药品微生物实验室管理学习教案.pptx

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,11/7/2009,#,#,单击此处编辑母版标题样式,会计学,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,会计学,1,药品(yopn)微生物实验室管理,第一页，共28页。,微生物类别(libi),类,别,细,菌,真,菌,霉,菌,及,酵,母,菌,病,毒,原,生,动,物,藻,类,第1页/共27页,第二页，共28页。,特点：,体积小、结构简单、,分布广、种类(zhngli)(1020万种)、,繁殖快、易变异。,特,点,体,积,小,结,构,简,单,分,布,广,种,类,多,繁,殖,快,易,变,异,微生物概述(i sh),第2页/共27页,第三页，共28页。,芽孢(y bo)：,微生物所需的营养物质,水分,PH,值,温度,空气,碳源,氮源,微量元素,营养物质,蛋白质受热,不易变性（耐热）,含水,量少,细菌的,休眠体,芽孢（孢子）,第3页/共27页,第四页，共28页。,药品中微生物的主要(zhyo)污染途径,1.水系统（饮用水、纯化水、注射用水、纯蒸汽(zhn q)）：过滤净化后检测微生物、细菌内毒素。,2.原辅料：植物性、动物性（风险最大）；2020版药典中药饮片增加耐热菌、沙门菌。,3.包装材料：安瓿、PVC、PTP、塑料瓶。检测微生物,4.,第4页/共27页,第五页，共28页。,药品(yopn)中微生物的主要污染途径,4.生产人员（最不可控因素）：咳嗽、喷嚏、动作幅度大、皮肤掉屑；测手指、洁净服。,5.气体：压缩空气、惰性气体；控制微生物或无菌。,6.生产环境：洁净区密封、空气过滤、定期消毒；测沉降菌、浮游(fyu)菌、悬浮粒子（A、B、C、D级）。验证和日常监测,7.设备及配件：清洁、消毒、灭菌；清洁验证,第5页/共27页,第六页，共28页。,影响药品微生物检验(jinyn)结果的因素,1.样品中的微生物可能分布不均匀。,2.微生物检验方法误差大。,3.检验方法未经过验证。,4.实验室因素：人员、培养基、试剂(shj)、菌种、环境、设备、样品。,第6页/共27页,第七页，共28页。,人员(rnyun)要求,1.操作人员具备微生物学或相近专业知识的教育背景。,2.培训：职责培训、岗位操作规程的培训、设备操作培训、检验技术的培训（包括无菌操作、培养基制备、消毒、灭菌、注平板、菌落计数、菌种传代、菌种保藏、微生物检查方法(fngf)、微生物鉴定基本技术）。,3.实验室安全方面的培训（保证自身安全、防止实验室被污染）。,4.对微生物管理人员的培训：实验室安全、实验室结果的评估、数据偏差的调查。,第7页/共27页,第八页，共28页。,培养基管理(gunl),培养基影响微生物试验结果的因素(yn s),1.供应商：稳定、资质合格、业内口碑好、供货能力强。,2.培养基的接收,2.1 查看培养基名称、批号、厂家、生产日期、有效期、执行标准是否符合要求。,2.2 在每瓶培养基瓶上贴标签、编号（唯一的标识）、批号、接收日期、接收人、开瓶日期、开瓶后的有效期。,2.3 培养基接收记录。,3.培养基的储存,按照供应商提供的方法保存，多数是避光，个别厂家要求阴凉干燥（低于20）。,第8页/共27页,第九页，共28页。,培养基管理(gunl),4.培养基的适用性检查（药典要求）,4.1 如果培养基的配制和灭菌程序经过验证，那么同一批脱水培养基适用性检查可只做1次。,4.2 如果培养基的配制和灭菌程序未经过验证，那么每一批灭菌培养基均要进行适用性检查。,培养基的配制和灭菌方法的验证（存储(cn ch)期）,包括：灭菌前后PH值、外观性状；灭菌后的无菌性检查、灵敏度检查；保存几周后的无菌、灵敏度检查。,第9页/共27页,第十页，共28页。,培养基管理(gunl),4.3 适用性检查,购买对照培养基,购买菌种,枯草、白念、黑曲霉接种于计数用培养基,金葡、铜绿、枯草、生孢、白念、黑曲霉接种于无菌检查用培养基,依据药典附录1105试验操作后判断(pndun)是否合格。,以下是三种培养基适用性检查要求（计数用培养基、无菌检查用培养基、选择性培养基）,第10页/共27页,第十一页，共28页。,计数用培养基适用性检查(jinch)要求,计数用培养基,非选择性,固体培养基,非选择性,液体培养基,a,被检培养基菌落数，,对照培养基菌落数，,在,0.52,之间,b,菌落形态大小与,对照培养基上的,菌落一致,c,倒,5,块平板，培养,温度与实际操作一致,培养最长时间,应无菌生长,a,被检液体培养基管,与对照培养基管比较,试验菌应,生长良好,b,取最小包装的,2,瓶,放在实际运用中的,温度培养最长时间,第11页/共27页,第十二页，共28页。,无菌检查(jinch)用培养基适用性检查(jinch)要求,无菌检查用培养基,无菌性检查,灵敏度检查,每批取不少于,5,瓶培养，,应无菌生长,空白对照管,无菌生长,加菌的培养基管,生长良好,第12页/共27页,第十三页，共28页。,选择性培养基适用性检查(jinch)要求,选择性培养基,（控制菌检查用）,促生长能力测试,抑制生长能力测试,指示特性,固体：,被检培养基与对照,培养基上生长的菌落,大小、形态一致,接种的试验菌,不得生长,被检培养基上,试验菌生长的菌落,大小、形态特征、,指示剂反应与对照,培养基一致,液体：,规定的温度、最短的,培养时间、与对照培养,基管比较、被检管试验,菌,生长良好,第13页/共27页,第十四页，共28页。,用于环境(hunjng)监控的培养基管理,市售：双层包装和终端灭菌,如果不能采用终端灭菌的培养基，在使用前进行100的预培养，防止出现假阳性。,沉降菌碟暴露时间的验证,选择在换气次数大的需要监控的操作间，培养基加菌暴露若干小时,培养后计算菌的回收率大于70。,暴露多长时间不干裂、促生长(shngzhng)能力良好）。,包装形式：试管、三角瓶（密封）,贮存房间的条件,取样计划：取样时间点、测试项目（PH值、无菌、适用性）,加菌液0.1ml，不能加1ml。,第14页/共27页,第十五页，共28页。,菌种的管理(gunl),菌种的来源,CMCC中国,复活 标准贮备菌株（0代）解冻转种 工作菌株,（低温冷冻干燥）（不得重新冷冻）,TACC美国,1代：是指将活的培养物接种到微生物生长(shngzhng)的新鲜培养基中培养。,工作菌株不可替代标准菌株,第15页/共27页,第十六页，共28页。,菌种的管理(gunl),涉及(shj)菌种管理的记录,标准菌种的申购记录。,从标准菌株到工作菌株的操作SOP及记录。,菌种的传代记录。,菌种的检查记录（确认记录）。,菌种的灭活、销毁记录。,第16页/共27页,第十七页，共28页。,菌种的管理(gunl),菌种的接收,1.检查外观(wigun)是否完好。,2.核对菌种名称、编号。,3.核对接收时是否在合适的环境中。,4.核对菌种是否在有效期范围内。,5.给每株菌一个独立的编号，不能重复。,第17页/共27页,第十八页，共28页。,菌种的管理(gunl),菌种的保存,1.标准(biozhn)菌株：超低温冷冻（低于-30）有效期一年；,（-70以下冷冻保藏）有效期三年。,2.斜面菌种：28冷藏，有效期36个月。,3.菌液：,室温下，2小时内使用。,28，24小时内使用（黑曲霉孢子悬液28，贮存期要验证）,第18页/共27页,第十九页，共28页。,菌种的管理(gunl),菌种的使用,-斜面菌种只允许一次使用,菌种的传代,1.将微生物转接到新的培养基，进行培养获得(hud)新鲜菌种的过程。,2.购买的标准菌株必须经过传代后使用（在5代以内）。,第19页/共27页,第二十页，共28页。,环境(hunjng)的管理,硬件：阳性菌实验室、培养室、贮藏室（区）、试验结果观察区、培养基及实验用具准备区、灭菌区、样品接收区、标准(biozhn)菌株贮藏室（区）、污染物处理区。,以上区域要有标识（降低交叉污染）。,无菌检查：B级背景下的A级单向流洁净区域或隔离系统。,微生物限度检查：不低于D级背景下的B级单向流空气区域。,第20页/共27页,第二十一页，共28页。,环境监测(hun jn jin c),1.空调验证：高效过滤器完整性、气流组织、空气流速（平均(pngjn)风速）、换气次数、压差、温度和相对湿度（测试应在模拟正常检测条件下进行）,依据药典附录9205药品洁净实验室微生物监测和控制指导原则,2.日常监测：,异常情况要进行分析，不仅仅是数数而已。,区域,周期,粒子,沉降菌,浮游菌,表面微生物（含手套）,无菌隔离系统,每次实验,三月,每次,三月,每次,A,级,每次实验,三月,每次,每月,每次（洁净服）,B,级,每周一次,半年,每周,三月,每周（洁净服）,C,级,每季一次,半年,三月,半年,三月,D,级,每半年一次,半年,半年,半年,半年,监测(jin c)项目,第21页/共27页,第二十二页，共28页。,洁净(jijng)区灭菌和消毒,A/B级洁净区使用无菌的或经无菌处理的消毒剂或清洁剂。,化学消毒剂应验证消毒效果（不止一种）。,清洁剂、消毒剂在规定(gudng)的效期内使用。,常用灭菌法,干热灭菌法：火焰法（酒精灯）、烘箱2501h。,湿热灭菌法：12130min。,第22页/共27页,第二十三页，共28页。,设备设施(shsh)管理,1.设备的确认、检定（校准）每年一次，注意连续性。,2.设备使用日志（使用即填）,3.设备定期(dngq)清洁和消毒（水浴锅、培养箱、冰箱、生物安全柜）。,4.无菌器具要有明确的标识（已灭菌、未灭菌）。,5.温度计的校准。（注意量程、精度）,6.天平、标准砝码的校准；移液管的校准。,7.悬浮粒子计数器、浮游菌采集器的校准。,8.紫外灯消毒效果的定期(dngq)检测。,第23页/共27页,第二十四页，共28页。,操作方法注意(zh y),1.操作SOP中明确的检验方法要经过方法学验证，而且和验证方案报告(bogo)、省药检所的方法学复核意见中的描述一致,2.操作方法应避免损伤供试品中污染的微生物。,3.对抑菌性较强的供试品，尽可能选用薄膜过滤法。,第24页/共27页,第二十五页，共28页。,操作方法注意(zh y),微生物的数据修约原则,供试液的制备（包括方法学验证）,0.51 1X10=10cfu,取样量,1+9,没有代表性,0.5X10=5cfu,建议：,10+90,0.5,：,2,个平皿的平均数,10,：,稀释倍数,第25页/共27页,第二十六页，共28页。,共同努力，发现问题(wnt)，提升管理水平！,谢谢(xi xie)各位！,第26页/共27页,第二十七页，共28页。,内容(nirng)总结,会计学。第2页/共27页。2020版药典中药饮片增加耐热菌、沙门菌。3.实验室安全方面的培训（保证自身安全、防止实验室被污染）。第8页/共27页。4.1 如果培养基的配制和灭菌程序经过(jnggu)验证，那么同一批脱水培养基适用性检查可只做1次。无菌检查用培养基适用性检查要求。培养时间、与对照培养。从标准菌株到工作菌株的操作SOP及记录。菌种的检查记录（确认记录）。无菌检查：B级背景下的A级单向流洁净区域或隔离系统。谢谢各位,第二十八页，共28页。,