细胞化学染色技术.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,欢迎大家,第三章,细胞化学染色技术,学习目标,1.掌握：细胞化学染色的基本步骤；铁染 色、过氧化物酶染色、酯酶染色、过碘 酸-希夫染色、碱性磷酸酶染色、酸性磷 酸酶染色的正常血细胞染色反应和临床 意义。,2.熟悉：细胞化学染色的概念和临床应用。,3.了解：细胞化学染色的原理和影响因素。,第一节 概 述,一、概念,细胞化学染色是细胞学和化学相结合,而形成的一门科学。它以细胞形态学为,基础，结合运用化学反应的原理对血细,胞内的各种化学成分,(酶类/脂类/糖类/铁,/蛋白质/核酸等)作,定性、定位、半定量,分析的方法。,要求：,血细胞化学染色的基本要求是在原位显示细胞成分和结构，反应产物应是有色沉淀物，具有一定的稳定性。,血细胞化学染色可显示糖原、脂类、酶、蛋白质等。,二、必要性,从形态学观察，存在较多的主观性；,有些原始细胞形态较相似，难以鉴别；,结合细胞化学染色，提高疾病的诊断率。,三、临床应用,1.,辅助判断急性白血病的细胞类型,2.,辅助血液系统疾病的诊断和鉴别,诊断,3.,观察疾病的疗效和预后,4.,疾病,发病机制的探讨,白血病的诊断：,MICM,分型,M,：,morphology I,：,immunology C,：,cytogenitics M,：,molecular biology,形态学分型：进行初步的诊断,免疫学分型：明确细胞种类,细胞遗传学分型：与疾病预后有关,分子生物学分型：提高到分子水平,四、基本步骤,1.,固定,（1）物理法：干燥、火焰,（2）化学法：,A、蒸气固定：,甲醛,B、液体固定,：甲醛、乙醇、甲醇、丙酮。,2.,显示：有色沉淀反应,（1）偶氮偶联法：酯酶染色,（2）联苯胺法：POX,（3）普鲁士蓝反应：Fe,（4）希夫反应：PAS,（5）金属沉淀法：NAP,（6）物理显色法：SBB,3.,复染：使各种细胞能显示出来,铁染色,-,中性红、伊红,PAS-,甲基绿,核：中性红、甲基绿、沙黄等。,浆：伊红、刚果红、光绿等。,五、研究对象,外周血和骨髓,新鲜涂片,单个细胞中的化学物质：,酶类、脂类、糖类、铁、蛋白质、核酸等,第二节 常用细胞化学染色技术,铁染色,过氧化物酶染色,苏丹黑B染色,酯酶染色,过碘酸-希夫反应,中性粒细胞碱性磷酸酶染色,酸性磷酸酶染色,一、铁 染 色 （ferric stain）,亚铁氰化钾,亚铁氰化铁,(,蓝色沉淀在含,Fe,部位,),铁,酸性环境,普鲁士蓝,反应,骨髓小粒中的含,Fe,血黄素（细胞外铁）,骨髓中贮存铁,幼红细胞内的,Fe,（细胞内铁）,原理,二、结果判断,1.,细胞外铁,(,骨髓小粒含铁血黄素,),铁颗粒、,铁,小珠、,铁,团块,细胞外铁,(,低倍镜观察,),（）：无颗粒,（）：有少量铁颗粒或偶见铁小珠,（）：有较多的铁颗粒或铁小珠,（）：有很多的铁颗粒、铁小珠,和少数铁小块,（）：有极多铁颗粒、小珠和,很多铁小块，密集成堆。,2.,细胞内铁,(,中晚幼红细胞，油镜观察,),（,1,）分级,(,按铁颗粒数量的多少及大小,),细小颗粒：细沙样铁小粒，不易看清,。,粗大颗粒：很容易看清的颗粒。,（,2,）阳性率,观察,100,个中,晚幼红细胞，计算出铁,粒幼红细胞的百分比。,【,结果判断,】,幼红细胞核染色为鲜红色,铁粒呈蓝绿色。,细胞内铁,(,油镜观察幼红细胞,),型：,1,2,个小铁颗粒；,型,：,3,5,个小铁颗粒；,型：,6,10,个小铁,颗粒或,1,4,个大颗粒；,型：,10,个以上小铁颗粒,或,5,个以上大颗粒。,环形铁粒幼红细胞(ringed sideroblast),幼红细胞胞质内铁颗粒6个，围绕,核周2/3以上者。,铁粒幼红细胞,(sideroblast),：,胞质中出现蓝色铁颗粒的幼红细胞。,铁粒红细胞,(siderocyte),：,胞质中出现蓝色铁颗粒的成熟红细胞。,绿色箭头示：环形铁粒幼红细胞；蓝色箭头示：铁粒红细胞,1.细胞外铁,：,（,+,）,（+）,2.细胞内铁：铁粒幼红细胞阳性率大约,1244%，III型（I型为主），无,型、型、环形铁粒幼红细胞及铁粒,红细胞。,三、参考范围,四、临床意义,铁染色是评估铁缺乏最实用的方法，是反映储存铁的金标准，是临床应用最广泛的细胞化学染色之一。,1.,缺铁性贫血：,外铁（），内铁,15%,。,4.,非缺铁性贫血：溶贫、巨幼贫、再障、,白血病等，内外铁正常或增多。,5.,感染、肝硬化、慢性肾炎、血色病等：,外铁,增多,。,五、应用评价,铁染色是临床常用的一种细胞化学,染色，虽不如血浆铁蛋白敏感，但是反,映机体储存铁的金标准。,外铁,：反映骨髓中铁的储存量；,内铁：反映骨髓中可利用的铁量。,二、过氧化物酶染色 （peroxidase,POX）,一、原 理,粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含 有过氧化物酶(POX)，它可分解H,2,O,2,释放出新生 态的氧，后者氧化二氨基联苯胺，形成金黄色不 溶性沉淀，定位于胞质内酶所在的活性部位。,二甲基联苯胺法（,DAB,）原理,POX,新生态氧,O,过氧化氢,（基质中）,四甲基联苯胺,（无色）,联苯胺蓝（蓝色）,亚硝基铁氰化钠,蓝色颗粒,（浆内酶部位）,粒、单核,细胞胞浆,【,原理,】,二、,ICSH,推荐的三种方法,二氨基联苯胺法（DBA）,二盐酸联苯胺法,过氧化物酶氨基-甲基卡巴唑染色法,三,、结果判断,在细胞质内出现金黄色颗粒为阳性反应。,（,二氨基联苯胺法,）,二氨基联苯胺法,二盐酸联苯胺法,二盐酸联苯胺法,【,结果判断,】,-,、,、,+,、,+,、,+,、,+,弱阳性 颗粒小，分布稀疏,阳性 颗粒稍粗，分布较密集,强阳性 颗粒粗大，密布于整个胞浆,POX,结果判断,细胞质内有蓝黑色颗粒者为阳性。,（）无颗粒沉着；（,a,）,（,）颗粒细小，分布稀疏；（,b,）,（,+,）颗粒较粗，局灶分布；（,c,）,（,+,）颗粒粗大，分布较密，占胞质,1/22/3,；（,d,）,（,+,）颗粒粗大，呈团块分布；（,e,）,（,+,）全部胞质均部满颗粒，可覆盖胞核（,f,）。,【,正常血细胞染色反应,】,1.,粒细胞系统,POX,主要存在于粒系细胞中。,分化差的原粒细胞阴性,;,分化好的原粒细胞至中性成熟粒细胞各,阶段均呈阳性，阳性反应程度随细胞的成,熟逐渐增强。,中性分叶核粒细胞：强阳性,嗜酸粒细胞：阳性最强,嗜碱粒细胞：（）,2.,单核细胞系统 阴性或弱阳性,3.,淋巴细胞系统,红细胞系统,巨核细胞系统 阴性,浆细胞,组织细胞,四、临床意义,鉴别急性白血病的类型首选,（,1,）,急淋和急性髓细胞系的鉴别：,急淋：（），阳性率,3%,；,急单：弱阳性；,急粒：阳性（,+,+,+,+,）。,2.,单核细胞系统：,（）,或弱（,+,），阳性颗粒少而细小。,3.,其它系统细胞：,淋巴细胞系统、红细胞系统、巨核,细胞系统、浆细胞、组织细胞,（）。,【,临床评价,】,急性髓细胞白血病,急性淋巴细胞白血病,鉴别,1.,急性髓细胞白血病,（,1,）急性粒细胞白血病,阳性反应,（,2,）急性单核细胞白血病,弱阳性反应,2.,急性淋巴细胞白血病,阴性反应或阳性率,3%(,残留原粒细胞,),ALL,ALL,原粒阴性,原粒弱阳性,原粒阳性,早幼粒,强阳性,一、原理,苏丹黑,B,是一种脂溶性重氮染料，可溶解,细胞内含脂结构,(,中性脂肪、磷脂、糖脂和类,固醇,),，,而使脂类物质显示出来，呈棕黑色或,深黑色,(,粒细胞：丰富；单核细胞：少量,),。,三、,苏丹黑B染色,（Sudan black B，SBB,）,正常血细胞的染色反应,与POX染色基本一致,临床意义,与POX染色相似,二、,SBB,与,POX,区别：,1.,POX特异性高于SBB，而敏感性,低于SBB；,2.POX染色要求涂片新鲜，保持酶活 性，SBB染色可用陈旧涂片。,1.,特异性酯酶（,specific esterase,）,主要存在于粒细胞，又称“粒细胞酯酶”,氯乙酸,AS-D,萘酚酯酶（,NAS-DCE,）。,一、分类,四、酯 酶 染 色,2.,非特异性酯酶,(nonspecific esterase),单核、组织细胞中含量较多，粒细,胞、淋巴细胞中含量少，且氟化钠抑,制单核细胞中的非特异性酯酶，而不,抑制粒细胞、,淋巴细胞及其他细胞。,醋酸,AS-D,奈酚酯酶：,NAS-DAE,-,醋酸,奈酚酯酶：,-,NAE,-,丁酸奈酚酯酶：,-,NBE,酸性,-,醋酸,奈酚酯酶：,ANAE,(-NBE,敏感性不如,NAS-DAE,但特异性较之强,),（,一,）特异性脂酶染色,1.,氯乙酸,AS-D,萘酚酯酶染色,Naphthol AS-D chloroacetate esterase,1.,原理,氯乙酸,AS-D,萘酚,AS-D,萘酚,不溶性的有色,(,红,),沉淀。,NAS-DCE,几乎仅出现在粒细胞，其特异性高，,因此又称为“粒细胞酯酶”,NAS-DCE,重氮盐,(,坚牢蓝紫酱,),氯,乙酸,AS-D,萘酚酯酶染色,2.,正常血细胞的染色反应,粒系,(,酶活性不随细胞成熟而增强,),原粒（）或（,+,）,早幼粒,成熟中性粒细胞（,+,）,嗜酸性粒细胞,（,）或弱（,+,）,嗜碱性粒细胞（,+,）,单核细胞系统：,（）,肥大细胞：,（,+,）,淋巴细胞、浆细胞、幼红细胞、,巨核细胞、血小板：,（）,3.,临床意义,主要用于辅助鉴别急性白血病细胞类型：,急性粒细胞白血病,：,（,+,）,急性早幼粒细胞白血病：强（,+,）,急性单核细胞白血病：（）,急粒,-,单：粒细胞（,+,）单核细胞（）,急性巨核细胞性白血病：（）,急性淋巴细胞白血病：（）,原 理,：,非特异性脂酶在相应的,pH,环境中，,将基质液中相应底物水解，产生含萘酚,的物质，后者与重氮盐发生偶联反应，,形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质,内酶所在的部位。,（,二）非特异性脂酶染色,根据,pH,值的不同分为：,酸性：酸性,-,醋酸萘酚酯酶染色,(,ANAE),中性：,-,醋酸萘酚酯酶染色,(-NAE),醋酸,AS-D,萘酚酯酶染色,(,NAS-DAE),碱性：,-,丁酸萘酚酯酶染色,(-NBE),名称,pH,底物,生成物,重氮盐,(,产物颜色,),-,醋酸萘酚酯酶,(-NAE),中,-,醋酸萘酚,-,萘酚,坚牢蓝,B,棕黑,灰黑,醋酸,AS-D,萘酚酯酶,(AS-D NAE),中,醋酸,AS-D,萘酚,AS-D,萘酚,坚牢蓝,BB,蓝,-,丁酸萘酚酯酶,(-NBE),碱,-,丁酸萘酚,-,萘酚,坚牢紫酱,GBC,红,酸性,-,醋酸萘酚酯酶,(ANAE),酸,-,醋酸萘酚,-,萘,酚,六偶氮,付品红,红,1.,-,醋酸萘酚酯酶染色,（,-naphthol acetate esterase,，,-NAE,）,-,醋酸萘酚酯酶,（细胞内）,-,醋酸萘酚,（基质液中）,-,萘酚,重氮盐,（坚牢蓝,B,）,胞浆不溶性灰黑色,或棕黑色沉淀,水解,【,原理,】,【,结果判断,】,胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状沉淀为阳性。,-,醋酸萘酚酯酶染色,(,灰黑色、棕黑色,),-,醋酸萘酚酯酶染色,a:,单核,b:BPC c:,巨核,d:LC(+)e:,幼红,(-),氟化钠抑制试验,在基质液中加入适量,NaF,其余染色方法同上。,两种方法染色后用油镜计数,100,或,200,个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率或阳性积分。,氟化钠抑制率,=,抑制前阳性率或阳性积分,-,抑制后阳性率或阳性积分,抑制前阳性率或阳性积分,100%,A,图：急性单核细胞白血病,-NAE,染色,原始、幼稚单核细胞多呈强阳性,B,图：急性单核细胞白血病,-NAE,氟化钠抑制染色,原始、幼稚单核细胞阳性反应被氟化钠抑制,（与,A,图为同一标本）,A,B,【,临床评价,】,急单 急粒 急性早幼粒 急粒单 急淋,-NAE +,或,-,或,+,阳性,-,+,弱,+,NaF,被抑制 不被 不被抑制 部分被抑制,抑制 部分未被抑制,主要用于鉴别急性白血病类型,2.,临床意义,辅助鉴别急性白血病细胞类型,急单：单核细胞阳性，能被,NaF,抑制。,急粒：粒细胞弱阳性，不被,NaF,抑制。,M3,：强阳性，不能被,NaF,抑制。,M4,：部分阳性细胞能被,NaF,抑制，,部分阳性细胞不能被,NaF,抑制。,ALL,：原幼淋阴性或阳性，不能被,NaF,抑制。,【,正常血细胞染色反应,】,1.,单核细胞系统,原始单核细胞,分化差 阴性,分化好 阳性,幼稚及成熟单核细胞,阳性,被氟化钠抑制,2.,粒细胞系统,原粒细胞阴性或弱阳性,以下阶段为弱阳性,3.,淋巴细胞系统,多数阴性，少数弱阳性,不被氟化钠抑制,2.-,丁酸奈酚酯酶染色,-NBE,原理：,血细胞中,-NBE,在碱性条件下，基质液中的,-,丁酸奈酚水解，产生,-,奈酚，后者与坚牢酱紫,GBC,偶联，形成不溶性红色沉淀，定位于胞质内。,-NBE,染色反应,1.,粒系：各期（,-,）,2.,单核系：分化差的原单（,-,）；分化好的原 单（,+,）,幼单,成熟单核（,+,），可被,NaF,抑制,3.,淋巴系：,TC,、非,T,非,B,（,+,）,BC,（,+,）,4.,其他细胞：,巨核、有核红细胞、浆细胞（,-,）或弱（,+,）,组织细胞,(+),不被,NaF,抑制,3.,酸性,-,醋酸奈酚酯酶染色,ANAE,原理：,血细胞中的,酸性,-,醋酸奈酚酯酶（,ANAE,）在,pH,弱酸性（,pH5.8,）的条件下，可水解基质液中的,-,醋酸奈酚，产生,-,奈酚，进而与重氮盐六偶氮付品红形成不溶性红色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。,酸性,-,醋酸萘酚酯酶染色（弥漫性棕红色）,-M5,ANAE,染色反应,1.,单核系：强（,+,）,可被,NaF,抑制,2.,淋巴系：,TC,（,+,）,BC,（,-,）,3.,其他细胞：粒系（,-,）或弱（,+,）不,被,NaF,抑制,红系、巨核系（,-,）,4,.,酯酶双染色,在同一张涂片上进行两种酯酶染色,特异性酯酶,+,非特异性酯酶,对诊断急性粒,-,单细胞白血病有独特价值,-NAE,与,N,AS-DCE,红色,(,单,),-NBE,与,N,AS-DCE,兰色,(,粒,),骨髓涂片特异性酯酶（,CE,）和非特异性酯酶（,NAE,）的双酯酶染色显示，原始粒细胞胞浆呈蓝色,CE,阳性反应；而原始单核细胞胞浆呈棕色的,NAE,阳性反应。,NAS-DCE,：,M1,弱,(+)/M2(+)/M3,强,(+),，,M5/ALL(,),；,-NBE,：,M5(+)NaF,抑制，,M1/M2/M3/ALL(,),；,-NAE/NAS-DAE,：,M5,强,(+)NaF,抑制,M3,强,(+)/M1M2a/ALL(+)NaF,不抑制。,五、过碘酸,-,希夫反应,(,糖原染色,),（,periodic acid-Schiff reaction,，,PAS,）,双醛基,过碘酸,希夫试剂中,的无色品红,紫红色化合物,(,附于含多糖类,的胞浆内,),乙二醇基,(,多糖类物质含有,),氧化,【,原理,】,过碘酸是氧化剂，使含有乙二醇,基的多糖类物质,(,糖原、糖蛋白、糖脂、粘多糖等,),氧化，,形成双醛基。醛基与,Schiff s,液中的无色品红结合，使无色品红变成紫红色化合物，定位于含多糖类的细胞内。,一、原理,【,结果判断,】,阳性 胞浆内红色阳性物呈弥散状、颗,粒状或块状。,阴性 胞浆内无色或无颗粒,核淡绿。,1.,粒细胞系统：,（阳性逐渐增强）,原始粒,C,（）或（,+,）,早幼粒,C,成熟中性粒,C,（,+,）：,细颗粒均匀红色,嗜酸粒,C,：颗粒不着色，胞质呈红色。,嗜碱粒,C,：颗粒阳性，胞质不着色。,二、正常血细胞的染色反应,2.,单核细胞系统：分化差（）其他（,+,），,粗颗粒状。,3,.,淋巴细胞系统：多数（）少数（,+,），,粗颗粒或块状。,4.,红细胞系统：（），病理情况可（,+,）。,5.,巨核细胞系统：（,+,），颗粒状或块状。,6.,其它细胞：浆细胞（），巨噬细胞（,+,）,a,粒细胞、,b,巨核细胞、,c,单核细胞、,d,幼红细胞,三、结果判断,1.,粒细胞系统：,红色、弥散状。,各种细胞阳性反应强弱不同,2.,淋巴细胞系统：,粗颗粒状、小块状、大块状红色。,1,、,+2,、,+3,、,+4,、,+5,、,3.,红细胞系统：,均匀红色或块状,4.,单核细胞系统：,粗颗粒状,5.,巨核细胞和血小板：,颗粒状、块状。,1.,巨核细胞和血小板阳性,1.,帮助鉴别巨幼细胞性贫血和骨,髓增生异常综合征、红白血病,:,前者（），后两者（,+,）。,四、临床意义,急性淋巴细胞白血病,PAS,染色,原始、幼稚淋巴细胞均阳性，呈粗颗粒状阳性,110,急淋PAS阳性细胞,111,PAS阳性的幼红细胞,2.,帮助鉴别急性白血病的细胞类型：,急淋：（,+,）呈粗颗粒状或块状。,急粒：（,+,）细颗粒状或均匀红色。,急单：（,+,）细颗粒状，均匀分布，,有时胞质边缘颗粒较粗大。,3.,其他细胞：,骨髓转移性腺癌细胞细胞呈强阳性,霍奇金淋巴瘤,RS,细胞多呈阴性或弱阳性,戈谢细胞呈强阳性,尼曼,-,皮克细胞多呈阴性或弱阳性,CLL,ALL,六、,中性粒细胞碱性磷酸酶染色,（,neutrophilic alkaline phosphatase,，,NAP,）,磷酸萘酚钠,（基质中）,中性粒细胞胞浆中,NAP,磷酸钠,-,萘酚,重氮盐,（坚牢蓝盐,RR,）,紫黑色偶氮染料,（胞浆中）,水解,【,原理,】,Kaplow,偶氮偶联法,【,结果判断,】,胞浆中有紫黑色颗粒为阳性,(+,+,）,【,正常血细胞染色反应,】,中性成熟粒细胞阳性反应,NAP,主要存在于成熟的中性粒细胞胞质中。严重的化脓性感染时，晚幼阶段粒细胞也可见有阳性反应。,2.,其他细胞基本呈阴性反应,NAP,染色反应强度标准：,（）：胞质中无颗粒；,（,）：胞质含少量颗粒，约占,1/4,；,（）：胞质含中等量颗粒，约占,1/2,；,（）,：,胞质含较多颗粒，约占,3/4,；,（,）：胞质充满颗粒，无空隙。,2.NAP,积分值,计数,100,个成熟中性粒细胞（杆状和分叶）,分别记录其分级情况：,(-)0,分,(+)1,分,(+)2,分,(+)3,分,(+)4,分,阳性率 全部阳性反应细胞之和,积分值 各种阳性程度细胞的分值之和,NAP,染色结果报告包括阳性率和积分值。,阳性率：指计数,100,个中性成熟粒细胞，其阳性细胞的数量即为阳性率；积分值：指计数,100,个中性成熟粒细胞，不同阳性程度细胞数量乘以其阳性程度之和即为积分值，其计算公式为：积分值,=(,),数量,1+(,),数量,2+(,),数量,3+(,),数量,4,。,2.,NAP,染色结果报告,：,例：,4,分 占,20%,4,20=80,分,3,分 占,40%,3,40=120,分,2,分 占,18%,2,18=36,分,1,分 占,10%,1,10=10,分,0,分 占,12%,0,12=0,分,阳性率,88%,积分,=246,分,0级 0 胞浆呈原色，无颗粒。,级 +胞浆呈浅灰色，细小蓝黑色颗粒占胞浆面积的,25%,50%,。,级 +胞浆呈棕色片状沉淀，小到中等颗粒约占胞浆面积的,50%75%,。,级 +胞浆充满棕黑色沉淀，分布均匀，中到大颗粒占胞浆面积的75,%,100,%,。,级 +胞浆充满深黑色致密的团块状沉淀，甚至遮盖胞核，中到大颗粒占胞浆面积的,l00,%,。,3.,参考范围：,中性粒细胞,NAP,阳性率：,40%,NAP,积分为：,30130,分,【,临床评价,】,（,1,）细菌性感染与病毒性感染,（尤其是化脓性感染）,明显增加 无明显变化,四、临床意义,1.,生理性变化：应激状态、妊娠、新生儿等。,2.,病理性变化：,(1)NAP,：细菌性感染、慢粒,(,加、急,),、急,淋、慢淋、恶性淋巴瘤、转移癌、,骨纤、真红、再障、原发性血小,板增多症、使用糖皮质激素等。,3.,疾病的鉴别：,(1),类白与慢粒,:,前者,后者,(2),慢粒慢性期与,慢性中性粒细胞白血病：前者,后者,(3),细菌性感染与病毒性感染,/,寄生虫感染：,前者,后两者正常或,(2)NAP,：慢粒,(,慢,),、,PNH,、,MDS,、恶组等。,(6),恶组与反应性组织细胞增多症：,前者,后者常,(7),急性白血病类型：急性髓细胞,急淋,(4),慢粒病情观察：,(5),再障与阵发性睡眠性血红蛋白尿：,前者,后者,CML,类白,(2,）类白血病反应与慢性粒细胞白血病,明显增加 明显下降且常为零分，,缓解时又上升到正常,五、应用评价,NAP,染色有多种检测方法，国际标准化委员会推荐,Kaplow,萘酚,AS-BI,磷酸钠法和,Tomonaga,萘酚,AS-MX,磷酸钠法。钙,-,钴法试剂成本低廉，操作繁琐，反应,时间长，临床上逐步被偶氮偶联法取代，阳性产物色,泽鲜明、定位精确，尤其以萘酚,AS-BI,磷酸钠法最为,广泛使用，利于评定,NAP,活性强度的分级。常用重氮,盐有坚牢蓝,RR,、坚牢蓝,BB,、坚牢紫酱等，不同偶联,有不同的灵敏度。,七、酸性磷酸酶染色,(acid phosphatase,，,ACP),一,、原理,1.Gomori,硫化铅法,棕黑色,pH5.0,2.,偶氮偶联法,(,常用,),六偶氮付品红,棕红色沉淀,磷酸萘酚,AS-BI,萘酚,AS-BI,棕红色,沉淀,ACP,Ph5.0,重氮盐,3.,抗酒石酸酸性磷酸酶染色（一组同工酶）,两张相同标本涂片,+,两份基质液,(,加,L-,酒石酸，不加,L-,酒石酸,),ACP,染色,耐,L-,酒石酸,两份（,+,）,不耐,L-,酒石酸,不加,L-,酒石酸（,+,）,加,L-,酒石酸（）,二、正常血细胞染色反应,粒细胞、单核细胞、淋巴细,胞、巨核细胞、血小板、浆细胞、,巨噬细胞均呈阳性反应。,三、临床评价,1.,诊断多毛细胞白血病,多毛细胞白血病：,（,+,），不被,L-,酒石酸抑制。,慢淋和恶性淋巴瘤细胞,:,（,+,），被,L-,酒石酸抑制。,多毛细胞白血病,慢性淋巴细胞白血病,抗酒石酸酸性磷酸酶染色,酸性磷酸酶染色,多毛细胞白血病,多毛细胞白血病 抗,L-,酒石酸,ACP,阳性,2.,鉴别戈谢,(Gaucher),细胞和尼曼,-,匹,克,(Niemann-Picks),细胞：,前者（,+,）后者（）,3.,鉴别,T,淋巴细胞和,B,淋巴细胞：,前者（,+,）后者（）,Gaucher,s cell,八,.,细胞化学染色综合分析,四种常见急性白血病的细胞化学染色结果,项目,M3 M1/M2 M5 ALL,POX,强阳性 阳性,/,阴性 弱阳性,/,阴性 阴性,NAS-DCE,强阳性 阳性,/,阴性 多阴性 阴性,-NAE,强阳性 阴性,/,弱阳性 阳至强阳性 阴性,/,阳性,-NAE+NaF,不抑制,不抑制 抑制 不抑制,-NBE,阴性 阴性 阳性 阴性,-NBE+NaF,抑制,急非淋 脂酶染色,NAP,：类白与慢粒、感染类型、再障与,PNH,、慢粒分期；,ACP,：毛白、,T,细胞,/B,细胞、脂代谢障碍；,PAS,：巨幼贫与,MDS-RA,、红白血病；,铁染色：缺铁贫、铁粒幼贫、,MDS-RAS,。,急淋,POX,急性白血病,152,PAS:,阳性，颗 粒状,NAP:,积分增高,PAS:,大小不 定块状阳性,NAP:,积分增高,L1,、,L2,、,L3,形态区分,M7,，可做免疫分型,ANAE+NaF,抑制,M5,：阳性强阳性，抑制率,50,M4:,阳性，抑制率,50,（形态、做酯酶双染）,NAP:,积分减低,涂片可见较多幼稚细胞,POX,染色,阴性（阳性率,3%),阳性，强阳性,阴性或弱阳性,（部分阴性，部分阳性）,PAS+NAP,M2,、,M3,最强,M1,、,M5,最弱,（,CE,阳性，形态区分）,NAP:,积分减低,CE,1.,常用的化学反应种类不包括下列哪种,A.,偶氮偶联法,B,.,联苯胺法,C.,普鲁士蓝反应,D,.,中和反应,E,.,希夫反应,2.,临床上辅助判断急性白血病类型首选最重要的细胞化学染色是,A.,特异性酯酶,B,.,非特,异性酯酶,C,.,过氧化物酶,D.,中性粒细胞,碱性磷酸酶,E.,酸性磷酸酶,3.,特异性及非特,异性酯酶的,染色方法是,A.,偶氮偶联法,B,.,联苯胺法,C.,普鲁士蓝反应,D,.,中和反应,E,.,希夫,反应,4.,鉴别小原粒白血病与急淋，下列首选,试验是,A,.,酯酶染色,B,.,糖原染色,C,.,过氧化物酶染色,D.,碱性磷酸酶染色,E,.,酸性磷酸酶染色,5.,非特,异性酯酶染色,阳性，且阳性反应能被氟,化钠抑制,见于,A.,急性粒细胞白血病,B,.,急性淋巴细胞白血病,C.,急性单核细胞白血病,D,.,急性早幼粒细胞白血病,E.,慢性粒细胞白血病,6,辅助,判断急性白血病类型的细胞化学染色不,包括,A.,过氧化物酶,染色,B.,酯酶染色,C.,中性粒细胞碱性磷酸酶染色,D.,铁染色,E.,糖原,染色,1,掌握常用细胞化学染色方法的结果判断和临床意义。,2,熟悉常用细胞化学染色方法的原理,。,本章目的要求,思考题：,1.,铁染色的临床意义,2.,POX,染色的原理及临床意义,3.,PAS,染色对不同类型急性白血病的鉴别,4.NAP,积分增加和减少的临床意义,5.,酯酶染色的临床应用,完,