组织化学染色.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,特殊染色在临床病理学中应用,第1页,染色意义和目标,用染料对组织切片进行处理，使组织中不一样成份被染上对应颜色，产生不一样折射率，以利于光镜观察和分析。病理染色属于生物性染色范围。,第2页,应用一些能与组织细胞化学成份特异性结合显色剂，显示组织或细胞正常结构或病理过程中出现异常物质、病变及病原体等，称特殊染色（,Special staining,）。,特殊染色（,special staining,）,第3页,染料和染色原理,一,、染料特点：,组织病理学染料是生物学染色剂,对所染组织成份含有亲和力,染色剂中同时具备发色团和助色团才含有染色功效,发色团是使染料显色化学团（色原），一个染料由一个或多个发色团，染料颜色取决于发色团多少和强弱。,助色团指使色原产生电离成为盐类，对被染物产生亲和力原子团,第4页,染料和染色原理,二,、染料分类,染料起源分类：天然和合成染料,化学反应分类：碱性染料、酸性染料、中性染料,用途分类：,细胞核染料：苏木素，核固红，结晶紫等,细胞质染料：伊红，酸性复红，苦味酸等,脂肪染料：油红,O,，苏丹,III,，苏丹,IV,纤维结缔组织染料：苦味酸，亮绿等,第5页,染料和染色原理,三,、染料原理,物理机制：,毛细管渗透作用：染色剂沿组织间微孔渗透到组织中。,吸收或溶解作用：组织吸收或溶解染料而着色，如脂肪染色,吸附作用：染料色素粒子浸润组织中，因分子引力，色素粒子被吸附而染色,第6页,比如脂肪染色,:,苏丹类染色剂在脂质中溶解度酒精中溶解度,溶解于酒精苏丹类染色剂与组织中脂质接触时，染色剂就从溶液中“转移”到脂质中，从而使脂质着色,。,第7页,染料和染色原理,三,、染料原理,化学机制：,组织和细胞中含有碱性和酸性物质，分别与染料中阳离子和阴离子结合。,如,HE,染色：细胞核主要由核酸组成，与碱性染料,-,苏木素结合，而胞浆主要由碱性物质组成，与酸性染料,-,伊红结合。,第8页,普通染色：又称常规染色，即指,HE,染色（,haematoxylin and eosin HE,）,特殊染色：除,HE,以外全部染色，显示特定组织结构和成份。,单一染色：用一个染料进行染色，如甲苯胺蓝染幽门螺杆菌,多色染色：用两种以上染液染色方法，如三色染色,对比染色：又称复染或衬染，先将某一成份或结构染色后，再用另一个染料染其它成份，如苏木素衬染细胞核,染色惯用术语,第9页,进行性染色：渐进性染色，采取低浓度染液，使组织成份着色自浅入深，直到抵达适当强度，,退行性染色：又称后退性染色，先使组织着色过分，再用一些溶液脱去多出染液，抵达适当染色强度,媒染剂：含有促进染色能力，对染料和组织都有亲和力并与染料和组织结合在一起试剂。如硫酸铝钾等,染色惯用术语,第10页,促染剂：促使染料着色，增强染色能力，但本身不参加染色反应，如乙酸,异染性染色：组织经过盐基性染料染色后，出现与染料不一样颜色,分化：指用某种溶液选择性脱去过深着色，并使不应着色组织细胞成份脱色过程，,HE,染色时盐酸酒精分化,蓝化作用（返蓝）：苏木素在酸性条件下呈红色，碱性条件下呈蓝色，,HE,染色时在酸分化后，再用碱性水使核变蓝，称蓝化,染色惯用术语,第11页,按照染色方法分类,普通方法分类：常规染色，特殊染色等,按主要组织和细胞成份分类：结缔组织染色，肌组织染色，神经组织染色,按染色对象种类分类：切片染色法，组织块染色法，大致标本染色法,染色方法分类,第12页,按创造者姓名命名：如,Van.Gieson,（,VG,）染色,按全部染料分类：如苏丹,IV,染色，锇酸染色,按所染组织分类：如网状纤维染色,其它分类：,染色方法命名,第13页,选择适当组织处理方法：包含固定液和切片选择，如脂肪和酶类染色需冰冻切片,染色液使用期和保留方式,染色液浓度和,pH,值,染色时间控制,染色前切片预处理：如脱甲醛色素，脱汞盐固定液汞结晶等,染色中易出现问题和对策,第14页,注意特染应用范围，如某种病变应用什么方法染色才能到达目标，普通依据,HE,切片所见，选择适当特染方法。,必须掌握各种特殊染色结果，防止造成错误结论或严重误诊，如在网染时把胶元纤维误认为网状纤维。,应做阳性切片作对照，确保染色结果可靠性。,染色所用器皿都必须清洗。,染色中易出现问题和对策,第15页,惯用染色方法和应用,第16页,结缔组织由细胞和细胞间骨架成份组成，分为无定形间质（如硫酸盐和非硫酸盐黏多糖）和定形或纤维型间质（如胶原纤维，弹力纤维。网状纤维）。各种纤维成份识别有利于病理学诊疗和判别诊疗。,结缔组织染色,第17页,网状纤维特征,网状纤维是组成组织网状支架,广泛分布于实质器官内，其中最丰富区域是肝脏、脾脏、淋巴结、骨髓、基膜、血管等,形态学上为交织成网纤细纤维,化学成份为网状蛋白，一个特殊胶原蛋白，抗酸,病理状态下可转化为胶原纤维,含有嗜银性，又称嗜银纤维,HE,染色着色淡，特殊染色可显示,结缔组织染色,网状纤维染色,第18页,网状纤维染色原理,网状纤维染色方法很多，但基本原理相同，即经过氧化剂氧化使网状纤维对银离子含有选择性亲和能力（嗜银性），并在媒染剂作用下网状纤维吸附二氨合银离子，在经甲醛将其还原为黑色金属银而显示出网状纤维。,结缔组织染色,网状纤维染色,第19页,惯用网状纤维染色方法,Gomori,染色法,结果：网状纤维呈黑色，胶原纤维呈黄色或黄褐色，细胞核呈灰黑色,。,特点：此法简单可靠，染色时间短，惯用于活检病理组织检验。,结缔组织染色,网状纤维染色,第20页,网状纤维染色应用,肿瘤诊疗和判别诊疗：,癌和肉瘤判别：癌巢周围存在网状纤维；肉瘤中网状纤维围绕每个细胞,尤文氏瘤和淋巴瘤：尤文氏瘤无网状纤维，淋巴瘤内存在大量网状纤维,脑膜瘤和胶质瘤：脑膜瘤有网状纤维。胶质瘤少,结缔组织染色,网状纤维染色,第21页,网状纤维染色应用,一些梭形细胞肿瘤诊疗：已被免疫组化取代，极少用,平滑肌瘤瘤细胞间可见大量平行分布网状纤维；,纤维肉瘤则见大量网状纤维密集包绕细胞；,滑膜肉瘤梭形细胞产生网状纤维少。,结缔组织染色,网状纤维染色,第22页,网状纤维染色应用,判断组织坏死性质和预测坏死后结局：,、凝固性坏死：用网染能够观察到早期凝固性坏死处网状纤维支架还保留特点。,、肝炎坏死范围和程度：如网状支架塌陷，则演变成肝硬化。,结缔组织染色,网状纤维染色,第23页,网状纤维染色应用,骨髓网状纤维染色：,结缔组织染色,网状纤维染色,第24页,580,例骨髓病变网状纤维染色结果,第25页,胶原纤维是结缔组织中含量最多一个，皮肤，肌腱，硬膜等处丰富,纤维母细胞合成，化学成份为胶原蛋白,不溶于水，在酸性溶液中膨胀,HE,染色呈红色，易识别,出现质和量改变时，与疾病状态相关,结缔组织染色,胶原纤维染色,第26页,染色原理：,胶原纤维含碱性氨基酸，能够与酸性染料结合，酸性染料含有不一样程度扩散性，扩散性高小分子轻易进入结构致密组织（肌纤维）间隙，扩散性低大分子只可能进入结构疏松组织（胶原纤维）间隙，从而产生不一样染色。,结缔组织染色,胶原纤维染色,第27页,Van Gieson,（,V.G,）染色：,结果：胶原纤维鲜红色；肌纤维：黄色；细胞核：蓝黑色或灰色,Masson,三色染色：,结果：胶原纤维绿色或蓝色；肌纤维：红色；细胞核：灰蓝色或灰黑色,结缔组织染色,胶原纤维染色,第28页,应用：,显示组织，器官损伤或炎症修复与纤维化程度，如早期肝硬化,显示与判断心肌坏死后被纤维组织取代区域和病变新旧程度：,HE,染色心肌与胶原呈红色，胶原染色则颜色不一样；胶原染色新形成胶原多呈细丝状，成熟后则粗大，不规则波浪状,区分透明变性和淀粉样变性,判别心肌纤维化和心内膜弹力纤维增生症,肿瘤判别诊疗：纤维源性肿瘤诊疗,结缔组织染色,胶原纤维染色,第29页,第30页,第31页,染色方法和结果：,Verhoeff,铁苏木素染色,结果：弹力纤维呈黑色，细胞核蓝色，胶原纤维呈红色,结缔组织染色,弹力纤维染色,第32页,应用：,（,1,）显示皮肤组织中弹刀纤维改变,：,如硬皮病，皮肤松解症等,（,2,）显示与判断心血管疾病：,判别心内膜弹力纤维症与心内膜心肌纤维化,动脉粥样硬化时粥样斑块低部弹力板情况,高血压小动脉改变,老年性动脉病变，动脉弹力板变性，增厚,（,3,）观察疾病时弹力板是否破坏,结缔组织染色,弹力纤维染色,第33页,第34页,糖类物质除参加细胞代谢外，现已证实还参加各种细胞功效活动，包含蛋白折叠，细胞粘附，酶活动及免疫识别等，糖生物学已成为一门复杂学科。,糖类可分为单糖，双糖，粘多糖，粘蛋白，粘脂等，病理学中最有意义是糖原和黏多糖。,因糖原极不稳定，易自溶，所以做糖原分析组织应在取材后立刻固定。糖原是水溶性，提议最好使用酒精福尔马林。,糖类物质（碳水化合物）染色,第35页,染色原理：,过碘酸是一个氧化剂，它能氧化糖类及相关物质中,1,2-,乙二醇基使之变为二醛，醛与,Schiff,试剂结合形成亮红色终产物,-,碱性品红。形成颜色深浅取决于组织内反应乙二醇浓度。,结果：,糖原和其它,PAS,阳性物质呈红色，细胞核呈蓝色,糖类物质染色,1,、,PAS,染色,（,Periodic Acid Schiff PAS,）,第36页,应用：,肿瘤诊疗和判别诊疗,基底膜厚度判断（肾病诊疗）,基底膜完整性,病原菌感染诊疗,糖类物质染色,1,、,PAS,染色,第37页,糖类物质染色,1,、,PAS,染色,PAS,反应阳性物质,第38页,染色原理：,染色机制不清，可能是阿辛蓝中异硫脲基经过静电与组织内多聚阴离子相连。,结果：,酸性粘蛋白（硫粘蛋白和唾液酸蛋白）：蓝色,蛋白多糖和透明质酸：蓝色,细胞核：红色,糖类物质染色,2,、,AB,染色,第39页,应用,用于普通黏液性病变观察。,在肿瘤诊疗与研究中：,用于肿瘤类型判别，如黏液腺癌与未分化癌判别，黏液表皮样癌与鳞癌判别；,黏液染色还能够证实癌细胞是否浸润间质；,观察胃黏膜腺体肠上皮化生等,糖类物质染色,2,、,AB,染色,第40页,组织中粘液物质分类,糖类物质染色,2,、,AB,染色,第41页,中性黏多糖：主要存在于胃黏膜表面上皮、幽门腺、十二指肠腺等处；,酸性黏多糖：其基质成份可分为硫酸性（,HID,染色呈棕黑色）和非硫酸性（,AB,染色呈蓝绿色）两种形式存在，主要分布于消化道、呼吸道及其它部位黏液腺分泌物中；,黏蛋白：是由糖和蛋白质结合而组成，故又称糖蛋白，见于各种组织上皮和腺体导管分泌物中。,糖类物质染色,第42页,AB,与,PAS,共同染色，亦称套染，对于显示和区分酸性黏液物质与中性黏液物质都有很好效果。,结果：,酸性黏液物质呈蓝色，中性黏液物质呈红色，混合性黏液物质呈紫红色；细胞核呈浅蓝色。,糖类物质染色,2,、,AB-PAS,染色,第43页,脂类物质染色,染色方法和结果：,苏丹,染色法：脂肪染橙红色，细胞核淡蓝色（切片染色后不能长久保留,),。,Lillie,油红,O,染色法：脂类物质呈鲜红色或橘红色，细胞核呈淡蓝色。,以上两种染色原理：,是染料在脂质中溶解度大于所用溶液溶解度，染料被移入脂质中。均需要冰冻切片，甘油或甘油明胶封固。,锇酸染色：锇酸与脂肪形成不溶于有机质氢氧化锇；黑色脂肪呈黑色，类脂质颗粒呈褐色。应用组织块浸染。,第44页,脂类物质染色,应用：,证实和区分脂肪变性。,显示病变脂质从容，如动脉粥样硬化斑块内胆固醇沉积；显示脂肪栓塞；显示先天性类脂质沉积病，如戈谢病（,Gaucher,disease,），尼曼皮克病（,Niemann-Pick disease,）等。,脂肪源性肿瘤诊疗和判别,第45页,淀粉样物染色,淀粉样物质（,Amyloid,）是一个细胞外无定形，嗜酸性物质，刚果红染色后在偏正光镜下呈“苹果绿”双折射，含有独特原纤维超微结构，大多数由,B-,折叠层构象蛋白质组成。,淀粉样物沉积与很多疾病相关，不一样疾病所组成淀粉样物蛋白质不一样。如骨髓瘤相关淀粉样变为免疫球蛋白轻链；,Alzheimer,病为淀粉样蛋白,B,前体。,第46页,染色方法和结果：,刚果红染色：淀粉样物，弹力纤维呈红色，核呈蓝色,甲基紫染色：淀粉样物呈紫红色，细胞核和基质呈蓝色,染色原理：,机制不清楚,淀粉样物染色,第47页,应用：,肿瘤诊疗与判别：如甲状腺髓样癌、胰岛细胞瘤、肺小细胞癌可 出现淀粉样物质，染色阳性对诊疗提供可靠依据。,识别器官淀粉样变性：如舌、喉、肝脾、肠道及皮肤等,淀粉样物染色,第48页,微生物染色,微生物主要包含：,病毒,细菌,真菌,原虫,寄生虫,第49页,微生物染色,细菌染色,Gram,碱性复红结晶紫染色：,应用：识别,Gram,菌感染,结果：,Gram,阳性菌呈蓝色，阴性菌和细胞核呈红色,原理：,Gram,阳性菌含核糖核酸镁盐,-,蛋白质复合物多，摄取结晶紫多且较牢靠，呈蓝色或紫色，而,Gram,阴性菌则较少，易与碱性复红结合呈红色,第50页,微生物染色,细菌染色,抗酸染色（,Ziehl-Neelsen,染色）：,应用：识别分枝杆菌，如结核杆菌和其它分枝杆菌,结果：分枝杆菌呈红色，背景淡蓝色,原理：分枝杆菌细胞壁含大量脂质，主要成份是分枝菌酸，它含有抗酸性，可与染料中石碳酸复红结合，抵抗盐酸乙醇脱色。,第51页,微生物染色,细菌染色,其它细菌染色,Wathin-Starry,染色,显示螺旋体，菌体呈黑色，背景呈金黄色,改良,Steiner,染色：,螺旋体，猫爪病病原体，非放线菌呈深棕黑色，背景呈亮黄色至金黄色,第52页,微生物染色,真菌染色,真菌（,fungus,）种类较多，常见致病菌如毛霉菌、曲菌、隐球菌、放线菌和白色念珠菌等。,真菌基本结组成份是含较多黏多糖和蛋白质。,常形成肉芽肿和坏死,培养是最好方法,第53页,微生物染色,真菌染色,Grocott,六胺银染色法,结果：真菌孢子和菌丝呈黑褐色，细胞核呈红色，背景呈淡绿色。,原理：铬酸氧化真菌内多糖化合物，醛基暴露，醛基将六胺银中银还有呈黑色金属银,过碘酸,-Schiff,（,PAS,）反应法：,结果：真菌呈紫红色，红细胞呈淡黄色,。,原理：,第54页,色素和矿物质,生物体内色素可分为：,1,）内源性色素：,血源性色素：含铁血黄素，血红素，卟啉等,非血源性色素,内源性矿物质,2,）人工色素：组织成份和一些化学物质之间相互作用后产生物质沉积，如福尔马林色素,3,）外源性色素和矿物质：外源性物质进入人体,第55页,色素和矿物质染色,铁染色：,组织内沉积铁质主要以含铁血黄素方式存在，,HE,染色下呈黄色至褐色颗粒，以氢氧化铁形式存在于蛋白质结构中，含铁血黄素中铁可分为三价和二价铁，可用不一样方式显示。,第56页,色素和矿物质染色,Perls blue,（普鲁士蓝）染色：,Perls blue,（普鲁士蓝）反应显示三价铁,原理：盐酸与含铁血黄素中三价铁反应形成三氯化铁，三氯化铁与亚铁氰化钾反应生成一个稳定化合物,蓝色亚铁氰化铁（普鲁士蓝）。,结果：含铁血黄素呈蓝色，其它组织浅红色。,第57页,色素和矿物质染色,Turnbull-Sehmaltzer,铁染色：,显示二价铁和三价铁,原理：组织中同时含有二价和三价铁，经硫化氨处理后三价铁转变为二价铁，原来存在二价铁不变，与,Turnbull,反应呈蓝色，若不经硫化氨处理，直接与,turnbull,反应，则只显示二价铁,结果：含铁血黄素呈蓝色，其它组织浅红色。,第58页,色素和矿物质染色,黑色素（,Melanin,）在黑色素母细胞内合成，黑色素母细胞起源干神经脊，在胚胎发育过程中，由神经脊移行到皮肤、眼和中枢神经系统。,皮肤表皮、毛囊、眼虹膜、睫状体、脉络膜，脑软脑膜、黑质、蓝斑、迷走背核，以及交感神经节和脊神经节节细胞内均可有黑色素从容。,第59页,Masson-Fontana,银染色法,原理：黑色素含有还原性，嗜银，将染液中银还原后使黑色素着色,结果：黑色素及嗜银细胞颗粒呈黑色。,色素和矿物质染色,第60页,应用,:,黑色素瘤诊疗和判别,含铁血黄素、脂褐素及非色素性黑色素瘤和假性黑变瘤色素相判别。,色素和矿物质染色,第61页,脱黑色素染色：,氯化钾乙醇盐酸法：,高锰酸钾草酸法：,通常制作,3,张连续石蜡切片，一张染,HE,，一张作黑色素染色，一张作脱色素。,结果：细胞内黑色素完全消失。,应用：判别组织内颗粒是否为黑色素颗粒。,色素和矿物质染色,第62页,色素与矿物质,其它色素和矿物质染色,：,三氯醋酸染色法显示胆色素（绿色）,Von Kossa,法显示钙盐（黑色）,红氨酸铜染色（绿色或黄绿色）,PAS,，,Gomori,等显示脂褐素,第63页,DNA,染色法,DNA,惯用酸水解,-,无色品红染法（,Feulgen,染色法）显示，经过酸水解，打开,DNA,嘌呤基,-,糖苷，释放出反应型醛基，游离醛基与,Schiff,试剂结合，形成紫红色复合物，从而显示,DNA,。,第64页,DNA,染色,应用：,用于肿瘤诊疗和研究，测定,DNA,含量，有利于判断肿瘤良恶性及分化程度，并预计肿瘤患者预后。,第65页,骨组织技术,骨组织主要由矿物质，细胞和细胞外基质组成,骨矿物质主要是钙和磷，与氢氧根离子结合形成羟基磷灰石结晶,矿物质是维持骨硬度主要原因,第66页,骨脱钙,利用化学制剂将骨组织中钙盐除去过程称脱钙,脱钙剂主要有两种：酸性脱钙剂和螯合剂,酸性脱钙剂包含强酸：盐酸，硝酸；弱酸：甲酸，乙酸，苦味酸,螯合剂,EDTA,，在,pH77.4,时能够与钙结合,酸性脱钙剂脱钙快速，但不利于抗原保留,螯合剂脱钙慢，可保留抗原,应注意观察脱钙是否理想，过分脱钙可造成组织破坏,脱钙结束后应流水冲洗，以除去组织表明酸性物质,第67页,其它染色,神经病理特殊染色,酶组织化学,神经内分泌颗粒，细胞内颗粒染色,第68页,