及评价标准。,产品说明书,【,产品性能指标,】,（,4,）,分析特异性,甲型流感病毒的亚型验证：,甲型流感通用型核酸检测试剂：各亚型（覆盖）、乙型,甲型流感病毒亚型检测试剂盒：对较常见的除目的基因外的其他亚型进行交叉反应验证,交叉反应：易产生交叉反应的其它病原体核酸的验证情况,产品说明书,【,产品性能指标,】,（,5,）,分析特异性,干扰物质：样本中常见的可能干扰,药物影响：外用或内服的常见药物对检测结果的影响,产品说明书,【,产品性能指标,】,（,6,）,对比试验研究：简要介绍参比试剂（方法）的信息、所采用的统计学方法及统计分析结果,。,产品说明书,【,注意事项,】,（,1,）,有关人源组份（如有）的警告：,试剂盒内对照品（质控品）或其它组分可能含有人源物质,没有任何一项检测可以确保绝对安全，应将这些组份作为潜在传染源对待,产品说明书,【,注意事项,】,（,2,）,有关分子生物学实验室、临床基因扩增实验室的管理规范：,实验人员进行专业培训,实验过程应分区进行,产品说明书,【,注意事项,】,（,3,）,实验操作的每个阶段使用专用的仪器和设备,各区各阶段用品不得交叉使用,各区间人员流动及空气流向有严格要求,实验用消耗品（如离心管、吸头等）清洁和质检程序,产品说明书,产品标准,（,1,）,拟定产品标准应符合,办法,和,基本要求,的相关规定。,国产,/,首次：将主要原材料、生产工艺及半成品检定等内容作为附录,标准及注册检测,产品标准,（,2,）,拟申报产品的企业标准要求不得低于相应的国家,/,行业标准要求（如有）。,标准及注册检测,产品标准,（,3,）,性能指标：,物理性状、阴,/,阳性对照品的,Ct,值要求（包括内标）、阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、精密度、最低检测限等,标准及注册检测,产品标准,（,4,）,阳性参考品主要考察对不同来源的病毒株、不同滴度情况下的检测符合性,对于甲型流感病毒核酸通用型检测试剂，在此还应考虑不同亚型的检测能力,阴性参考品则是对分析特异性（交叉反应）的验证，应主要包括易发生交叉反应的其他病原体的假阳性情况的考核,标准及注册检测,注册检测,（,1,）,首次申请注册的第三类产品,国家食品药品监督管理局认可的,具有相应承检范围的医疗器械检测机构,连续三个生产批次样品的注册检测。,标准及注册检测,注册检测,（,2,）,对于已经有国家参考品的流感病毒项目，在注册检测时应采用相应的国家参考品进行,对于目前尚无国家参考品的项目，生产企业应建立自己的质控体系并提供相应的内部参考品。,标准及注册检测,主要原材料研究,（,1,）,主要原材料：引物、探针、酶、,Mix,、企业参考品或标准品,研究内容：选择依据、来源、制备过程、质量分析、质控标准,主要原材料研究,（,2,）,核酸分离,/,纯化组分（如有）：组成、原理、验证资料,dNTP,：对纯度、浓度、稳定性等的验证资料,引物：序列准确性、纯度、稳定性、功能性实验等的验证。如为外购，合成机构出具的合成产物的质检证明,主要原材料研究,（,3,）,探针：纯化、纯度要求、质检证明,PCR,反应所需酶：,DNA,聚合酶,尿嘧啶糖基化酶（,UNG,）,逆转录酶,主要原材料研究,（,4,）,企业内部参考品的原料选择、制备、定值过程及试验资料。,其它：包装和耗材无,DNase,和,RNase,污染。,Thanks,