国内外疫苗研究进展课件.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。,一、疫苗概述,1,、概念,疫苗是指为了,预防、控制,传染病的,发生、流行,，用于人体预防接种的,生物制品,。,2,、疫苗发展史,18,世纪早期，中国人以接种“天花”患者的脓液预防疾病的方法传入了欧洲。,与此同时，英国乡村医生詹,(E.Jenner),也发现接触牛痘病牛的挤牛奶女工不会患“天花”，于是他改进了接种方法并取得了人体试验的成功。由此开始，疫苗学与免疫学诞生。,巴斯德发现在实验室培养的条件下，导致禽类发生瘟疫的细菌毒力减弱了，并且由此可以诱导出耐受性和毒性更强的细菌。进一步的研究使得他研制出有效地抵抗炭疽热、霍乱和狂犬病毒的疫苗。,德国医学家冯贝林利用白喉及破伤风的可溶性毒素，将其去毒后进行免疫接种，建立了被动免疫治疗法，这个方法在传染性疾病治疗方法的发展里程中发挥了重要的作用。,他因研究了白喉的血清疗法而获得,1901,年首届诺贝尔生理学或医学奖。,1919,年第一次世界大战结束时，人类发现了体液免疫现象,活的或者灭活疫苗的效价得到了很大的提高。,伤寒热、志贺氏细菌性痢疾、结核、白喉、破伤风和百日咳,疫苗也被成功制备。,*效价：在血清反应中，抗原抗体结合出现明显可见反应的最大的抗体或抗原制剂的稀释度。,20,世纪,50,年代以后，进入了疫苗发展的现代时期,(,产时期,),。,这个时期的疫苗分为，全细菌疫苗、半细菌疫苗、病毒重组亚单位疫苗、体外培养的活病毒疫苗以及灭活病毒疫苗。,细菌疫苗主要集中于次单元荚膜多糖制剂，减毒的全细菌疫苗也有极大的进展。,1995,年前,医学界普遍认为疫苗只用作疾病的,预防,随着免疫学研究的发展，人们发现疫苗还可以,治疗,一些难治性疾病，从此，疫苗兼有了预防与治疗双重作用。大大拓展了人们对疫苗组成和功能的认识，故被称之为疫苗学的,第三次革命,。,3,、疫苗分类,（,1,）按用途分为两类,1,）,预防性疫苗,是用免疫手段将预防传染病的抗原通过适宜途径种入人体，模拟一个轻度的,自然感染,或刺激机体产生,免疫应答,，诱发、促使机体处于免疫状态，产生自动免疫力，从而增强个体和群体的对抗相应传染病的能力，达到预防疾病的目的。,2,）,治疗性疫苗,是指在已感染病原生物或患某些疾病的机体中，可诱导机体产生特异性或非,特异性免疫应答,，从而达到治疗疾病的目的。,（,2,）按我国,条例,分为两类,1,）,第一类疫苗,是指政府免费向公民提供，公民应当依照政府的规定受种的疫苗，包括国家免疫规划确定的疫苗，省、自治区、直辖市人民政府在执行国家免疫规划时增加的疫苗，以及县级以上人民政府或者其卫生主管部门组织的应急接种或者群体性预防接种所使用的疫苗。,2,）,第二类疫苗,是指除第一类疫苗外由公民自费并且自愿受种的其他疫苗。,（,3,）按照疫苗类型分,常规疫苗,亚单位疫苗,蛋白质疫苗,基因工程疫苗,死疫苗,疫苗,活疫苗,死疫苗,多联多价疫苗,多肽疫苗,融合蛋白疫苗,嵌合疫苗等,DNA,疫苗,重组载体苗,重组抗原疫苗,转基因植物疫苗等,细胞疫苗,（,4,）新型疫苗,新型疫苗是采用生物化学合成技术、人工变异技术、分子微生物学技术、基因工程技术等现代生物技术制造出的疫苗，是近年来新发展的疫苗。包括,基因工程亚单位疫苗,、,重组疫苗,、,合成肽疫苗,、,基因工程载体疫苗,、,核酸疫苗,、,转基因植物疫苗,等。,（,5,）传统疫苗和新型疫苗的区别,1,）成分不同,：,传统疫苗,多为死疫苗、减毒活疫苗或重组亚单位疫苗；,新型疫苗,则为编码无毒力抗原蛋白的病毒核酸或能激发特异性机体免疫应答的细胞疫苗。,2,）机制不同,：,传统疫苗,主要靠病原体的抗原蛋白刺激机体产生中和性的保护抗体；,新型疫苗,除此外还,能激发特异性的细胞免疫应答。,3,）作用不同,：,传统疫苗,只起到一定的预防作用，,新型疫苗,不仅能预防疾病，而且更能起到特异的治疗作用（治疗性疫苗），具有更广泛的应用前景。,二、疫苗研究进展概述,（一）第一类疫苗,我国免疫规划纳入的,14,种疫苗皆为第一类预防性疫苗。该类疫苗的免疫是按照国家或者省级确定的疫苗品种、免疫程序或者接种方案，在人群中有计划地进行预防接种，以预防和控制特定传染病的发生和流行。,1.,乙肝疫苗,目前常用的是,重组疫苗,（第二代疫苗，第一代疫苗为血源性乙肝疫苗，已停用），是采用基因工程的重组技术，首先把,HBsAg,基因片段插入酵母细胞或哺乳动物细胞基因中，在体外培养增值过程中组装或分泌,HBsAg,，将其收集提纯后制成的乙肝疫苗。,我国目前生产的乙肝疫苗按不同的表达系统，分为重组乙肝疫苗,(,酿酒酵母,),、重组乙肝疫苗,(,汉逊酵母,),、重组乙肝疫苗,(CHO,细胞,),。,近年我国乙肝疫苗批签发数目每年约,300,余批，数量均在,1,亿剂次以上，其中约,80,以上为酵母疫苗。,目前乙肝疫苗也有不完善之处,:,免疫全程需注射,3,针，这将减少其覆盖率；,约有,10%,的健康人群对疫苗应答情况欠佳，老年人中更高；,变异的病毒可逃过现有疫苗的保护作用。因此，国内外致力于研制新的疗效更好的第三代疫苗，现已研制成功。,新型疫苗的开发也在进行中，目前有以下几种：,（,1,）第三代重组疫苗,是重组哺乳动物细胞系统表达的包含,S,抗原和,pre S,的重组乙肝疫苗。,目前巴斯德梅里厄公司生产的含,preS2/S,抗原的基因重组乙肝疫苗,(Gem2hevac2B),在法国已大面积推广使用，哺乳动物细胞表达的,preS1/preS2/S(,分别在中国仓鼠卵巢细胞和小鼠细胞中表达,),基因工程乙肝疫苗在以色列、新加坡、英国和一些西欧国家已获准上市。,成都生物制品研究所有限责任公司也正在研制含,preS1,和,preS2,抗原的酵母乙肝疫苗。,（,2,）联合疫苗,如百白破乙肝四联疫苗、甲乙肝联合疫苗。,目前甲乙联合疫苗包括葛兰素史克有限公司生产的,双福立适,和北京科兴生物制品有限公司生产的,倍儿来福,，在儿童和成人中应用能产生长期的免疫保护，抗体水平较高。,有研究表明：接种乙肝疫苗无应答者,甲肝,/,乙肝联合疫苗可能有效。,（,3,）佐剂改良型疫苗,我国通常采用的佐剂为氢氧化铝，具有明显的免疫抑制作用。近年来发现一种新型免疫佐剂寡脱氧核苷酸,(CpG ODN),，通过动物实验及国外的临床试验表明，,CpG ODN,能够,增强,乙肝疫苗的免疫原性，刺激机体,迅速,产生免疫反应，诱导,Th1,免疫应答，,减少免疫次数,和,乙肝疫苗的用量,。,目前云南沃森公司研发的,CpG,佐剂乙肝疫苗正在申请临床试验。,2.,卡介苗（,BCG,）,BCG,是目前世界上许多国家,(,包括我国,),批准应用于预防人体感染结核分枝杆菌,(Mtb),发病的,唯一,结核疫苗。,BCG,能有效预防新生儿结核性脑膜炎和粟粒性肺结核的发病，但对成人肺结核的免疫效果极不稳定；而且，,BCG,仍存在一定毒力；另外，作为一种预防性疫苗，,BCG,不能有效治疗,Mtb,的潜伏感染。,。,近年来，各国都致力于研制新型高效的抗结核疫苗,。,（,1,）重组,BCG,疫苗,是将一些重要的抗原或者其他因子重新导入到现有的,BCG,株，得到一个以,BCG,为载体的,重组疫苗,，或者使,Mtb,的基因缺失得到,基因缺失突变株,从而制造出新的结核疫苗。,德国马普感染生物学研究所研制的,VPM 1002,是将,BCG,的尿素酶基因敲除，同时重组表达来源于李斯特菌,(,Listeria monocytogenes,),的细胞溶解素，该疫苗可能通过缩短,BCG,在体内的存活时间，提高疫苗诱导的长期免疫记忆，已进入临床,期。,Aeras,全球结核病疫苗基金会赞助的,Aeras,一,422,疫苗已进入临床,期。加州大学洛杉矶分校主研的,rBCG30,已完成临床,期工作。,（,2,）亚单位疫苗,是对已接种卡介苗的儿童进行强化免疫，进而加强免疫应答并将免疫保护力延续至成人阶段的疫苗。,国内师长宏等人制备,A985B-ESAT-6,融合亚单位疫苗免疫小鼠。发现,A985B-ES-AT-6,融合亚单位疫苗能够诱导,较强的,免疫应答，攻击实验表明该疫苗有较强的保护作用。,丹麦国立血清研究所目前已有,M72+AS01,、,Hybrid,I+IC-31,两种疫苗进入临床,期；,Hydrid,I+CAF01,、,Hybrid56+IC-31,及,HyVAC 4/Aeras404+IC-1,三种疫苗进入临床,期。,此外，英国葛兰素史克公司研制的,Mtb72f/AS02A,嵌合疫苗也取得了较强的保护性效果，目前正在,期临床试验评估中。,（,3,）活载体疫苗,是以,病毒,为载体将一些重要的抗原重新导入现有,BCG,株，产生高水平的持续胞内免疫。,牛津大学研发的,MVA-85A,，表达,A985A,的复制缺陷的痘苗病毒，可诱导强,CD4,+,T,细胞应答。关于,MVA-85A,疫苗的,期临床试验正在开展，目的是观察其对健康人和,HIV,患者的保护效力和安全性，预计今年能够完成。,荷兰生物制药公司,Crucell,和,Aeras,全球结核病疫苗基金会合作研制的,Aeras-402,是以,腺病毒,为载体，过表达,Mtb AN85A,、,A985B,和,TB10.4,融合抗原，刺激宿主产生高水平的,CD8,+,T,细胞免疫反应。以上,2,种疫苗都已进入临床,b,期。,（,4,）减毒,Mtb,疫苗,减毒活疫苗通常是在结核分枝杆菌或牛分枝杆菌等野生菌株基础上缺失某些毒力基因而得到的新型结核疫苗，主要包括,毒力因子缺陷型,和,营养缺陷型,两种。,国外早期研究表明,PhoP/PhoR,双因子调控系统对,Mtb,发挥毒力作用非常关键，而,fad,基因是,Mtb,的重要致病因子，涉及细胞壁脂质层的合成。动物试验表明，,Mtb,PhoP,fad,双缺失株能在小鼠和豚鼠中安全诱导保护性反应，该候选疫苗正待进入,I,期临床试验,。,3.,脊髓灰质炎疫苗,口服脊灰减毒活疫苗,(Oral Polio Vaccine,，,OPV,),是使用最为广泛的脊灰疫苗，它接种方便、适合在大规模接种活动中使用。,中国医学科学院医学生物学研究所（昆明所）生产的,I+II+III,型三价糖丸及液体苗,和北京天坛生物制品有限公司生产的,I+II+III,型三价糖丸,成为我国市面上的主要脊灰疫苗产品。,由于,OPV,可能会引起疫苗相关麻痹型脊灰和疫苗衍生脊灰病毒相关病例，不能在根本上消除脊灰。因此，在主要使用,三价,OPV,的国家，免疫策略上需要作出调整。一方面，单价,OPV,的开发得到加强，另一方面,OPV/IPV,（,灭活脊髓灰质炎疫苗）,序贯接种,及最终,IPV,的使用可能成为主要趋势。,国家卫生计生委官员,2013,年,11,月,8,日首次明确表示，将按照世界卫生组织的要求，到,2018,年，如期全部使用,IPV,。,4.,无细胞百白破疫苗,(DTaP),，白破疫苗,联合疫苗的发展开始于,百白破联合疫苗,(DTP),。全球儿童疫苗行动计划将以百白破为基础的联合疫苗列为优先开发项目，原因主要是百日咳、白喉和破伤风这,3,种儿童传染病在短期内尚不能消灭，会长期使用这种疫苗。,疫苗中含有的白喉、破伤风类毒素抗原性质稳定，与其他抗原成分联合，相互间不易产生干扰现象等。,国外目前以,DTaP,为基础的联合疫苗种类：,IPV:,脊灰灭活疫苗,;Hib:b,型流感嗜血杆菌；,HepB:,乙型肝炎。,GSK:,葛兰素史克公司；,SP:,赛诺菲巴斯德公司。,自,1997,年起，加拿大及欧洲一些国家已开始使用,DTaP-IPV/,Hib,五联疫苗,，目前已有二十多个国家将其用于计划免疫的初次免疫和,18,月龄的加强免疫。,在美国，目前使用的联合疫苗主要为葛兰素史克公司生产的,五价,DTaP-HepB-IPV,联合疫苗,和赛诺菲巴斯德公司生产的,五价,DTaP-IPV,Hib,联合疫苗,。,已在欧洲上市的,六价,DTaP-HepB-Hib/,IPV,联合疫苗,在美国未通过审核，主要原因是联合疫苗中的,Hib,抗体滴度下降。,国内对联合疫苗的研究开发起步较晚，目前只有北京民海生物科技有限公司生产的,DTaP/Hib,联合疫苗,获得新药证书，已向,SFDA,提交生产文号申请。,2006,年，武汉生物制品研究所生产的,DTP-HepB,四联疫苗,已经获得批准，但由于我国强制规定乙肝疫苗的免疫接种时间必须为,0,、,1,、,6,月龄，至少前,2,针的免疫程序不能改变，因此该四联疫苗未能上市。,5.,麻疹疫苗,强化免疫,初次接种月龄提前,改进接种（如气雾接种）,目前研制的新型麻疹疫苗有,重组病毒载体疫苗,、,DNA,疫苗,、,亚单位疫苗,等。,（,1,）重组病毒载体疫苗,荷兰,研究发现以痘苗病毒安卡拉株为基础的疫苗应用于免疫缺陷短尾猴是安全的。,美国,研究则发现以辛德毕斯病毒为基础的疫苗能保护猕猴免受麻疹感染。,目前对通过载体重组的麻疹病毒蛋白质的免疫特性加强研究，以达到更安全的人用产品要求。,（,2,）,DNA,疫苗,麻疹,DNA,疫苗研究已经从实验室发展到初步的临床试验阶段。因麻疹,DNA,疫苗免疫原性较弱，美国加州大学有研究专注于使用,细胞因子,如,IL,一,2,等佐剂提高其免疫效果。,（,3,）亚单位疫苗,现有的麻疹疫苗会导致免疫缺陷患者发病，因此发展安全且免疫原性高的亚单位麻疹疫苗对于免疫缺陷患者具有特殊意义。,美国发现含有,F,和,H,蛋白的,免疫刺激复合,(ISCOMS),能增强麻疹,DNA,疫苗的免疫原性，动物实验未出现皮疹和病毒血症。,麻疹病毒,ISCOMS,是主要的亚单位疫苗候选品种，因大规模生产疫苗的成本较高，如何获得大量保护性抗原纯品尚待解决。,冻干麻疹减毒活疫苗是目前预防麻疹的有效制剂，但针对麻疹发病特点及减毒活疫苗的不足，为增强麻疹减毒活疫苗免疫应答国内外对该疫苗进行了以下改进：,强化免疫,初次接种月龄提前,改进接种途径（如气雾接种）,6.,麻风腮联合疫苗,麻疹,-,腮腺炎,-,风疹联合疫苗于,1971,年在美国批准使用。此后，又研制了麻腮风,-,水痘联合疫苗。,目前，我国已成功研制麻疹,-,腮腺炎,-,风疹三联疫苗、麻疹,-,腮腺炎或麻疹,-,风疹二联疫苗，且已批准上市。,7,、乙脑疫苗,（,1,）原代地鼠肾细胞减毒疫苗,1988,年我国研制成功乙脑减毒活疫苗,SA14-14-2,是目前,唯一,用于人类的乙脑减毒活疫苗。,该疫苗具有良好的免疫原性，不良反应发生率极低且症状较轻，免疫持续时间长，费用低廉，但孕妇和免疫缺陷者不宜接种减毒活疫苗。,由于我国的乙脑减毒活疫苗株,SA14-14-2,是将强毒株,SA14,通过地鼠肾,(PHK),单层细胞长期传代获得的稳定弱毒株，存在,PHK,细胞基质认证、批准等问题，因此尚未在国际上使用,(,韩国除外,),。但目前,WHO,已推荐在全球使用该疫苗,并已讨论通过其规程。,（,2,）鼠脑灭活疫苗,鼠脑灭活疫苗于,1954,年在日本首次获准,然后在,20,世纪,60,年代和,80,年代进行改进。,该疫苗是目前得到国际广泛承认和使用的乙脑疫苗之一，也在美国获得批准上市使用。,该疫苗有,液体,和,冻干,两种剂型,冻干疫苗在,4,可稳定维持,1,年以上。,（,3,）地鼠肾细胞灭活疫苗,本疫苗仅在中国生产和使用，毒株为,北京,P3,株,，对各型乙脑病毒均可产生保护，在地鼠肾细胞培养时产毒量很高。由于此类疫苗未经纯化和浓缩，导致杂蛋白较多且抗原含量较低，所以需要多次加强才能维持一定的免疫水平，而多次接种又容易产生过敏反应。,本疫苗主要用于流行季节前的突击接种，正逐步被细胞培养的减毒活疫苗取代。,（,4,）非洲绿猴肾,(Vero),细胞灭活疫苗,Vero,细胞灭活疫苗是乙脑,SA14-14-2,株在,Vero,细胞上培养制备的。成品不包含明胶稳定剂、抗生素或硫柳汞。,2009,年,3,月在美国批准对,17,岁及以上人群使用。由于,Vero,细胞灭活疫苗是,17,岁及以上人群,使用的，所以鼠脑灭活疫苗仍然是唯一的儿童使用疫苗。,（,5,）基因工程疫苗,以嵌合体疫苗为代表的基因工程疫苗是乙脑疫苗新的发展方向，但仍在研究阶段,应用到人体还有一定距离。,美国研究人员用病毒,SA14-14-2,株,PrM,和,E,蛋白基因去替换黄热病毒,17D,株,cDNA,的相应位置，而核心蛋白、非结构蛋白基因与病毒复制有关的部分则保留黄热病毒,17D,株的基因序列,构成了,黄热乙脑嵌合病毒,，目前已在部分志愿者中进行了,期试验，接种,1,次血清抗体阳转率,97%,，显示了其安全性和免疫原性，在成人和儿童中的,期临床试验证明其有高的耐受水平。,8.,甲肝疫苗,包括灭活疫苗和减毒活疫苗两类。,甲肝减毒活疫苗目前仅在我国生产和使用，其余国家均使用甲肝灭活疫苗。,我国使用的甲肝疫苗主要是,国产减毒活疫苗,(L-A-1,株和,H2,株,),、国产灭活疫苗和进口灭活疫苗,。,（,1,）甲肝灭活疫苗,我国,20,世纪,80,年代后期开始甲肝灭活疫苗的研究工作。目前，由北京科兴生物制品有限公司、中国医学科学院医学生物学研究所和上海泽润生物科技有限公司生产的甲肝灭活疫苗,(,分别采用二倍体和,Vero,细胞系,),是我国比较常用的。,当前国际上广泛使用的甲肝灭活疫苗包括默沙东公司的产品,维康特、,史克必成公司的,贺福立适,、,赛诺菲巴斯德有限公司生产的,巴维信,和瑞士血清疫苗研究所生产的,艾帕克所百纳,。,（,2,）减毒活疫苗：,我国甲肝减毒活疫苗的减毒株有,H2,和,L-A-1,。,国内研究,显示两者均具有良好的免疫原性和安全性，而且价格低廉，特别适用于经济欠发达地区的易感人群。,该疫苗分别由长春生物制品研究所有限责任公司,(LA1,减毒株,),、浙江医学科学院和中国医学科学院医学生物学研究所,(,均为,H2,减毒株,),生产。,（,3,）亚单位疫苗,国内研究发现，多数病毒的衣壳蛋白基因在真核表达系统中都能够有效地实现自我组装，形成的病毒样颗粒具有高度的免疫原性。这样的病毒样颗粒可诱导出,抗,HPV,病毒的特异性免疫应答,，为疫苗的研发开辟了新的途径。,1.,灭活病毒疫苗,灭活病毒疫苗主要诱导特异性抗体产生,其研发较其它疫苗,快且廉价,。目前,已有几种病毒的灭活疫苗成功用于人类,如灭活的,流感病毒疫苗,及前面提到的,脊髓灰质炎病毒疫苗,等。,全病毒灭活疫苗,是技术上最易实现且体液免疫效果较好的一种疫苗形式。,（二）其他预防性疫苗,（,1,）,SARS,灭活病毒疫苗,2003,年,SARS,爆发后,研究者们首先考虑用灭活的,SARS-CoV,(SARS,冠状病毒,),来抵御,SARS,。分离出,SARS,冠状病毒后迅速开展了,SARS-CoV,灭活疫苗的研究。灭活疫苗是最早进入临床试验的用来防治,SARS,的疫苗。,中国已研制成功,SARS-CoV,灭活疫苗，并已完成,期临床试验。该疫苗特点是研制周期短，可很快获得疫苗制品，便于运输；但对生产的安全条件要求极高，疫苗本身也可能有安全性问题。,SARS,疫苗的有效性、稳定性及使用剂量仍需进一步研究。,（,2,）流感灭活病毒疫苗,1,）,全病毒灭活疫苗,，包含病毒的所有蛋白、脂质和核酸。此类疫苗免疫原性强且成本低，但副作用大，只推荐成人使用；,2,）,裂解疫苗,，在全病毒灭活疫苗的基础上去除,脂质,。此类疫苗有较强的免疫原性，因不含脂质而副反应小，可用于儿童和老年人，已在人群中广泛使用；,3,）,亚单位疫苗,，在裂解疫苗的基础上进一步,纯化,，仅含,血凝素,(HA),和,神经氨酸酶,(NA),。此类疫苗安全性好，适用于所有人，但在儿童和老年人中免疫原性低于裂解疫苗，且成本较高，因此限制了其在发展中国家的应用。,目前研究的新型细胞培养的流感疫苗主要包括：,美国,Novartis,公司用犬肾,(MDCK),细胞生产的,三价季节性,流感全病毒灭活疫苗；,美国,Baxter Healthcare,公司用,Vero,细胞生产的,2009,甲型,H1N1,流感全病毒灭活疫苗；,比利时,Solvay Pharmaceuticals,公司用,MDCK,细胞生产的,季节性亚单位,流感疫苗。,2.,减毒活疫苗,减毒活疫苗是通过改进,“野”病毒或细菌,而制备，将病原微生物在人工培育的条件下，促使产生定向,变异,，使其最大限度地丧失致病性，但仍保留一定的,剩余毒力、免疫原性及繁殖能力,，所得到的疫苗株微生物保留了复制,(,生长,),和引起免疫的能力，但通常不致病。,减毒活疫苗一般只需接种一次，且用量较小，免疫效果巩固，维持时间长。但减毒活疫苗须在低温条件下保存及运输，有效期相对较短，存在毒力返祖的风险。,（,1,）志贺菌减毒活疫苗,美国马里兰大学的研究人员通过基因敲除术敲除福氏志贺菌,virG,基因的,WRSS1,株和,virG,、,stxA/B,基因突变的痢疾志贺菌,1,型的,WRSd1,株。痢疾杆菌菌株,WRSS1,的安全性和免疫原性实验测试中表现出了安全性和较好的免疫原性，已对之进行了第一阶段的临床试验。,目前，还有以伤寒沙门菌,(,伤寒杆菌,),和霍乱弧菌的减毒株为载体，导入宋内菌,O-,抗原的编码基因和宋内菌的,rfa,基因来表达宋内菌的完整的,O-,抗原。,（,2,）轮状病毒,(RV),减毒活疫苗疫苗,羊,RVLL,一,85,的弱毒株,是我国独有的相当理想的受体株，由我国兰州生物制品研究所研制，已于,2000,年批准使用，但是该疫苗缺乏大规模的临床试验数据，是否引起肠道并发症也尚未知。,由葛兰素史克公司开发的,罗特律,于,2005,年,1,月在墨西哥首次上市，国际多中心对其进行大规模的研究后结果显示可有效预防严重,RV,胃肠炎，减少其引起的住院率，而且安全性好。迄今为止，该疫苗已在,100,多个国家获得注册，至少在,7,个国家中，作为常规儿童接种疫苗，并已通过了由,WHO,成立的联合国机构的采购预审。该疫苗基于减毒的人病毒株,89-12(G1P8,型,),。,3.,多联多价疫苗,联合免疫,是指将,两种或两种以上,抗原采用,联合疫苗、结合疫苗、混合使用或同次使用,等方式进行免疫接种，目的是通过,1,次接种,预防多种或不同血清型的同种或不同生活周期传染病的一种免疫手段。联合疫苗包括多联疫苗和多价疫苗。,多联疫苗,可预防不同的疾病，,多价疫苗,是预防不同亚型或血清型的同一种疾病。,除白百破疫苗、麻疹风疹腮腺炎疫苗、甲肝乙肝联合疫苗以外，还有以下几种联合疫苗：,（,1,）,b,型流感杆菌疫苗,-,乙型肝炎疫苗联合疫苗,是乙肝疫苗与流感嗜血杆菌外膜蛋白结合疫苗组成的,HepB/Hib,二联疫苗，具有良好的免疫原性，能够刺激多糖抗体的增加，且在加强免疫后效果更显著。,1996,年,b,型流感杆菌疫苗,-,重组乙型肝炎疫苗,(rHepB),联合疫苗在美国获准使用。此联合疫苗用于,HBsAg,阴性母亲的婴儿接种,可同时预防流感杆菌和乙型肝炎病毒感染。,（,2,）肺炎球菌多价疫苗,到目前为止,肺炎球菌已被证实的血清型有,90,多种，各型别之间无明显交叉保护，所以研究重点多放在多价疫苗上。,目前市场上有,2,种肺炎球菌病疫苗：一种是,23,价,多糖疫苗,(PPV23),，自,20,世纪,80,年代初上市；另一种是,2,个结合疫苗,(10,价疫苗,PCV10,和,13,价疫苗,PCV13),，自,2009,年起上市供应。,7,价结合疫苗正在逐步退出市场。,今后,可能针对不同人群制备易感的相关血清型结合疫苗。,4,、,6B,、,9V,、,14,、,18C,、,19F,、,23F,型,7,价疫苗用于预防中耳炎，,1,、,2,、,5,型疫苗用于预防肺炎球菌菌血症。,（,3,）轮状病毒多价疫苗,由默沙东公司开发的五价疫苗,乐幼康,于,2006,年,2,月获美国,FDA,批准在美国首次上市，成为目前美国市场上唯一的轮状病毒疫苗。该疫苗的保护效率较高，针对所有,G1G4,型引起的,RV,肠胃炎的保护率达,74.0%,，对严重肠胃炎的保护率达,98.0%,，对住院治疗以及急诊病例的保护率达,94.5%,。,（,4,）,HPV,（人类乳头瘤病毒）多价疫苗,由于,HPV,型别较多，,HPV,多价疫苗的研制就显得特别有价值。,目前国际上有默沙东公司研制的佳达修，针对,HPV16,、,18,、,6,、,11,型的四价疫苗和葛兰素史克公司研制的卉妍康，针对,16,、,18,型的二价疫苗。,默沙东已经在研发针对更多,HPV,亚型,(6,11,16,18,31,33,45,52,和,58),的联合疫苗,V503,，目前在做,期临床试验，预计可以减少,97%,的癌前病变和宫颈癌的发生。,国内正在进行,HPV,疫苗临床研究的企业除了美国默沙东和葛兰素史克外，还有养生堂旗下的厦门万泰沧海生物公司和惠生集团旗下的泽润生物。,厦门万泰沧海生物技术有限公司的宫颈癌疫苗现已进入,期临床试验观察阶段，并将于,2018,年前投产,。,（,5,）流感多价疫苗,2013,年,12,月,6,日，阿斯利康公司宣布，欧盟,(EC),批准流感疫苗,Fluenz Tetra,上市。该疫苗是一种,喷鼻剂型四价减毒活流感疫苗,，经鼻腔给药，适用于用于,24,个月至,18,岁青少年和儿童群体，用于季节性流感的预防。,Fluenz Tetra,包含,2,株,A,型,流感病毒株和,2,株,B,型,流感病毒株，能够针对,B,型流感提供更广泛的保护。,目前获得批准的四价流感疫苗包括葛兰素史克的四价疫苗,Flulaval,和赛诺菲的四价配方流感疫苗,Fluzone,，但四价疫苗,Flulaval,给药方式为肌肉注射，而,Fluzone,则为皮内注射。,Fluenz Tetra,将于,2014,2015,流感季节起，取代,Fluenz,。,其他正在研制的联合疫苗还包括含多种抗原组分的狂犬病疫苗、麻腮风与乙型脑炎联合疫苗以及肺炎球菌表面蛋白,PspA,与百白破联合疫苗等。,4.,亚单位疫苗,亚单位疫苗是利用微生物的某种,表面结构成分,（抗原）制成,不含有核酸,、能诱发机体产生,抗体,的疫苗。亚单位疫苗不良反应减少而保护效果相对较好。,结核杆菌亚单位疫苗、麻疹亚单位疫苗的研究都已在前面介绍过。,（,1,）流感亚单位疫苗,20,世纪,70,和,80,年代，在裂解疫苗的基础上，又研制出了,毒粒亚单位和表面抗原,(,血凝素,HA,和神经氨酸酶,NA),疫苗,。通过选择合适的裂解剂和裂解条件，将流感病毒膜蛋白,HA,和,NA,裂解下来，选用适当的纯化方法得到纯化的,HA,和,NA,蛋白。亚单位型流感疫苗具有很纯的抗原组分。,英国在临床疫苗试用中，证实了免疫效果与裂解疫苗相同，并可用于儿童。,1980,年英国首次批准使用，而后扩展到其它国家。,（,2,）,HPV,预防性亚单位疫苗,现有的此类疫苗是由病毒衣壳蛋白,L1,或,L1,与,L2,组成，在细胞内可自我组装成病毒样颗粒,(VLP),。,VLPs,是一种预防性疫苗，由于其产物由病毒结构蛋白组成，故,VLPs,不具传染性和致癌性且使用安全，并表现出了很好的免疫原性及耐受性。,葛兰素史克公司开发的包含,HPV 16,和,HPV 18,的,VLPs,双价疫苗及由默沙东公司开发的包含,HPV16/18/11/6,的,VLPs,四价疫苗都为亚单位疫苗，单一铝盐为佐剂。,（,3,）,HIV,亚单位疫苗,HIV,亚单位疫苗即重组的病毒膜蛋白单体或多肽。由一种或一种以上,HIV,蛋白的非传染性颗粒构成，有包装的逆转录病毒核酸序列，故安全性良好。,美国瓦克斯金公司研制的,HIV,蛋白亚单位疫,AIDSVAX,B/B,是第一个进入人体,期临床试验的,HIV-1,疫苗，试验是在美国、波多黎各、加拿大和荷兰同时进行的，受试人群主要为男男同性恋,HIV,感染高危人群。但该疫苗疫苗未能诱导出针对,HIV,感染的免疫保护。,同公司的,HIV,蛋白亚单位疫苗,AIDSVAXB/E,期临床试验已在泰国结束，该试验未观察到疫苗有预防,HIV,感染或延缓疾病进展的效果。,5.,蛋白质疫苗,对于机体免疫 来说，蛋白质疫苗为较好的疫苗抗原，可被,T,细胞反应和,B,细胞反应同时识别。蛋白质疫苗抗原包括有天然蛋白质、经化学灭活的类毒素。,蛋白质疫苗包括,多肽疫苗,、,融合蛋白疫苗,、,嵌合疫苗等,。,（,1,）新型流感重组蛋白质疫苗,近十年来，许多文献报道了全长血凝素,(HA),作为新型流感重组蛋白质疫苗的研究进展，使用的表达系统包括哺乳动物细胞、昆虫细胞、大肠埃希菌、酵母和植物等。,美国,Novavax,公司使用昆虫细胞表达的病毒样颗粒,(VLPs),作为候选流感疫苗抗原进行研究。该公司的,三价季节性,VLPs,流感疫苗,、,2009 H1N1 VLPs,流感疫苗,和,H5N1 VLPs,流感疫苗,均已完成,期临床研究，但临床结果均未正式发表。,该公司添加佐剂的,H7N9 VLP,抗原,剂量范围研究已进入,期临床研究阶段，预计今年八月结束。,美国,Protein Sciences,公司使用昆虫细胞表达的重组,HA,作为候选流感疫苗抗原研究的,重组,HA,三价季节性,流感疫苗,(,命名为,FluBlok)2013,年,1,月被美国,FDA,批准上市。该公司采用,杆状病毒表达载体系统,技术，已研制出,H7N9,疫苗的核心部分。,美国,Fraunhofer,生物技术研究中心利用烟草植株表达,H1N1 HA,、,H5N1 HA,以及重组,HA,三价季节性流感疫苗,，其中前两种疫苗已进入,期临床，但研究结果尚未公布。,加拿大,Medicago,公司发现烟草植株单独表达,H5N1,或,H1N1,全长,HA,就可组装成,VLPs,。该公司,H5N1 VLPs,疫苗,期临床已结束，而,H1N1 VLPs,疫苗,期临床亦已启动。,2013,年,4,月，科技部会同卫计委启动了人感染,H7N9,禽流感科技应急防控研究项目；北京义翘神州生物技术有限公司采用重组蛋白技术获得,H7N9,疫苗关键蛋白血凝素蛋白和神经氨酸酶蛋白；浙江大学联合中国香港大学成功研制出人感染,H7N9,禽流感病毒疫苗株。这些成果代表我国首次成功自主研发流感病毒疫苗株。,中国生物技术集团公司已启动,H7N9,疫苗研发工作。北京科兴生物制品有限公司和华兰生物疫苗有限公司均已从,WHO,获得,H7N9,疫苗研发用毒株，并启动疫苗的研发程序。,WHO,流感参比研究合作中心,(WHO CCs),和基础规范实验室,(ERLs),负责疫苗候选毒株的筛选、研制、公布和分发。,目前分别有两项,期和,期,H7N9,疫苗的临床试验，分别由瑞士诺华疫苗、美国诺瓦瓦克斯生物制药公司和美国过敏与传染病研究所资助研发。,（,2,）合成肽疫苗,1,）,HIV,合成肽疫苗,美国研究发现用,HIV-1,毒株,env,基因,V3,区合成肽制备的单克隆抗体,(McAb),在体外能部分抑制包膜蛋白,gp120,与,CD4,分子的结合。则,V3,肽可以刺激动物和人产生抗,HIV,中和抗体和细胞毒性,T,淋巴细胞反应。由于,V3,区的氨基酸排列在不同株间有一定差异,使研究疫苗有一定的困难。,I,期临床试验表明,此种疫苗刺激机体产生中和抗体和细胞免疫的能力较差。,2,）,HPV,合成多肽疫苗,东京大学的研究人员开发了一种,鼻腔给药,的预防性,L,2,合成多肽疫苗。,I,期临床研究,13,名健康志愿者，结果发现该疫苗安全、耐受性良好。,5,名接受高剂量的受试者中，有,4,位产生,HPV-16,和,HPV-52,的抗体。但低剂量给药组未产生免疫作用。,6.,基因工程疫苗,疫苗抗原也可以用细胞与分子生物学工程技术研制，通过基因工程生产，这些制品有时被称作重组疫苗。,主要有,DNA,疫苗、转基因植物疫苗、重组载体疫苗、重组抗原疫苗,等。,（,1,）,DNA,疫苗,是指将编码某种抗原蛋白质的,外源基因,(DNA,或,RNA),与,真核表达载体重组,后直接导入机体内，通过宿主细胞的转录翻译,合成抗原蛋白,，激活宿主产生免疫应答，从而让机体获得相应的免疫保护，起到预防疾病的作用。,DNA,疫苗已在防治多种疾病的研究中显示出了强大的应用潜力。是目前研究最热门的,被认为最有前途的疫苗。,从,1992,年出现到现在，已经有两种,DNA,疫苗上市。疟疾、埃博拉病毒、艾滋病和肿瘤等多种,DNA,疫苗也已相继通过美国食品药品监督管理局,(FDA),批准进入临床试验。,除乙肝、麻疹,DNA,疫苗外，预防性,DNA,疫苗还有以下几种,1,）轮状病毒,(RV)DNA,疫苗,小鼠试验已表明编码,VP6,、,VP4,或,VP7,的,DNA,疫苗，能够刺激产生强的血清抗体，当血清抗体转移或渗出到肠腔，就会产生抗,RV,保护作用，但该疫苗尚处于动物模型中，未到临床观察阶段。研究也处于起步阶段，与实用的疫苗尚有不小的距离。,2,）,SARS DNA,疫苗,由于,SARS,主要中和抗原可能是表面纤突蛋白,S,抗原、膜蛋白,M,抗原和衣壳蛋白,N,抗原，因此构建,DNA,疫苗没有技术障碍。,目前国内外正在研发中的,SARS-CoV DNA,疫苗主要有两种：基于,S,蛋白,的,DNA,疫苗和基于,N,蛋白,的,DNA,疫苗。,3,）流感,DNA,疫苗,流感病毒核壳,(NP),蛋白非常保守，具有,型特异性,，,NP,蛋白在同型病毒间的氨基酸同源性高于,90%,。因此，,NP,蛋白是流感病毒分型的,主要依据,之一，也是动物模型中研究最早的具有,交叉保护,效果的抗原，基于,NP,蛋白的新型候选疫苗研究很有前景。,此外,研究者还开展了将,NP,蛋白与流感病毒其它保守区域,(M2e,、,HA,蛋白等,),偶联,作为靶标的,DNA,疫苗研究。,动物模型评价候选通用,DNA,疫苗株,免疫,攻毒毒株,研究地区,NP+M1/M2 DNA,A/W SN/33,A/PR/8/34,日本,NP+HA DNA,A/Sichuan/2/1987,挪威,NP+M2+HA DNA,A/V ietnam/1203/2004,丹麦,NP+M2 DNA plus liposomes,A/HK/8/68,A/PR/8/34,美国,4,）,HIV DNA,疫苗,HIV DNA,疫苗是将含有编码,HIV,蛋白基因的,DNA,分子,(,主要是质粒,DNA),直接,注射,到体内，使其在体内表达而诱导产生免疫应答。,单用,DNA,疫苗在人体中诱导产生的免疫应答还是比较弱，不足以保护人体免受,HIV,感染。因此，目前普遍采用的策略是将,DNA,疫苗与免疫佐剂、重组蛋白亚单位疫苗或重组载体疫苗以联合免疫的方式接种。,长春百克公司研制的复合型,AIDS,疫苗（,DNA,疫苗初始免疫,安卡拉株,(MVA),载体疫苗加强免疫,）进入,期临床试验。该疫苗抗原基因来自中国广西等省区流行的,B/C,重组,(CRF08_BC),毒株。这是在我国进入临床试验的首个由境内机构申报的,AIDS,疫苗。,中国医学科学院与艾伦,戴蒙德,AIDS,研究中心联合研制的,DNA,疫苗,-MVA,载体疫苗,复合型,AIDS,疫苗也已完成临床前研究。,2007,年,9,月，默沙东公司研制的基于腺病毒,5,型载体的,AIDS,疫苗的,b,期临床试验被意外中止。试验结果表明，该疫苗未能提供针对,HIV,感染的免疫保护。而且在体内预先存在,Ad5,中和抗体的受试者中，接种疫苗的受试者被,HIV,感染的几率显著超过了接种安慰剂的受试者。该疫苗研究宣告失败。,5,）疟疾,DNA,疫苗,疟疾疫苗是研究最多的寄生虫病疫苗之一。各种,DNA,疫苗如多基因,DNA,疫苗、密码子优化、新型佐剂、新型递送系统等在疟疾,DNA,疫苗研究中几乎均有所尝试。,DNA,疫苗具有以下优点,:,DNA,疫苗的重组质粒易于,构建,，能在工程菌,(,如大肠杆菌,),内快速,增殖,，易于大规模化生产，成本比较低廉；,能以天然构象的抗原形式提呈给免疫系统,产生类似于自然感染的完全的免疫应答，包括抗体应答和细胞免疫应答；,具有类似亚单位疫苗或灭活疫