二烯丙基二硫通过LIMK1-Cofilin1通路抑制人胃癌细胞侵袭与上皮-间质转化.pdf

3908马艳华，等二烯丙基二硫通过 LIMK1-Cofilinl 通路抑制人胃癌细胞侵袭与上皮-间质转化二烯丙基二硫通过 LIMK1-Cofilinl 通路抑制人胃癌细胞侵袭与上皮-间质转化马艳华1-2,夏红,刘芳,苏坚3,向姝霖，苏琦.3南华大学肿瘤研究所，湖南衡阳42 10 0 1；海南省三亚中心医院肿瘤科，海南三亚57 2 0 0 9；3南华大学附属第二医院病理科,湖南省胃癌防治临床研究中心,湖南衡阳42 10 0 1【摘要】目的：探讨二烯丙基二硫（DADS）对人胃癌MGC803细胞侵袭与上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT)的影响及其机制。方法：体内外实验分为MGC803细胞组与DADS处理组。MTT、划痕实验与侵袭实验检测DADS对增殖、迁移与侵袭的影响。Western Blot检测 LIMK1-Cofilinl通路与EMT相关蛋白表达。相差显微镜观察MCC803细胞形态改变。裸鼠实验检测DADS对移植瘤的作用。结果：MTT显示,DADS可呈时间依赖性抑制MGC803细胞增殖（P0.05）。划痕实验显示,DADS组细胞迁移距离（59.91.9）m较MCC803组（12 7.12.0）m明显缩短（P0.01）。侵袭实验显示，DADS组穿膜细胞（30.0 2.6）个较MGC803组（48.32.5）个明显减少（P0.01）。W e s t e r n Bl o t 显示，DADS 作用6 h、12 h、2 4 h、48 h 后,MCC803 细胞 LIMK1、p-LIM K 1 与 p-Cofilinl(P0.001),Vimentin(P0.001)与MMP-9(P0.001)分别呈时间依赖性下调,而E-cadherin(P=0.001)与TIMP-3明显上调（P 0.0 0 1）。相差显微镜显示,DADS处理后,纤维母细胞样细胞减少,异型性显著降低。裸鼠实验显示，DADS组移植瘤较MGC803细胞组生长缓慢（P0.05）,D A D S组移植瘤重量较MGC803细胞组降低,抑瘤率为6 0.19%（P0.001）,K i-6 7、V i m e n t i n、Sn a i l和CD34阳性表达均降低,E-cadherin表达增加。结论：DADS可通过LIMK1-Cofilinl通路体内外抑制MCC803细胞侵袭与EMT。【关键词】二烯丙基二硫；人胃癌MGC803细胞;LIMK1-Cofilinl通路;；增殖；迁移；侵袭；上皮间质转化【中图分类号】R735.2【文章编号】16 7 2-4992-(2 0 2 3)2 1-390 8-0 6Diallyl disulfide inhibits invasion and epithelial-mesenchymal transition in human gas-tric cancer cells through LIMK1-Cofilin1 pathwayMA Yanhua2,XIA Hong,LIU Fang,SU Jian3,XIANG Shulin,SU Qif.Cancer Research Institute,University of South China,Hunan Hengyang 421001,China;Department of Oncology,Sanya Central Hospi-tal,Hainan Sanya 572009,China;Hunan Clinical Research Center for Gastric Cancer Prevention and Treatment,Department of Patholo-gy,the Second Affiliated Hospital,University of South China,Hunan Hengyang 421001,China.Abstract)Objective:To investigate the effects of dillyl disulfide(DADS)on invasion and epithelial-mesenchy-mal transformation(EMT)of human gastric cancer MGC803 cells and its mechanism.Methods:In vitro and in vivoexperiments were divided into MGC803 cell group and DADS treatment group.MTT,scratch test and invasion testwere used to determine the effects of DADS on proliferation,migration and invasion.The expression of EMT-relatedproteins in LIMK1-Cofilinl pathway was detected by Western Blot.The morphological changes of MGC803 cells wereobserved by phase contrast microscopy.The effects of DADS on tumor transplantation were tested in nude mice.Results:MTT showed that DADS could inhibit MGC803 cell proliferation in a time-dependent manner(P0.05).Scratch test showed that the cell migration distance of DADS group was(59.9 1.9)m shorter than that ofMGC803 group(127.1 2.0)m(P 0.01).Invasion test showed that DADS group had(30.0 2.6)transmem-brane cells significantly decreased compared with MGC803 group(48.3 2.5)(P 0.01).Western Blot showedthat after DADS treatment for 6 h,12 h,24 h and 48 h,LIMK1,p-LIMK1 and p-Cofilin1(P0.001),Vimentin(P0.001)and MMP-9(P0.001)were down-regulated in a time-dependent manner,while E-cadherin(P=0.001)and TIMP-3 were significantly up-regulated(P0.001)in MGC803 cells respectively.Contrast microscopy【收稿日期】2023 05-23【基金项目】国家自然科学基金（编号：8 197 3532,8 137 40 13,8 110 2 8 54）【作者简介】马艳华（197 5一），女，湖南怀化人，硕士，主治医师，主要从事肿瘤防治分子机制的研究。Ema i l：ma y a n h u a 7 510 0 7 16 3.c o m【通信作者】苏琦（1945一），男，浙江宁波人，教授，博士生导师，主要从事肿瘤发生与防治的分子机制研究。E-mail：s u q i 1945 16 3.c o m【文献标识码】A【修回日期】2 0 2 3-0 6-2 8D01I:10.3969/j.issn.1672-4992.2023.21.002现代肿瘤医学2 0 2 3年11月第31卷第2 1期showed that after DADS treatment,the fibroblast-like cells decreased and the atypia decreased significantly.In nudemice,the tumor growth of DADS group was slower than MGC803 cell group(P 0.05),the tumor weight of DADSgroup was lower than MGC803 cell group,the tumor inhibition rate was 60.19%(P0.001),and the positive ex-pression of Ki-67,Vimentin,Snail and CD34 decreased,and the expression of E-cadherin was increased.Conclu-sion:DADS can inhibit MGC803 cell invasion and EMT through LIMKI-Cofilinl pathway in vitro and in vivo.Key wordsdiallyl disulfide,human gastric cancer MGC803 cells,LIMK1-Cofilinl pathway,proliferation,migra-tion,invasion,epithelial-mesenchymal transitionModern Oncology 2023,31(21):3908-3913胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,全球每年超过10 0 万人实验分组同上，取对数生长期细胞，接种于平底培养板，新诊断为胃癌1。约44%的胃癌发生在中国，患者就诊时细胞贴壁8 h后更换为RPMI1640完全培养基，加MTT溶大多已是晚期，手术和化疗效果较差并且存在抗药性，导致5液,培养4h后,吸弃培养基,加 DMSO溶液,震荡10 min,酶年生存率低2 。因此,探讨胃癌侵袭转移机制，寻找治疗靶联免疫检测仪ODs70mm处测量各孔吸光值，按公式计算抑制点与研发有效药物非常关键。率：抑制率=（1-实验组ODs7o值/对照组ODs7o）10 0%。上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，1.2.3划痕实验EMT)是肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力的关键,阻止EMT发实验分组同上，0.2 5%胰蛋白酶-0.0 2%EDTA消化细生成为抑制肿瘤转移的治疗策略3。LIM domain kinase1胞,将0.8 10 个细胞接种细胞培养板,RPMI1640细胞培(LIMK1)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,通过磷酸化Cofilin促养基中培养,至形成细胞单层,tip头划痕后，常规培养，倒置进肿瘤细胞侵袭与EMT4-5。大蒜的有效成分二烯丙基二显微镜下观察、测量、记录划痕区相对距离。硫（diallyldisulfide,DADS）可通过多种途径抑制肿瘤的增殖、1.2.4侵袭实验迁移侵袭与EMT6-7。蛋白质组学技术鉴定DADS 作用人实验分组同上,将基质胶与RPMI1640培养基的混合液胃癌MGC803 细胞的潜在靶点,发现LIMK1下调8 。并证明平铺到Transwell小室上层，将小室放人2 4孔板内，培养3hDADS可通过Racl-Pak1/Rock1通路抑制MGC803细胞迁后凝胶形成，2 4h后夹出小室PBS清洗3次，擦去小室上表移与侵袭9。而 LIMK1-Cofilinl 作为 Racl-Pakl/Rockl面细胞，多聚甲醛固定，结晶紫染色,PBS清洗3次，倒置显的下游10 ,本文进一步探讨 DADS 是否通过 LIMK1-Cofi-微镜下观察，随机取6 个视野，拍照后计细胞数，取平均数为lin1通路抑制MGC803细胞EMT。实验结果。1材料与方法1.2.5Western Blot1.1 材料与试剂实验分组同上，收集细胞，提取上述各组细胞总蛋白，DADS（美国Fluka公司）,DADS与Tween80以1:2 的比BCA法测定蛋白浓度，每组取等量样本进行SDS-PAGE凝例充分溶解后，加人体积分数为0.90 的生理盐水稀释10 0胶电泳，电泳后转膜，封闭1h,加一抗（根据各抗体使用说明倍,震荡混匀，作为母液保存于-2 0 冰箱中，临用时将此书,用TBST稀释各抗体:LIMK1、p-LI M K 1、C o f i li n l、p-C o f i-母液稀释至所需浓度。抗体：Cofilinl（M 1）、p Co f i l i n llinl、E-c a d h e r i n、V i m e n t i n、M M P-9、T I M P3稀释比为1:50 0;（S3）、LIM K 1（Q 491）与p-LIMK1（T 50 8）（美国Abz00m公-actin 1:4 000)。4 过夜,用 TBST按 1:3 0 0 0 比例稀释司）;E-cadherin（a b 40 7 7 2）、V i m e n t i n（a b 92 547）、M M P-9二抗，加二抗孵育1h,洗膜，采用ECL发光法，最后X片曝(ab38898）,T I M P3（a b 3918 4）、Sn a i l（a b 53519）,K i -6 7光、显影、定影。ImageJ1.49V软件测定蛋白的灰度值,计算（a b 6 6 155）、CD 34（a b 8 12 8 9）与-actin(ab8227)（英国 Ab-蛋白相对表达量。cam公司）。BCA蛋白定量试剂盒（美国Pierce公司）、ECL1.2.6裸鼠成瘤实验发光检测试剂盒（美国SantaCruz公司）、RPMI16 40 培养向学校医学伦理委员会递交审查表批准后，从北京维通基（美国Hyclone公司）、胎牛血清（上海ExCellBiology公利华实验动物技术有限公司生产许可证号SCXK（京）2 0 12司）、胰蛋白酶消化液（碧云天生物技术研究所）、SP试剂盒-0001购买10 只BALB/c-Nude裸鼠,4周龄雄性,重量为（福州迈新公司）、羊抗兔二抗（北京康维世纪公司）。可调1316g。实验分组同上,每组5只,在学校动物实验部裸鼠式微量加样器与冷冻型台式高速离心机（德国Eppendorf公SPF标准实验室喂养,保证实验的安全性与可靠性。将各组司）；光学显微镜与倒置光学显微镜（日本Olympus公司）；超对数生长期的细胞110 /mL分别取0.2 mL 细胞悬液接种低温冰箱（日本Sanyo公司）；紫外分光光度仪（美国Perklin于裸鼠腋下。每周测量移植瘤长径（a)和短径(b）,计算肿Elmer公司）;摇床与蛋白电泳系统（美国BIO-RAD公司）；瘤体积(V),V=（a b)/2,以每组裸鼠移植瘤体积的平均培养箱（COLD-SIM公司）;超纯水器（KertoneLtd公司）。值,绘制生长曲线。实验7 周后麻醉处死裸鼠，称移植瘤重1.2实验方法量,瘤重抑瘤率=（1实验组瘤重/对照组瘤重）10 0%。1.2.1细胞培养1.2.7免疫组化检测人胃癌MGC803细胞由本实验室保存，于含10%小牛血采用SP免疫组化法,移植瘤组织切片二甲苯中脱蜡,水清的RPMI1640培养基中,37,5%CO2、饱和湿度的培养化,抗原修复,H,O,阻断内源性过氧化物酶活性,滴加血清箱内传代培养。实验分为MGC803细胞组与DADS处理组，到切片上，一抗(Snail、K i-6 7、V i m e n t i n、E-c a d h e r i n 与CD34倒置相差显微镜观察细胞形态学变化。稀释比同WesternBlot)室温6 0 min,4过夜,PBS洗3min1.2.2MTT 检测3,HRP酶标二抗覆盖切片,PBS洗3min3,DAB显色，自MODERN ONCOLOGY,Nov.2023,VOL.31,No.213909.3910来水冲洗，苏木素复染后脱水、透明、封固、镜检。1.3统计学处理采用SPSS13.0软件进行统计学分析。符合正态分布用均值标准差表示，各组比较采用t检验,单因素方差分析和Tukey事后检验来评估组间差异的显著性。2结果2.1 MTT、划痕实验与侵袭检测 DADS 对 MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响MTT结果显示（图1A），根据文献10 采用30 mg/LDADS 处理2 4 h、48 h、7 2 h 与9 6 h 后,DADS 对 MGC803细胞MGC8033.0r+MGC8032.5F-DADS12.01.51.0F0.5F024487296(h)CMGC803图1DADS对MGC803细胞增殖与迁移侵袭的影响A:MTT检测;B：划痕实验,与MGC803细胞组比较，*P0.01;C:侵袭实验（结晶紫染色40 0）,与MGC803细胞组比较，*P0.01。Fig.1Effects of DADS on proliferation,migration and invasion of MGC803 cellsA:MTT detection.B:Scratch test,compared with MGC803 cell group,*P0.01.C:Invasion experiment(crystal violet staining 400),comparedwith MGC803 cell group,*P0.01.2.2DADS对 MGC803细胞LIMK1-Cofilinl通路的影响结果显示,30 mg/L DADS 作用6 h、12 h、2 4 h、48 h 后,多组间方差分析结果发现,LIMK1(F=3 169,P0.001)与p-LIMK1蛋白表达(F=2675,P0.001)分别呈时间依赖性下降（图2 A)。Co f i l i n l 蛋白无明显改变(F=2.4,P=0.1192)，而p-Cofilinl呈时间依赖性下调（F=2915,P0.001)（图2B）。提示DADS 可通过下调LIMK1与 pLI M K 1 以及Cofilinl 磷酸化,抑制 LIMK1-Cofilin1 通路。2.3DADS对MGC803细胞EMT的影响相差显微镜显示，MGC803细胞大小不一，大部分呈长梭形纤维母细胞样肿瘤干细胞,异型性明显。30 mgL-1DADS处理后,细胞大小较一致,呈圆形或椭圆形,纤维母细胞样肿瘤干细胞明显减少,异型性显著降低（图3A）。表明DADS在形态学可诱导MGC803细胞从间质样细胞向上皮细胞转化。图3B-C显示,DADS作用12 h、2 4h、48 h 后，DADS可分别呈时间依赖性下调MGC803细胞Vimentin（F=38.68,P0.001)与上调E-cadherin 表达(F=13.8,P=0.001）。并且,DADS作用12 h、2 4h、48 h 后,DADS可分别呈时间依赖性下调MMP-9（F=2 0 6 7,P 0.0 0 1）和上调TIMP-3表达(F=3958,P0.001）。表明DADS可体外抑制MGC803细胞EMT。2.4DADS对MGC803细胞裸鼠移植瘤的影响结果显示,随着时间的延长,MGC803组移植瘤体积逐渐增大,第2 周与3周时,移植瘤体积明显增大(P0.01）,第4周到7 周增大更为显著（P0.001）,而第2 周与3周时，马艳华，等A二烯丙基二硫通过LIMK1-Cofilinl通路抑制人胃癌细胞侵袭与上皮-间质转化增殖活性(0.8 40.0 7)%、（0.6 6 0.0 2）%、（0.39 0.01)%与(0.2 8 0.0 5)%分别较MGC803细胞（1.2 30.13)%、(1.9 50.0 4)%、(2.39 0.15)%与(2.58 0.02)%明显降低(P0.05）。图1B显示,各组细胞在0 h时划痕距离大致相同,2 4h后,DADS组细胞迁移距离（59.91.9)m较对照组（12 7.12.0）m明显缩短（P0.01）。图1C显示,DADS组侵袭细胞（30.0 2.6）个较MCC803组（48.32.5）个明显减少（P0.01）。表明DADS可抑制MGC803细胞增殖、迁移与侵袭。BDADSoh24hDADS=50403020F0MGC803DADSDADS组较MGC803组体积明显减小（P0.01）,第4周到7周减小更为显著（P0.001)（图4A）。D A D S组移植瘤重量平均（0.430.2 2)g较对照组（1.0 8 0.30）g明显降低，抑瘤率为6 0.19%（t=79.61,P0.001）（图4B）,表明DADS可抑制MGC803细胞移植瘤形成。免疫组化显示，与对照组比较,DADS组的Ki-67、V im e n tin、Sn a il和CD34阳性表达降低,Ec a d h e r i n 表达增加（图4C），表明DADS可抑制MGC803细胞裸鼠移植瘤EMT。3讨论近年来研究证实,LIMK1/Cofilinl通路在调控肿瘤细胞迁移和侵袭中起着重要作用。研究发现,miR12 8 参与多种癌症细胞增殖、血管生成、EMT和侵袭。miR-128家族成员miR-128-3p过表达可靶向LIMK1下调LIMK1和Cofi-lin1 以及 CDK4/CDK6/Cyclin D1和 CDK2/Cyclin E1表达,抑制乳腺癌细胞增殖与迁移侵袭,表明miR-128-3p可通过阻止LIMK1/CFL1通路调节乳腺癌的进展。DEPDC1B在胰腺癌组织与细胞过表达中,沉默 DEPDCIB可下调 Racl、N-cadherin、Vi me n t i n 和 TWIST1 以及 p-PAKI、p-LIM K I 和 p-Cofilinl,上调Ec a d h e r in，而DEPDC1B过表达结果相反。Racl抑制剂EHop-016作用后可抑制DEPDC1B诱导胰腺癌细胞迁移与侵袭和体内肝转移,表明DEPDC1B 与 Racl 相互作用可激活Racl/PAK1-LIMK1-Cofilinl通路促进细胞迁移和侵袭,为胰腺瘤治疗提供潜在的靶点12 。氯e6光动力疗法(Ce6-PDT)能显著降低结肠癌细胞的愈合和迁移能力，使细胞伪足减少或消失，微丝的原始结构破坏，机制与阻140120100806040200MGC803DADS60*现代肿瘤医学2 0 2 3年11月第31卷第2 1期断Racl/PAK1/LIMK1/Cofilin通路显著下调F-actin有关，而沉默Racl可增强Ce6-PDT抑制迁移的作用,表明 Ce6-LIMK1p-LIMK133-actin1.4LIMK1Op-LIMK11.2*1.0冰*0.8*米*0.6*0.4*0.20A:WesternBlot检测LIMK1与p-LIMK1表达;B:WesternBlot检测Cofilinl与p-Cofilinl表达，*P0.001。A:The expression of LIMKI and p-LIMKI was detected by Western Blot.B:Western Blot analysis of Cofilinl and p-Cofilinl expression,*P 0.001.AMGC803DADSA:相差显微镜观察MGC803细胞形态改变（40 0);B:Western Blot 检测 EMT相关蛋白表达;C:WesternBlot检测MMP-9与TIMP-3的表达。*P0.001。A:The morphological changes of MGC803 cells were detected by phase contrast microscopy(400).B:The expression of EMT-related proteins wasdetected by Western Blot.C:The expression of MMP-9 and TIMP-3 was detected by Western Blot.*P0.001.MODERN ONCOLOGY,Nov.2023,VOL.31,No.21PDT通过下调Racl/PAK1/LIMK1/Cofilin通路抑制结肠癌细胞迁移13A00图2 DADS对MGC803细胞LIMK1-Cofilin1通路的影响Fig.2 Effect on LIMK1-Cofilinl pathway in MCC803 cells by DADSB0122448(h)E-cadherinVimentin-actinE-cadherinVimentin221.51.00.5001224图3DADS对MGC803细胞EMT的影响Fig.3 Effect of DADS on EMT of MGC803 cells:3911:6122448(h)48(h)612B0CofilinlOp-cofilinl1.4.21.00.80.60.40.2024*半*6122448(h)Cofilinlp-Cofilin1-actin*工*06C0122448(h)MMP-9TIMP-33-actin1.4MMP-9OTIMP-31.2*1.00.4*工48(h)12*半*0.201224*2448(6)48(h)*BA1.8.1.MGC803OMGC803DDADSDADS0.60.40.2123456Ki-67VimentinCMGC803*口*7(week)E-cadherin6000.0.0.2*MGC803DADSSnailCD34DADS图4DADS对MGC803细胞裸鼠移植瘤的影响A：裸鼠移植瘤生长趋势;B：裸鼠移植瘤形成;C：移植瘤组织EMT相关蛋白表达（SP400）。*P 0.0 1，*P 0.0 0 1。Fig.4Effects of transplanted tumor of nude mice in MGC803 cells by DADSA:Growth curve of transplanted tumor in nude mice.B:Tumor formation in nude mice.C:EMT-related protein expression in transplanted tumor tissues(SP400).*P0.01,*P0.001.3912我们前期工作证明,DADS可通过Racl-Pak1/Rock1通路抑制人胃癌MCC803细胞迁移与侵袭9。然而,DADS是否通过LIMK1-Cofilinl通路抑制MGC803细胞迁移与侵袭尚未阐明。本研究结果显示,DADS作用人胃癌MGC803细胞后,LIMK1与p-LIMK1表达明显下调，其下游分子Co-filinl磷酸化降低,提示DADS可能通过削弱LIMK1-Cofilinl通路抑制人胃癌MGC803细胞迁移与侵袭。研究报道,LIMK1与EMT密切相关。ZENG等显示，人胃癌组织中 RhoGDI2过表达与肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移和预后显著相关。沉默RhoGDI2可显著抑制胃癌细胞的迁移和侵袭,降低Racl、Pa k l、LI M K 1和p-LIMK1表达，下调Vimentin与上调Ec a d h e r in,抑制肿瘤生长，表明沉默RhoGDI2通过减弱Racl/Pak1/LIMK1通路抑制胃癌细胞的迁移侵袭和 EMT141。肝细胞肝癌组织中LIMK1 表达显著高于正常肝组织,且与预后相关。下调LIMK1表达显著抑制肝细胞肝癌细胞增殖、转移与EMT,表明LIMK1过表达调控HCC 细胞的增殖、转移与EMT15。LIM K 1 在结肠癌中过表达与预后不良相关。上调LIMK1促进结肠癌的恶性进展和EMT,而沉默LIMK抑制结肠瘤的增殖、侵袭和EMT16。PAK4、LI M K 1和Cofilin-1在骨肉瘤组织和细胞中高表达,与临床分期、转移和肿瘤分级相关。沉默PAK4 可促进细胞调亡,抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭与下调PAK4、P-LIMK/LIMK、p-C o filin-1/C o filin-1,从而抑制移植瘤的生长。提示抑制PAK4通过降低LIMK1/Cofilin-1通路的活性抑制骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移和诱导凋亡17 。我们前期发现,沉默LIMKI可下调Snail与Vimentin,上调E-cadherin抑制人结肠癌细胞EMT(18本研究进一步探讨了 DADS 通过 LIMK1-Cofilinl通路对人胃癌MGC803细胞EMT的影响。结果显示,DADS作用人胃癌MGC803细胞后,肿瘤干细胞样细胞减少,异型性降低,EMT表型被逆转。并且Vimentin与MMP-9下调,而E-cadherin与TIMP-3上调。体内实验进一步证实,DADS组裸鼠移植瘤较未处理组生长缓慢且质量减少,移植瘤组织中Ki-67、V im e n t in、Sn a il和CD34阳性表达降低,E-cadherin表达增加。上述结果证明DADS可通过LIMK1-Cofilinl通路体内外抑制MCC803细胞EMT。目前,研发靶向EMT或LIMK1的抑制剂已经成为抗肿瘤治疗的新途径19-2 1。研究发现,柑橘类水果中的黄酮类化合物（nobiletin）具有多靶点作用，分别通过Nrf2/PI3K/Akt通路抑制癌细胞增殖,抑制PARP2刺激SIRT1/AMPK轴诱导癌细胞凋亡和细胞周期阻滞,通过阻断Wnt/-catenin通路下调Wnt、T G F-、NF-k B、Sn a i l、Slu g、ZEB1、M M P-2、MMP-9等抑制癌细胞的迁移侵袭与EMT以及抑制P-gp活性降低瘤细胞对顺铂、PTX、O X等化疗药物的耐药性191。COLLINS等在17 种已报道的LIMK1/2抑制剂进行比较评估，确定三种小分子化合物（TH2 57,LI JT F50 0 0 2 5和LIMKi3)作为有效的选择性抑制剂,适合用作细胞生物学中LIMK功能研究的体内外药理学工具2 0 。HANKE等报告三种高选择性 LIMK1/2抑制剂TypeI、T y p e I与Type 的特性,这些化学探针的表征表明，抑制剂1（LIMKi3，I 型）48（T H 47 0，I 型）和15（TH257，型）显示出极好的选择马艳华，等二烯丙基二硫通过 LIMK1-Cofilinl通路抑制人胃癌细胞侵袭与上皮-间质转化性2 。以LIMK1 为靶点的小分子Dabrafenib通过抑制LIMK1-p-cofilin途径在体外可减少胃癌细胞的迁移和侵袭与阻断腹膜和肝转移的形成2 3。多酚类植物黄酮木犀草素能靶向 LIMK1,下调p-LIMK 和 p-Cofilin 与 Cyclin D1,阻断LIMK1/Cofilin通路抑制肺癌细胞增殖,诱导细胞调亡和 G期阻滞,降低体内Ki-67、p-LI M K 和p-Cofilin表达抑制移植瘤的生长2 4研究显示,DADS可通过上调E-cadherin和下调N-cadherin、M M P-2 与MMP-9增强肺癌细胞的放射敏感性，减弱电离辐射(IR)诱导的迁移和侵袭，抑制EMT25。本研究前期工作证明,DADS可上调ROR通过Wnt信号通路抑制人胃瘤细胞EMT26。D A D S 可通过 LIMK1/Cofilin 通路下调 LIMK1 抑制结肠癌细胞迁移与侵袭2 7 。鉴定 DADS 作用人胃癌细胞的潜在靶点发现LIMK1下调。并且,DADS抑制TCF 1 诱导上调 Racl 与-catenin 抑制人胃癌细胞EMT与侵袭2 8 。本研究进一步证明DADS 可通过阻断LIMK1/Cofilin通路体内外抑制胃癌细胞EMT。1SUNG H,FERLAY J,SIEGEL RL,et al.Global cancer statistics2020:CGLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwidefor 36 cancers in 185 countries J.CA Cancer J Clin,2021,71(3):209-249.2 YANG L,YING X,LIU S,et al.Gastric cancer:Epidemiology,riskfactors and prevention strategies J.Chin J Cancer Res,2020,32(6):695 704.3HUANG Z,ZHANG Z,ZHOU C,et al.Epithelial-mesenchymaltransition:The history,regulatory mechanism,and cancer therapeu-tic opportunities J.Med Comm,2022,3(2):e144.4VILLALONGA E,MOSRIN C,NORMAND T,et al.LIM kinases,LIMK1 and LIMK2,are crucial node actors of the cell fate:molecu-lar to pathological features J.Cells,2023,12(5):805.5RIBBA 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