疟原虫镜检技术-制片与染色.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,一、材料,玻片：推玻片（具有光滑的边缘）、载玻片,一次性采血针,75%的医用消毒酒精（湿棉球）,干棉球（止血用）,标签、记号笔：载玻片上标识与编号,玻片盒,玻片的处理,新玻片常有游离的碱质，使用前应用重铬酸钾洗液或稀盐酸（将浓盐酸稀释10倍）浸泡24小时，然后用自来水反复冲洗，晾干或烘干备用。,旧的玻片，应放入5%的肥皂或洗衣粉水中煮沸20分钟，再用热水将肥皂或血膜等污物洗去，用自来水反复冲洗，必要时再置95%乙醇中浸泡1小时，然后擦干或烘干备用。,二、采血,采血部位：患者的耳垂或指尖。耳垂采血的优点是痛觉不明显，不易感染，但血液循环较差，采血前应适当按摩使其充血，婴幼儿可以选择拇趾或足跟处采血。,采血方法：先用酒精棉球消毒采血部位，待干后用左手的拇指和食指固定采血部位，右手持采血针迅速刺入组织1至2mm，取出采血针，血液自行流出，若血液不畅，可以在离刺孔较远的四周稍加压力，不得靠近用力挤压，以防组织液混入待检的血液中。采血后用干棉球压迫止血。,厚、薄血膜的位置,每张载玻片上可做1个薄血膜和1个厚血膜，如图,染色前血膜的保存,血膜制成后，立即将受检者号码写在玻片上，血膜朝下水平插入标本盒内，让血膜自然干燥后才能染色,。,血膜放置时间，夏天不宜超过48小时，冬天不宜超过72小时，否则厚血膜会自然固定而不能溶血，影响镜检。,不能及时染色的血膜，可先用玻棒蘸取甲醇或无水酒精在薄血膜上轻轻涂抹（注意勿使固定液沾到厚血膜上）。厚血膜必须先进行溶血，可用滴管滴水于厚血膜上，待血膜呈灰色时，将水倾去，晾干后包好，放入干燥器中，置于冰箱内保存。临用时，将干燥器放置室温中12小时后取出血片。,血膜的染色,染色液的制备：推荐使用吉氏染液。吉氏染剂不仅适用于厚血膜和批量血膜的染色，而且效果稳定，染色时间和染液浓度对染色结果影响较小，染色后的血膜保存时间较长，同时吉氏染剂能长期保存而不变质。,吉氏染液配制：吉氏粉 5g，甲醇250ml，甘油250ml。将吉氏粉置于研钵中，加入少量甘油充分研磨，边加边磨，至甘油加完为止，倒入500ml有塞玻璃瓶中。在研钵中加入少量甲醇，洗掉剩余部分，倒入瓶内，再次加甲醇，洗后再倒入瓶中，至甲醇洗净研钵为止。塞紧瓶塞，充分摇匀，室温内放置，每天用力摇动溶液5分钟，3天后即可使用。,染色用水：,为了使血膜着色较好，应用pH7.07.2水效果最佳,。,中性的蒸馏水也可。,缓冲液配制,pH,1/15mol/L,磷酸氢二钠溶液,1/15mol/L,磷酸二氢钾溶液,蒸馏水,（ml）,6.8,4.9,5.1,90,7.0,6.3,3.7,90,7.2,7.3,2.7,90,7.4,8.1,1.9,90,染色方法,少量血片染色：取吉氏染液1份，加入缓冲液或蒸馏水15至20份，混合均匀后，滴在厚、薄血膜上，染色2030分钟，然后用缓冲液或蒸馏水将血片上的染液冲走，晾干待检。,染色方法,成批血片染色：将血膜朝一个方向插入染色缸中，或每对玻片血膜朝外，背靠背插入染色缸中，倒入新配的2吉氏染液浸没厚薄血膜，染色30分钟后，向染色缸中注入缓冲液或自来水，直到溢出，除掉染液表面上的浮渣，将染色缸中残余的染液倾出，加入新水，反复冲洗23次，取出玻片，将血膜朝下插在晾片板上干燥待检。,注意事项,染色效果的好坏与稀释用水的氢离子浓度（pH）、染液的浓度、染色时温度的高低、染色的时间长短、染液配制的时间长短等都有密切的关系，因此，每批血片染色前要进行试染，以取得更好的染色效果。,