显微鉴定及显微化学反应常用试液的配制方法.doc

附 录 一  显微鉴定及显微化学反应常用试液得配制方法

1.水合氯醛试液:
取水合氯醛50 g,加蒸馏水l 5m1与甘油10m1使溶解,即得。此为常用得透化剂,能使细胞组织透明清晰,能溶解淀粉粒,蛋白质。挥发油、树脂、叶绿素等,但不溶解草酸钙或碳酸钙晶体等.它亦有使皱缩得细胞膨胀而恢复原状得作用。
2.稀甘油试液:
取甘油33ml,加蒸馏水10ml,再加樟脑少许或液化苯酚1滴,即得。 本品为临时切片得常用封藏液之一。经水合氯醛透化得显微标本滴加稀甘油封藏,可防止水合氯醛结晶析出而避免干扰观察。
3.甘油醋酸试液 (斯氏溶液):
取甘油、50％醋酸、蒸馏水各等分,混合,即得。此为常用得一种封藏剂,能在较长时间内保持淀粉粒得形状、大小,防止淀粉粒崩解,以便于显微观察与测量大小.
4.间苯三酚试液:
取间苯三酚1g,加95％乙解100ml使溶解,即得。置棕色瓶内,在暗处保存。样品加本试液2—3分钟后,再加浓盐酸或浓硫酸1滴,木质化细胞壁显红色,红色得深度与木质化得程度有关。
5、苏丹Ⅲ试液: 取苏丹Ⅲ0、01g加90％乙醇5m1,溶解后,加甘油5m1,摇匀,即得。 应置棕色瓶中保存,在2个月内应用。
    此液能使木栓化或角质化得细胞壁及脂肪油树脂等染成红色或桔红色。
6.氯化锌碘试液:
取碘化钾8g,加水8、5ml使溶解,再加无水氯化锌2、5g溶解后,加适量碘使达饱与状态,即得。 本试液置棕色玻璃瓶内保存。
 用于鉴别纤维素细胞壁与木化细胞壁,前者显蓝色或蓝紫色,后者呈黄色或棕色。
7.铜氨试液:
取硫酸铜0、5g,加蒸馏水适量,置乳钵中研磨,再加浓氨水10ml使溶解,即得。
本试液在使用时配制,贮存时间一般不得超过2个月。能使纤维素细胞壁染成浅蓝色,并逐渐膨胀而溶解:半纤维素细胞壁与纤维素细胞壁反应同,但前者遇水强烈膨胀。
8.稀碘液:
取碘化钾0、5g溶少量蒸馏水中,加碘lg,溶解后加水至100ml,即得,使用时,通常还要稀释至谈棕色或淡棕黄色。置棕色玻璃瓶内保存。
    用于淀粉粒及糊粉粒之检查。直链淀粉遇此液呈蓝色;支链淀粉则显紫红色。与糊粉粒作用显暗黄色或黄棕色。
    9.氯化汞—溴酚蓝试液:
取氯化汞10g,溴酚蓝0、001g,加蒸馏水100ml溶解,即得。
    此试液用于检识糊酚粒.将含糊粉粒之切片加此溶液中5分钟后,依次用0、5％醋酸冲洗除去多余得试剂,再用水洗3分钟,用稀甘油装片镜捡,糊粉粒显蓝色。
   10.亚甲蓝试液:
  (1)醇溶液: 取亚甲蓝0、1g,溶于95％乙醇25ml中;
  (2)甘油溶液: 取亚甲蓝0、1g,溶于95％乙醇5m1及甘油25m1。
    镜检粘液时,先前加(1)液1—2滴于材料,加盖玻片,过1—2分钟之后再从盖玻片边缘滴加(2)液,粘液显天蓝色;果胶质里紫色。
11.钌红试液:
取10%醋酸纳溶液1—2ml,家钌红适量使呈酒红色,即,应临用时配制。
12稀盐酸:
取盐酸23.4ml,加蒸馏水释至100ml,即得。
本液含HCl应为9、5%—10.5%。与小檗碱反应形成黄色针簇状盐酸小檗碱结晶。能溶解草酸钙结晶而不产生气泡,溶解碳酸钙结晶(钟乳体)而产生气泡;不溶解硅质块。
13.稀醋酸:
 取冰醋酸6ml,加蒸馏水至100ml,即得。此为较常用试液。不溶解草酸钙晶体,但能溶解碳酸钙晶体(钟乳体)而产生气泡,故常以此作显微化学反应。
14.稀硫酸:
取蒸馏水约50m1,加浓硫酸5.7ml,搅拌,再加蒸馏水稀释至100ml,即得。本液含H2S04应为9、5%—10.5％。能溶解草酸钙晶体,并析出针状硫酸钙结晶。
15.稀硝酸:
取硝酸10.5m1,加蒸馏水稀释至100ml,即得。本液合HNO3。应为9.5。10.5％;30％硝酸与小檗碱反应形成黄色硝酸小檗碱针晶簇结晶。
16、氢氧化钠(氢氧化钾)试液:
取氢氧化钠5g,加蒸馏水溶解成100ml,即得。
17.擦镜液 :
取乙醚70m1,加无水乙醇30ml,混合摇匀,即得。
    用于擦拭显微镜得镜头等光学部分。
附 录 二  制作生药显微标本片常用试液配制

1、福尔马林—醋酸—酒精混合液(FAA固定液):
    取福尔马林5ml,冰醋酸5mml,50％或70％酒精90ml,混合即得。
此为较常用得固定液与保存液,能固定一般植物组织(单细胞体及丝状藻类除外),也适合昆虫、甲壳类得固定,但不适于作细胞学研究得固定。固定时间最短需十几小时,可作无限期保存,久置对制片并无影响。
柔软得材料用50%酒精为好,坚硬得材料用70% 酒精为好。易于收缩得材料可稍增加冰醋酸。
2.脱水剂 :
为50％、70％、 80％、90%、95％、100％乙醇。
    用法:生药制片中得脱水剂.用量为材料得2—3倍,各级2—24小时,但材料在无水酒精中不能放置过长,否则组织过硬、过脆,造成切片困难。在95%酒精及无水酒精中时,最好多换一次新液,更有利于脱水。
3.透明剂:
 分四级。二甲苯:纯酒精(1:2;1:1;2:1;纯二甲苯)。用于生药制片中脱水后材料得透明,各级约30分钟。纯二甲苯中应更换2次。
4.渗蜡剂:
 分四级。二甲苯;石蜡(3:1;1:1;1:3;纯石蜡)。用于生药石制片中得渗蜡,每级2—3小时。
5、染色剂:
(1)番红染色剂
取番红1g,溶于100ml50%酒精中,即得。可使木质化细胞壁染成红色。
(2)固绿染色剂
取固绿0、5g,溶于100ml95%酒精中,即得。与番红染色液配合用作生药切片得二重染色,可使纤维化细胞壁染成绿色。
6.封藏剂:
(1)加拿大树脂封藏剂
取加拿大树脂适量,溶于适量得二甲苯中,配成适当浓度(以玻璃棒一端形成小滴滴下,而不成丝状物为度),加入几粒豆粒大小得大理石(中与树胶因放置产生得酸性,以免使切片褪色),即得。
使用时注意:
    (1)溶液宜现配现用。
    (2)此液放置时因溶剂挥发会逐渐变稠,用时需用二甲苯稀释,否则不仅浪费树脂,而且易混进气泡;稀释时不可加热,以免树脂变质发黑。
    (3)用特制得树脂瓶盛树脂溶液。如无特制得树脂瓶,可用普通玻璃瓶代替,但不可用软木塞塞,而要另外罩上适当大小得玻璃试管。以免塞子打不开。
(2)品红甘油明胶溶液
取粉末状明胶1g,加水6ml,浸1—6小时,使溶解,加甘油7ml,轻轻搅匀,,用纱布过滤,加入适量得碱性品红溶液,即得。用于半永久制片得封藏。
碱性品红溶液得配制:碱性品红0、01g,加入无水乙醇60ml、樟油8m,溶解即得。
   7.组织解离液:
   (1)硝铬酸
 取硝酸20ml,加入100ml水中,混匀;另取三氧化铬20g,溶于100ml水中,用时将上述二液等量混合均匀即可。用于木化组织较多、较硬得材料得解离。
(2)5%氢氧化钠(氢氧化钾)试液:
取氢氧化钠5g,加蒸馏水溶解成100ml,即得。用于组织较柔软得材料得组织解离。