螺旋体和支原体.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,螺旋体和支原体,螺旋体,（,Spirochete,）,一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物，生物学地位介于细菌与原虫之间。,分类与命名,分类依据：大小、螺旋数目、螺旋规则程度和螺旋间距,分类与命名,一目一科：螺旋体目,螺旋体科：分为8个属（-）(表18-1),疏螺旋体：3-10个稀疏不规则的螺旋，波纹状,伯氏疏螺旋体 莱姆病 硬蜱,回归热螺旋体流行性回归热 体虱,赫姆疏螺旋体地方性回归热 软蜱,奋森疏螺旋体 多种口腔感染 条件致病,分类与命名,钩端螺旋体：螺旋细密规则，一端或两端弯 曲呈钩状,问号钩端螺旋体钩端螺旋体病 接触疫水,密螺旋体：8-14个细密规则的螺旋，菌体硬直，两端尖,梅毒螺旋体梅毒性传播,雅司螺旋体雅司病皮肤损伤,品他螺旋体品他病皮肤损伤,地方性螺旋体地方性梅毒黏膜损伤,钩端螺旋体,（,Leptospira,）,螺旋细密而规则,数目较多,菌体一端或两端弯曲呈钩状,临床意义,典型人畜共患病 鼠和猪,人类主要感染途径是接触污染疫水,临床常见,流感伤寒型,黄疽出血型,肺出血型,脑膜脑炎型,肾功能衰竭型,微生物特性,形态结构,螺旋细密而规则,菌体一端或两端弯曲呈问号或C、S形,基本结构：外膜,内鞭毛（两根）,原生质圆柱体,微生物特性,抗原构造,属特异性抗原 只存在钩端螺旋体属中,血清学诊断，分类及抗原结构分析,群特异性抗原 菌体脂质多糖复合物,型特异性抗原 表面抗原，多糖蛋白复合物,血清群和血清型分类,培养特性,营养要求较高，常用含10兔血清的,Korthof,培养基,最适生长温度28-30,，,在人工培养基中生长缓慢,微生物特性,抵抗力,对热抵抗力弱，对来苏、升汞、石碳酸等敏感，对青霉素敏感,但是夏秋季酸碱度中性的湿土或水中可存活20天，甚至数月,微生物检验,检验程序:图18-2,标本采集,血液、CSF、尿液、疫水,早期(1周内)血液阳性率高，1周后尿和脑脊液等的阳性率高。,感染6-10天取血可检出抗体，第3-4周达最高水平。,尸检：肝、肾、脑、肺等,微生物检验,直接检查,直接显微镜检查：,差速离心，取沉淀涂片，暗视野检查或采用,Fontana,镀银染色镜检,核酸检测,微生物检验,分离培养,取血液、尿液、CSF等接种Korthof 培养基,鉴定,已知诊断血清鉴定血清群和血清型,抗体检测,病初和发病3-4周采双份血清,显微镜凝集试验：1:300或双份血清效价增高4倍以上,间接凝集试验：单份血清标本活性碳凝集效价1：8，乳胶凝集效价1：2，双份血清效价增高4倍以上更有诊断价值,ELISA：被检血清OD值为阴性对照的2倍,动物试验,分离钩端螺旋体的敏感方法,幼龄豚鼠或金地鼠腹腔接种,疏螺旋体,有310个稀疏而不规则的螺旋，呈波状，运动活泼,莱姆病的主要病原体，主要传播媒介是硬蜱,伯氏疏螺旋体,分类,DNA同源性分析莱姆病菌株,伯氏疏螺旋体：美国和欧洲,伽氏疏螺旋体：欧洲和日本,埃氏疏螺旋体：欧洲和日本,分类尚未统一，一般以,伯氏疏螺旋体作为莱姆病病原体的统称。,生物学特性,形态结构：长10-40um,宽0.1-0.3um，两端稍尖，运动活泼。革兰染色阴性，但不易着色。姬氏或瑞氏染色效果好。,培养特性：营养要求高，微需氧，适宜温度35。生长慢，需培养2-3周才可观察到生长情况。,抵抗力：抵抗力弱，对青霉素、红霉素等敏感。,微生物检验,标本采集：病损皮肤组织、淋巴结抽出液、血液、关节滑膜液、脑脊液、尿液等,标本直接检查,直接显微镜检查：暗视野显微镜观察形态和运动，简便直观但检出率极低,核酸检查：PCR 快速，敏感性高,分离培养：BSK复合培养基 2-3周可观察生长，甚至需培养12周,抗体检测,间接免疫荧光法（IFA）：操作简便实用，但类风湿关节炎及其他螺旋体病可出现假阳性。,ELISA：方便快捷，但全菌体ELISA特异性差，仅用作筛选。,免疫印迹技术：有助于排除ELISA的假阳性。,动物实验,经典方法，但烦琐，有生物危害，一般实验室很少使用。,回归热疏螺旋体,：人类回归热病原体,虱传回归热(流行性回归热):病原体为回归热疏螺旋体，通过体虱传播。,蜱传回归热(地方性回归热):病原体为杜通疏螺旋体等15种，软蜱传播，储存宿主为啮齿类动物。,反复发作的发热与缓解螺旋体外膜蛋白的变异。,取外周血用暗视野显微镜观察；直接涂片染色；培养；动物实验,抗原易自发变异，血清学诊断困难。,奋森疏螺旋体,专性厌氧，常与梭形梭杆菌寄生于人类口腔牙龈部，条件致病菌，奋森咽峡炎、牙龈炎、口颊坏疽、溃疡性口腔炎；革兰染色镜检或直接暗视野观察,密螺旋体,螺旋细密、规则、两端尖，数目多,致病性,苍白螺旋体,苍白亚种 梅毒性传播,地方亚种 地方性梅毒污染餐具,极细亚种 雅司病直接接触皮肤,品他螺旋体 品他病皮肤损伤,梅毒螺旋体,临床意义,梅毒的病原体，人是唯一传染源,传播途径 母婴传播,性传播,输血传播,获得性梅毒，临床上分为三期：初期、中期、晚期,先天性梅毒,微生物学特性,形态与染色,8-14个致密而规则小螺旋，两端尖直，运动活泼,Fontana,镀银染色染成棕褐色,暗视野观察形态和运动方式,培养特性,不能在无活细胞人工培养基中生长繁殖,抵抗力,抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感,，,4,3天死亡,对青霉素，四环素，红霉素，庆大霉素或砷剂敏感,微生物检验,检验程序：图18-5,标本采集,下疳分泌物、皮疹渗出液、淋巴结穿刺液、组织块（制成组织悬液）,标本要及时检查,微生物检验,标本直接检查,直接显微镜检查：暗视野显微镜检查,（适用、期梅毒）,Fontana,镀银染色镜检,直接荧光检测法,暗视野显微镜检查,镀银染色,微生物检验,标本直接检查,核酸检测,采用PCR检测标本中梅毒螺旋体的特异性DNA 片段,体外培养,迄今仍未解决,抗体检测,非密螺旋体抗原试验,多用牛心肌的,心脂质,作为抗原，测定血清中的反应素;可定性和半定量，半定量可用来,评价疗效和判断是否有再感染,等,性病研究实验室（Venereal Disease Research Laboratory,VDRL）玻片试验,快速血浆反应素环状卡片试验（Rapid Plasma Reagin circle card,RPR），可进行半定量，进行疗效评价和判断是否有再感染。,注意：假阳性、假阴性问题,抗体检测,密螺旋体抗原试验,不能区别不同种的密螺旋体及所致疾病,荧光密螺旋体吸收试验,(FTAABS)：具高度特异性和敏感性，适用于早期梅毒的诊断，可持续数年至终身。,梅毒螺旋体荧光抗体双染色试验,(FTA-ABS-DS)：对早期和晚期梅毒均有很高敏感性和特异性，且阳性出现时间早，但技术要求高，费时费钱。,抗梅毒螺旋体抗体的微量血凝分析,(MHA-TP)：最简易的方法，效价在1：80以上可判为阳性。,ELISA：价廉、保存时间久且稳定，是目前梅毒血清学诊断试验的首选方法。,TPPA：用于筛选试验阳性标本的确证试验。,MHA-TP,TPPA,血清学试验的选择,先天梅毒的诊断,支原体,(Mycoplasma),一类,缺细胞壁、形态多样、,能通过除菌滤器,，在无生命培养基中能生长繁殖的,最小,原核细胞型微生物。,分类与命名,支原体目、支原体科(支原体属和脲原体属),对人致病的主要有,肺炎支原体(,M.pneumoniae,),人型支原体(,M.hominis,),生殖器支原体(,M.genitalium,),穿通支原体(,M.penetraus,),溶脲脲原体(,U.urealyticum,),肺炎支原体,(,M.pneumoniae,),临床意义,呼吸道感染病原体，经飞沫传染,间质性肺炎，原发性非典型性肺炎,肺炎支原体是青少年急性呼吸道感染的主要病原体之一，表现为上呼吸道感染综合症，也可引起其他系统的肺外并发症。,流行特点：间歇性，长时期缓慢播散，可持续数月至一年,感染呈全球性分布，平时散在发病，3-5年出现一次地区性流行,微生物学特性,形态结构：短细丝状，长2-5um，近细胞丝状体尖端有一球状的特殊结构。典型的肺炎支原体类似酒瓶状，没有细胞壁，仅有细胞膜。革兰染色阴性，,Giemsa,染色呈淡紫色。,抗原构造：细胞膜中的糖脂抗原和蛋白质抗原。糖脂抗原抗原性强、特异性较差。170k的DPI膜蛋白和43kD的菌体蛋白特异性强。,支原体PI膜蛋白,是其主要型特异性抗原，其抗原性常用生长抑制试验(growth inhibition test,GIT)与代谢抑制试验(metabolism inhibition test,MIT)鉴定。,微生物学特性,培养特性,营养要求高，需加入10-20动物血清，还需添加酵母液、组织液、核酸提取物和辅酶等，形成“荷包蛋”状菌落,与细菌L型生物学性状的区别（表19-1）,生化反应：利用葡萄糖、精氨酸（-）、尿素（-）、吸附红细胞（表19-2）,“荷包蛋”状菌落,抵抗力,支原体耐冷,对热和干燥敏感,对,-,内酰胺类抗生素不敏感,对红霉素、多西环素、螺旋霉素等抗生素敏感,微生物检验,检验程序（图19-3）,标本采集：咽试子、痰、支气管分泌物、鼻咽洗液等；快速接种、转运培养基,标本直接检查,涂片检查：G染色不易着色,电子显微镜观察无细胞壁,核酸检测：PCR检测肺炎支原体DNA,微生物检验,培养与鉴定：,培养基：牛心浸液+20小牛血清+新鲜酵母浸液+美兰、醋酸陀、青霉素,初次培养：液体培养基中增菌；生长后转种固体培养基，观察菌落(致密圆形菌落或油煎蛋样菌落,),生化反应,血清学鉴定：GIT和MIT 将支原体分成若干血清型,抗体检测,ELISA：敏感、特异性高、快速经济。,补体结合试验：常用血清学方法。双份血清效价4倍以上增长或单份血清=1:64-1:128，老年病人阴性不能排除。敏感性和特异性90%左右。检测IgM，初次感染阳性，再次感染常不出现阳性。,间接血凝试验：操作简便，敏感性略高于CF试验，主要检测IgM，特异性尚不理想。,冷凝集试验：冷凝集素是支原体感染后机体产生的一类IgM型自身抗体，非特异试验。效价=1:64为阳性,效价越高或双份血清4倍以上升高，近期感染的可能性越大。,溶脲脲原体,Ureaplasma urealyticum,Uu,非淋病尿道炎患者的尿道分泌物中分离得到,寄居于人泌尿生殖道，,男性尿道、阴茎包皮和女性阴道，,偶可自呼吸道分离出。,临床意义,性传播疾病，亦可通过母婴传播,致,非淋菌性尿道炎（NGU）、男性不育,前列腺炎或附睾炎，阴道炎、宫颈炎，可致流产,致病机制：侵袭酶、毒性产物有关,微生物特性,形态结构:液体培养基中以球形为主，能通过微孔滤膜；没有细胞壁，革兰染色阴性，,Giemsa,染色呈紫蓝色。,培养特性,营养要求高,培养基：牛心浸液+胆固醇+酵母+尿素等,温度：35-37，PH：5.5-6.5,气体环境:95N,2,和5CO,2,很小“荷包蛋”样菌落,水解尿素产氨，不分解葡萄糖和精氨酸,微生物特性,抗原构造,多糖抗原和蛋白质抗原,脲酶抗原种特异性抗原,抵抗力,对渗透作用敏感，对热敏感,对作用细胞壁的抗生素不敏感，对影响胞浆蛋白合成的抗菌药物敏感。,微生物检验,检验程序：图19-5,标本采集：尿液、前列腺液、精液、分泌物、羊水、血液等,直接检查,核酸检测：敏感、稳定可靠、快速简便，将成为临床快速诊断的重要试验手段。,ELISA：可测定血清型别及IgG类型，敏感、特异性强，有早期诊断意义。,免疫斑点试验：敏感、特异性强，快速，不需特殊仪器。,微生物检验,培养与鉴定,增菌：液体培养基(含酚红和尿素),阳性转种新的液体培养基和固体培养基（尿素和MSO,4,）,涂片作G染色、姬娒萨染色和细胞壁染色观察菌体形态，根据形态和生化反应作出初步鉴定，MIT和GIT作进一步鉴定。,抗体检测：意义不大,人型支原体,Mycoplasma hominis,寄居于生殖道，女性多见,性接触传播,形态结构与溶脲脲原体相似；固体培养基上呈典型“油煎蛋状”菌落；分解精氨酸，不分解尿素和葡萄糖。,四环素与林可霉素敏感,微生物检验与溶脲脲原体相似,穿通支原体M.penetrans,临床意义,Mpe感染可能是爱滋病的辅助致病因素,生物学特性,杆状或长烧瓶状，一端为尖形结构,营养要求高，改良SP-4培养基,荷包蛋样菌落,发酵葡萄糖，水解精氨酸，不分解尿素,对红霉素、四环素、林可霉素敏感,微生物检验,标本采集,AIDS患者或HIV感染者,咽拭子、血清、尿液、组织块,分离与鉴定,分离培养：难度很大,生化反应：葡萄糖（+），精氨酸（+），尿素（-）,MIT：Mpe分型,PCR:灵敏、特异、快速,抗体检测:,ELISA,小结,螺旋体,钩端螺旋体,疏螺旋体,密螺旋体属,支原体,肺炎支原体,解脲脲原体,人型支原体,穿通支原体,