紫外吸收→鉴别含量测定.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,新疆医科大学 药物分析教研室,第六章,芳酸类非甾体抗炎药物分析,Analysis of Aromatic carboxylic acids,药分分析教研室,Chemical structure&feature,Identification,Detection of specific impurities in,Aspirin,Sodium,aminosalicylate,&,Clofibrate,Assay,第一节,典型药物的结构与性质,苯甲酸类,水杨酸类,其他芳酸类,一、苯甲酸类,甲芬那酸,mefenamic,acid,丙磺舒（,pKa3.4,）,代表药物,甲芬那酸,mefenamic,acid,丙磺舒（,pKa3.4,）,性质,酸性 含量测定,+,FeCl,3,赭色(鉴别),紫外吸收(鉴别、含量测定),二、水杨酸类,二、水杨酸类,代表药物,二、水杨酸类,代表药物,二、水杨酸类,代表药物,贝诺酯,二、水杨酸类,性质,1、酸性,：,水杨酸类基本结构为邻羟基苯甲酸，易形成分子内氢键，增强羧基中氧氢键的极性，酸性强于苯甲酸。含量测定,2、吸收光谱特征：苯环及特征取代基,鉴别,含量测定,二、水杨酸类,性质,3、与,Fe,3+,反应：,特征鉴别反应,具有酚羟基结构，弱酸环境与,Fe,3+,生成紫色配位化合物。,4、水解反应：,杂质检查,水解,水杨酸酯类,游离水杨酸,三、其他芳酸类,布洛芬,ibuprofen,酰胺基,:,水解后芳伯氨基特性,酚羟基,:,与,FeCl,3,显色,水解产物反应,较弱酸性,紫外、红外吸收,对乙酰氨基酚,(,paracetamol,),第二节 鉴别试验,鉴 别 反 应,与铁盐反应,重氮化-偶合反应,氧化反应,水解反应,UV,IR,TLC,HPLC,紫堇色,T.S.,FeCl,3,pH46,一、,与铁盐反应,（蓝紫色）,芳香第一胺类鉴别反应,具芳伯,氨基或潜在芳伯氨基的药物,二、重氮化偶合反应,NH,2,盐酸或硫酸加热水解,NaNO,2,/HCl,碱性,-,萘酚,有色偶氮染料（红色,),对乙酰氨基酚：潜在芳伯氨基,二、重氮化偶合反应,随即变为,棕绿色,三、,氧化反应,四、,水解反应,六、紫外分光光度法,药物,溶剂,max,/,min,E,值,A,值,A1/A2,贝诺酯,无水乙醇,240,730-760,羟苯乙酯,乙醇(5,g/ml),259,0.48,丙磺舒,盐酸-乙醇(20,g/ml),225,249,0.67,布洛芬,0.4%,NaOH,(,0.25,mg/ml),265,273;,245,271,甲芬那酸,盐酸-乙醇,(20,g/ml),279,350,0.69-0.74,0.59-0.60,1.15-1.30,对氨基水杨酸钠,磷酸盐缓冲液,265,299,1.50-1.56,七、红外分光光度法,峰位（,cm,-1,）,峰强度,归属基团或化学键,37503000,强,O-H,、,N-H,(,胺基,羟基),30002700,弱强,C-H,（,烷基）、-,CHO,33003000,弱中等,CH,、,=CH,、,Ar,-H,24002100,弱中等,CN,19001650,强,C=O(,醛,酮,羧酸及衍生物),16701500,中等强,C=C,、,C=N,、,N-H,13001000,强,C-O,（,醇,酚,醚,酯,羧酸）,1000650,中等强,不同取代形式双键、苯环,八、薄层色谱法,制剂鉴别：辅料干扰，分离后鉴别,比移值相同,九、高效液相色谱法,保留时间相同,第三节 特殊杂质检查,阿司匹林中特殊杂质的检查,对乙酰氨基酚特殊杂质的检查,甲芬那酸中特殊杂质的检查,二氟尼柳中特殊杂质的检查,（一）合成工艺,一、阿司匹林中特殊杂质检查,一、阿司匹林中特殊杂质检查,（二）检查,水杨酸,有关物质,淡黄、红棕、深棕色,为合成中间体和水解产物,（二）检查-水杨酸,方法：,高效液相色谱法,应用范围：,原料、片剂、肠溶片、肠溶胶囊等,（二）检查-水杨酸,酚,水杨酸苯酯,乙酸苯酯,乙酰水杨酸苯酯,检查,酚、苯酯类杂质。,方法,高效液相色谱法(梯度洗脱),。,（二）检查-有关物质,对乙酰氨基酚,特殊杂质：中间体、副产物及分解产物（例：对氨基酚、对氯苯乙酰胺、,O-,乙酰基对乙酰氨基酚、偶氮苯、氧化偶氮苯、苯醌和醌亚胺等）,对氨基酚的检查,二、,对乙酰氨基酚中的特殊杂质,（一）合成工艺,1,、对氨基酚及有关物质,乙酰化不完全或贮藏不当引起水解毒性较大并有色泽,检查方法：,高效液相色谱法。,注：对氨基酚对照溶液不稳定，应临用前新鲜配制。,二、,对乙酰氨基酚中的特殊杂质,2,、对氯苯乙酰胺,以对氯苯乙酰胺为对照品，,HPLC,限度检查。,（二）检查,（一）合成工艺,邻-氯苯甲酸,2，3-二甲基苯胺,甲芬那酸,三、甲芬那酸中特殊杂质的检查,（二）检查,2,3-,二甲基苯胺的检查,方法：高效液相色谱法,+,偶合,Cu,乙酰化,(CH,3,CO),2,O,AlCl,3,氧化,H,2,O,2,水解,OH,-,/H,+,羧化,CO,2,CH,3,ONa,（一）合成工艺,四、二氟尼柳中特殊杂质的检查,（二）检查,正相,TLC,检查有关物质,A,：,供试品溶液：本品+甲醇10,mg/ml,对照溶液：50,g,/ml,甲醇溶液,方法：照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5,l,，,分别点于同一硅胶,GF,254,薄层板上，以正己烷-二氧六环-冰醋酸(85:10:5)为展开剂，展开，晾干，置紫外光灯(254,nm),下检视，供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较，不得更深。,反相,HPLC,检查有关物质,B,供试品溶液与对照溶液：有关物质,A,项,色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水-甲醇-乙腈-冰醋酸(55:23:30:2)为流动相；检测波长为254,nm,。,理论板数按二氟尼柳峰计算不低于2000。,精密量取对照溶液20,l,注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的2025,精密量取供试品溶液与对照溶液各20,l,，,分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍,供试品溶液的色谱图中如有杂质峰，各杂质峰面积的和不得大,于对照溶液主峰面积。,第四节,含量测定,酸碱滴定法,（以阿司匹林为例）,双相滴定法(,以苯甲酸钠为例),紫外分光光度法,(,以对乙酰氨基酚为例,),HPLC,法(,阿司匹林栓剂),（以阿司匹林为例）,直接滴定法,水解后剩余滴定法（,USP,）,两步滴定法,一、酸碱滴定法,溶剂：中性乙醇,乙醇：溶解,ASA,；,防止,ASA,在水溶液中滴定过程水解,中性乙醇：对指示剂(酚酞)而言为中性，可消除滴定误差,指示剂：酚酞,用,NaOH,标准溶液直接滴定。,直接滴定法,原理,ChP,用于阿司匹林原料药的测定,优点：简便、快速,缺点：酯键水解干扰（不断搅拌、快速滴定）,酸性杂质干扰（如水杨酸）,适用条件：不能用于含水杨酸过高或制剂分析，,只能用于合格原料药的含量测定,应用范围：水杨酸、双水杨酯、丙磺舒、布洛芬等,直接滴定法,利用阿司匹林分子中的酯键，先加过量定量的,NaOH,溶液使之水解，然后用,H,2,SO,4,滴定剩余的,NaOH,，,同时做空白。,水解后剩余滴定法,（,USP,）,过量定量,原理,USP29,方法：取本品约1.5,g,，,精密称定，精密加入,NaOH,滴定液(0.5,mol/L)50.0ml,，,水浴上煮沸1,0min,，,放冷，以酚酞为指示剂，用,H,2,SO,4,液(0.25,mol/L),滴定剩余的,NaOH,，,并将滴定结果用空白试验校正。每1,ml,的,NaOH,液(0.5,ml/L),相当于45.04,mg,的,C,9,H,9,O,4,水解后剩余滴定法,（,USP,）,水解后剩余滴定法,（,USP,）,计算公式,特点,优点：消除了酯键水解的干扰,缺点：酸性杂质干扰,ChP,用于阿司匹林片剂的含量测定,两步滴定法,阿司匹林片剂中加稳定剂：酒石酸、枸橼酸,制剂过程产生水解产物：水杨酸、醋酸,消耗,NaOH,测定结果偏高,采用两步滴定法测定片剂中阿司匹林含量,第2步,水解与测定，采用剩余滴定法,第1步：,NaOH,中和所有的酸：,ASA,，,CA,，,TA,，,SA,，,HAc,放冷后，用,H,2,SO,4,滴定液滴定剩余的,NaOH,V,；,空白滴定消耗,H,2,SO,4,V,0,；,两步滴定法,Ch.P,.,阿司匹林片,取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于阿司匹林0.3,g),，,置锥形瓶中，加中性乙醇(对酚酞指示剂显中性)20,ml,，,振摇使,ASA,溶解，加酚酞指示液3滴，滴加,NaOH,液(0.1,mol/L),至显粉红色，再精密加,NaOH,液(0.1,mol/L)40ml,，,置水浴上加热15,min,，,并时时振摇，迅速放冷至室温，用,H,2,SO,4,液(0.05,mol/L),滴定，并将滴定的结果用空白试验校正,每1,ml,的,NaOH,液(0.1,mol/L),相当于18.02,mg,的,C,9,H,8,O,4,两步滴定法,特点,消除了酸性杂质的干扰,降低了酯键水解的干扰,计算公式,两步滴定法,片粉重 0.5312,g,标示量 0.1,g,V 3.02ml,V,0,20.18ml,例,：称取10片重 1.8240,g,C,NaOH,0.1032mol/L,C,0.05120mol/L,直接滴定法,水解后,剩余滴定法,两步,滴定法,优点,操作简便,无水解干扰,结果准确，避免了游离酸及片剂中稳定剂的干扰,缺点,游离酸不合格时结果偏高,不能完全排除游离酸干扰,Ch.P,氯贝丁酯的,Assay,采用两步滴定法,酸碱滴定法小结,苯甲酸钠的测定,有机酸碱金属盐类的常用测定方法，在水和与水不相混溶的有机溶剂（乙醚）中用标准酸进行滴定。,二、双相滴定法,苯甲酸钠易溶于水，水溶液呈碱性，可用酸滴定,滴定过程析出的苯甲酸微溶于水，使溶液浑浊，与苯甲酸钠构成缓冲对使终点,pH,突跃不明显，干扰终点的正确判断。,因此，利用,苯甲酸能溶于有机溶剂,的性质，采用双相滴定法,二、双相滴定法,水-乙醚,原理,二、双相滴定法,水层,(,苯甲酸钠),苯甲酸钠置分液漏斗,水25,m1,乙醚50,ml,甲基指示液2滴,水层呈橙黄色,HCl,0.5,mol/L,乙醚层,(苯甲酸),盐酸滴定液滴定,随滴随振摇,水层显橙红色,分出,H,2,O,层,乙醚层用,H,2,O 5ml,洗涤，洗液合并,水层加乙醚20,ml,，,HCl,继续滴定,至水层显持续的橙红色,直接紫外分光光度法,柱分配色谱-紫外分光光度法,三、紫外分光光度法,吸收系数法：对乙酰氨基酚,标准对照法：二氟尼柳胶囊,三、紫外分光光度法,直接紫外分光光度法,【,含量测定,】,取本品约,40mg,，精密称定，置,250ml,量瓶中，加,0.4%,氢氧化钠溶液,50ml,溶解后，加水至刻度，摇匀，精密量取,5ml,，至,100ml,量瓶中，加,0.4%,氢氧化钠溶液,10ml,，加水至刻度，摇匀，照紫外可见分光光度法（药典,Chp2005,版附录,A,），在,257nm,的波长处测定吸光度，按,C,8,H,9,NO,2,的吸收系数（）为,715,计算，即得。,对乙酰氨基酚在,257nm,波长处有最大吸收，中国药典采用百分吸收系数（）法，测定对乙酰氨基酚的含量。,例：对乙酰氨基酚、片剂、咀嚼片、注射液、栓剂、胶囊、颗粒剂,吸收系数法,阿司匹林胶囊的含量测定,上样：样品的氯仿溶液,冲洗：氯仿（弃去）,洗脱：冰,HAc-CHCl,3,测定：280,nm,计算：对照品比较法,碳酸氢钠的作用：使阿司匹林和水杨酸均成钠盐保留在柱上。,冰,HAC,作用：解吸,柱分配色谱-紫外分光光度法,柱分配色谱-紫外分光光度法,水杨酸的限量测定,样品的,氯仿溶液,冲洗：氯仿分次洗（阿司匹林）,洗脱：冰,HAc,+,乙醚（解吸）,洗脱：氯仿（水杨酸）,测定：306,nm,，,A,样,A,对,限量：以阿司匹林标示量计，允许水杨酸的量为0.75%,对照溶液75,g10ml/50ml,样品液100,mg/50ml,若有少量,FeCl,3,被冲洗下来，色带变黄，影响结果，磷酸可与,Fe,3+,形成不溶性磷酸铁而避免干扰。,与水杨酸形成紫色配位物，使水杨酸保留在柱上。,高浓度尿素的存在可使配位物在柱上的移动变慢，谱带较窄,阿司匹林栓剂采用,HPLC,法测定含量,色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶（,ODS,）,流动相：乙腈-四氢呋喃,-,冰醋酸,-,水（,20:5:5:70,）,检测波长：2,76nm,系统适用性试验：,n,按阿司匹林应不低于,3000,，,R,阿司匹林、水杨酸的分离度应大于1.5.,四、,HPLC,法,C,样,=（,A,样,/,A,标,）,C,标,溶液配制：,对照品溶液：阿司匹林适量,，,用1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并稀释制成每,ml,约含,0.1mg,的溶液,.,供试品溶液：取供试品适量，精密称定，（相当于阿司匹林0.1,g,），,置,50ml,量瓶中，加,1%,冰醋酸无水甲醇溶液溶解并稀释至刻度，取其续滤液5,ml,，,置100,ml,量瓶中，用1%冰醋酸无水甲醇溶液溶解并稀释至刻度，取,10,微升注入高效液相色谱仪,。,C,样,稀释倍数,平均粒重,称样量,标示量,100%,B%,=,对氨基水杨酸钠的法定方法,-,重氮化法,五、重氮化法,思考题,根据阿司匹林的合成工艺及化学结构，说明阿司匹林特殊杂质检查项目的制订依据与检查原理。,中国药典对乙酰水杨酸片含量测定为什么采用两步滴定法？,试述柱分配层析法检查阿司匹林片剂中游离水杨酸的方法和原理。,4.,用化学法区别乙酰水杨酸、水杨酸、苯甲酸？,例15,A,两步酸碱滴定法,B,直接酸碱滴定法,C,两者皆是,D,两者皆不是,1.苯甲酸钠的测定,2.,氯贝丁酯的测定,3.,盐酸的测定,4.,酸碱滴定法,5.,阿司匹林片的测定,D,A,B,C,A,例6.,采用直接酸碱滴定法测定阿司匹林的含量时，已知阿司匹林的分子量为180.2，所用氢氧化钠滴定溶液的浓度为0.1,mol/L,，,请问1,ml,氢氧化钠滴定溶液相当于阿司匹林的量应是,A.180.2mg B.180.2g,C.18.02 mg D.1.802mg E.9.01mg,（,C,）,例7.阿司匹林加碳酸钠试液加热后，再加稀硫酸酸化，此时产生的白色沉淀应是,A.,苯酚,B.,乙酰水杨酸,C.,水杨酸,D.,醋酸钠,E.,醋酸苯酯,（,C,）,例8.水杨酸与三氯化铁试液生成紫堇色产物的反应，要求溶液的,pH,值是,A)10.0 B)2.0 C)7,8 D)4,6 E)2.0,0.1,（,D,）,例9.两步滴定法测定阿司匹林片或阿司匹林肠溶片时，第一步滴定反应的作用是,A.,测定阿司匹林含量,B.,消除共存酸性物质的干扰,C.,使阿司匹林反应完全,D.,便于观测终点,E.,有利于第二步滴定,（,B,）,例10,.,对氨基水杨酸钠中的特殊杂质是,A.,水杨酸,B.,间氨基酚,C.,氨基酚,D.,苯酚,E.,苯胺,例11.能用与,FeC1,3,试液反应产生现象鉴别的药物有,A,苯甲酸钠,B,水杨酸,C,丙酸睾酮,D,对乙酰氨基酚,E,氢化可的松,（,B,）,（,ABD,）,例12.采用双相滴定法测定苯甲酸钠含量时，加入乙醚的目的是,A.,防止反应产物的干扰,B.,乙醚层在水上面，防止样品被氧化,C.,消除酸碱性杂质的干扰,D.,防止样品水解,E.,以上都不对,（,A,）,例13.采用两步滴定法测定阿司匹林制剂含量时，被测组分与标准溶液的反应摩尔比为,A)2:1 B)1:2 C)1:1 D)3:1 E),以上都不对,例14.阿司匹林中含量最高的杂质为,A.,乙酰水杨酸酐,B.,乙酰水杨酸水杨酸,C.,水杨酸,D.,水杨酰水杨酸,E.,以上都不对,（,C,）,（,C,）,例15.区别水杨酸和苯甲酸钠最常用的试液是,A.,碘化钾,B.,碘化汞钾,C.,三氯化铁,D.,硫酸亚铁,E.,亚铁氰化钾,例16.在中性条件下，可与三氯化铁试液反应，生成赭色沉淀的药物是,A.,水杨酸钠,B.,对氨基水杨酸钠,C.,乙酰水杨酸,D.,苯甲酸钠,E.,扑热息痛,（,C,）,（,D,）,例18.用直接滴定法测定阿司匹林含量,A.,反应摩尔比为1：1,B.,在中性乙醇溶液中滴定,C.,用盐酸滴定液滴定,D.,以中性红为指示剂,E.,滴定时应在不断振摇下稍快进行,（,ABE,）,含量测定方法为,A.,直接中和滴定法,B.,两步滴定法,C.,两者均可,D.,两者均不可,7.,阿司匹林片,8.,阿司匹林原料药,9.,对氨基水杨酸钠,10.,阿司匹林栓剂,11.,阿司匹林肠溶片剂,B,A,D,D,B,