病理学检验课件.ppt

单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,Page,*,单击此处编辑母版标题样式,第六章 组织制片技术,第一节 组织块的处理 第二节 切片机具与切片,一、取材 一、切片机,二、固定和固定液 二、切片刀,三、洗涤、脱水、透明 三、磨刀与被刀,四、浸蜡、包埋 四、切片,学 习 目 标,1.了解常用组织切片的种类,2.熟悉组织切片制作的基本程序,3.掌握常用固定液的配置和应用,4.熟练进行洗涤、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、封片等操作,第一节 组织块的处理,一、取材,定义：按照病理检查的目的和要求，切取适当大小和数量的组织块，用于制作组织切片的过程，称为取材,（一）取材的配合,病理检验技术员取材时的职责是：配合病理医师对病变组织进行肉眼检查，准确记录病理医生检查时描述的病理改变，按照病理检验的需要，选择和确定取材的部位和块数。病理检验技术人员要及时对切取的组织进行编号或标记，并在病理检单上做好记录，以便病理医生镜检时查对。取材后的标本应加足固定液，按编号存放，以备复查之用。,（二）固定方法,细胞的主要组成成分是蛋白质、脂类及糖类，应根据观察目的和诊断要求，选用相应的固定液和固定方法，使其凝固或沉淀。,常用的固定方法有以下几种：,1.浸泡固定法,2.注射、灌注固定法,3.微波固定法,4.蒸气固定法,（三）常用固定液,1.单纯固定液,是指有一种化学物质组成的固定液。此类固定液包括：重铬酸钾、苦味酸、丙酮、氯化汞、铬酸、锇酸等。,常用的有：,甲醛（福尔马林）、乙醇、乙酸（冰醋酸、醋酸),2.混合固定液,是指由多种化学物质混合组成的固定液。实际工作上多用混合固定液，其固定效果明显优于单纯固定液。,（1）中性甲醇液,可作常规固定液或标本保存液，脂肪染色此液固定。,（2）乙醇-醋酸-甲醇液（AAF液）,其特点是固定快速，对脂质、糖类、蛋白质等物质有很好的固定作用，避免了三种固定液单独使用引起的组织收缩或膨胀，是一种优良的混合固定液。,（3）乙醇-甲醛液（,AF液,）,适用于皮下组织中肥大细胞的固定。,固定后的组织不必经低浓度逐级乙醇脱水，可直接移入95%乙醇脱水，也不用水洗，缩短了脱水时间。,配方：95%或乙醇脱色 90mL,40%甲醛 10mL,（4）Bouin液,是一种常规用于活检标本固定的良好固定液，适用于大多数组织的固定，尤其适用于结缔组织染色。,（5）Zenker液,适用于一般组织固定，胞核和胞质染色均清晰，对免疫球蛋白染色最好，也可用于病毒包涵体、某些肿瘤标本的固定。,（四）固定的注意事项,1.及时固定,取材后立即将组织块放入固定液中,2.固定容器宜大,3.固定液应,足量,4.防止组织变形,5.确定恰当的固定时间,固定时间应依据组织块的大小、厚度以及固定液的种类、环境温度而定。组织块大小为（1.01.5cm）,1cm（0.20.3cm）时，固定时间以1224h为宜。,三、洗涤、脱水、透明,（一）洗涤,定义：,用水或乙醇等将组织经过固定处理后，与组织结合的固定液及沉淀物清洗掉的过程，称为洗涤。,1.洗涤目的,除去未与组织结合的固定液及沉淀物。,2.洗涤的方法,（1）,含水固定液的洗涤方法,：常用的含水固定液是甲醇溶液，用自来水冲洗即可。,（2）,含乙醇固定液的洗涤方法,：一般不需要洗涤，如果需要洗涤，应使用与固定液中的乙醇浓度相近或略低的乙醇洗涤。,（3）特殊固定液的洗涤方法:略,（二）脱水,定义：,将组织内的水分用某些化学试剂置换出来的过程称为脱水。,1.脱水的目的,组织块经固定和洗涤后，含有大量的水分，而水与苯、二甲苯等透明剂不混溶，故组织在透明前必须用能与透明剂相混溶的脱水剂（如乙醇），把组织内的水分置换出来，为下一步的透明做准备。,2.常用的脱水剂,脱水剂能同时以任何比例雨水和头，透明剂混合。常用的有：乙醇、正丁醇、丙酮等，其中乙醇最常用。,3.脱水的方法,一般把脱水剂配成各种浓度，自低到高浓度依次进行使组织中所含水分依次减少直致被脱水剂取代。,4.自动脱水机,（三）透明,定义：,用某些化学试剂（如二甲苯等）将组织中的脱水剂置换出来，以利于浸蜡和包埋，因组织块浸入这些试剂后常呈半透明状，故称透明（或煤浸）。所使用的化学试剂称为透明剂。,1.透明目的,2.常用的透明剂,可使用的较多，有苯、甲苯、二甲苯（,最常用,）、三氯甲烷、汽油、香柏油（,透明时间长达24h，所以不常用,）等，多数透明剂对人体有害，使用时应注意防护。,3.常用透明方法,将脱水后的组织块先用乙醇-二甲苯混合液处理或直接浸入透明剂中，置换透明剂23次既能达到透明目的。,四、浸蜡和包埋,（一）浸蜡（透蜡）,定义：通过透明的组织块在融化的石蜡中浸渍，使组织块中的透明剂被完全置换出来的过程。,1.浸蜡的目的 用石蜡等支持物去置换、替代组织中的透明剂，使组织具有一定硬度，有利切片。,2.浸透剂的种类 常用的浸透剂有石蜡、明胶、火棉胶、树脂、碳蜡等，它们既是浸透剂又是包埋剂。,3.浸蜡方法,石蜡是最常用的浸蜡剂，所以主要通过石蜡的浸蜡方法，以掌握浸蜡方法。,石蜡浸蜡方法,石蜡有高熔点和低熔点之分，一般使用的是熔点为56,以上的石蜡。要显示酶和保存抗原活性性时，则需使用熔点为54以下的石蜡。常规制片普通用熔点为5658旳石蜡。,（二）包埋,定义：用石蜡或其他包埋剂将组织包成一定形状，使其具有一定的硬度和韧度，便于切成薄片的过程，称为包埋。,（1）石蜡包埋法常用的有：常规石蜡包埋、胃镜标本的包埋、液体标本的包埋、快速石蜡包埋法。,（2）火棉胶包埋法,常用于大块组织的制片（如整个眼球或神经组织等），用火棉胶包埋可避免纤维组织和肌肉组织的过度硬化，减少纤维组织的收缩和扭转，有利于保存原有的组织结构。,（3）碳蜡包埋法,（4）明胶包埋法,包埋的注意事项,（1）确定包埋面,（2）同一蜡块内包埋多个组织块时组织块的性质应相同（如同属软组织），组织块的大小、厚薄要相近，且包埋方向要一致，组织块间的距离不能过大。,（3）难切的组织（如皮肤、骨等）以及需切连片的组织均应单独包埋。,（4）神经、脊髓及需要定向包埋的组织应注意组织块的相互关系。,（5）操作应迅速,（6）若将管腔或空洞标本与小标本包埋在一个蜡块内时，不能将小标本放入官腔或空洞标本内。,扭转式石蜡切片机,冰冻切片机,适用于病理组织石蜡切片的刀片,切片机与刀片的认识,实验室照的图,石蜡切片机切的切片,冰冻包埋机,总结组织制片的过程,收集标本（活检、尸检、动物实验）,取材固定切块（1,10.3自来水冲洗12h）,组织脱水（75乙醇、85乙醇、95乙醇I、95乙醇II、100乙醇I、100乙醇II，低溶度乙醇24h,高溶度乙醇1h）,组织透明（二甲苯30s）,浸蜡（软、硬蜡、大组织416h,组织24h）,包埋,冷却修蜡块,焊蜡块,切片,贴片,烤片,切片脱蜡,切片染色（常规染色HE）,第七、八、九章 总结,苏丹III染液套装,苏木素-伊红染色又称HE染色,第一节 常规染色（HE染色）,第二节 特殊染色（,通常指除HE染色外的其他染色方法,）,第三节 染色前后的处理,第一节 常 规 染 色,回肠HE染色图片,人脾脏HE染色图片,备注：常规染色或普通染色简称HE染色。,HE染色法，石蜡切片技术里常用的染色法之一,。,大肠癌异变掀窝病灶HE染色,宫颈液基HE染色,HE染色43岁宫颈刮片,染色中常见问题及注意事项：,一、固定不当,二、脱蜡不净,三、染色与分化不当,四、脱水不彻底或过度,五、封固及封固剂使用不当,六、切片脱落,第二节 特 殊 染 色,备注：特殊染色通常指除HE染色外的所有染色方法。,在实际工作中，一般是先做HE染色，通过对切片认真细致的观察，仍不能做出正确的诊断或鉴别诊断有困难时，在进行特殊染色，通常将特殊染色用于肿瘤的诊断和鉴别诊断，如应用网状纤维染色可以区别癌与肉瘤。,第一节 结缔组织染色,一、胶原纤维染色,二、弹力纤维染色,三、网状纤维染色,四、多色染色,第二节 肌肉组织染色,一、横纹肌染色,二、早期心肌病变组织染色,第三节 脂质染色,一、Lillie-Ashburns油红O改良法,二、锇酸组织块染色,第四节 糖原和粘液物质染色,一、糖原染色,二、粘液物质（粘多糖）染色,第五节 病原微生物染色,一、细菌染色,二、真菌染色,第六节 神经组织染色,一、尼氏小体染色,二、神经纤维及髓鞘的染色方法,第七节 组织内铁、钙的显示,一、铁的显示,二、钙的显示,网状纤维染色图片,网状纤维染色：,用浸银法可将纤维染成黑色，故又称嗜银纤维,网状纤维染液,网状纤维染色显示瘤组织被网状,横纹肌染色图片,横纹肌的染色方法：,有PTAH法、Masson氏液染色法、Uan Gieson氏法等。,可见横纹肌母细胞及梭形带,横纹肌染色,锇酸组织块染色,备注：,锇酸,与脂质结合成黑色。,电镜下的锇酸染色,在锇酸染色的切片上有髓神经,糖原染色图片,备注：,用于鉴别淋巴系统细胞增生的性质，鉴别红细胞系统增生的性质。,染色肝细胞 肝糖原累积病,糖原染色,第三节 染色前后的处理,一、染色前处理,（一）脱蜡至水,（二）脱汞盐结晶,（三）脱甲醛色素,二、染色后处理,1.分化作用,2.蓝化作用,3.染色后的脱水,4.染色后的透明,5.溶液的更换,三、封固,封固方法有,1.无水封固剂封固,2.含水封固剂封固,注意事项：,1.染液应避光低温存放,2.及时清洗染色用具,3.定期过滤,4.及时更新染液,