GB5009.265-2021食品安全国家标准食品中多环芳烃的测定.pdf

中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 1食品安全国家标准食品中多环芳烃的测定2 0 2 1-0 9-0 7发布2 0 2 2-0 3-0 7实施中华人民共和国国家卫生健康委员会国 家 市 场 监 督 管 理 总 局发 布G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 1 前 言 本标准代替G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 6 食品安全国家标准 食品中多环芳烃的测定。本标准与G B5 0 0 9.2 6 52 0 1 6相比,主要变化如下:将原第二法气相色谱-质谱法修订为第一法,修改了测定项目、样品前处理、气相色谱质谱条件、计算方法等;将原第一法高效液相色谱法修订为第二法,修改了序号,简化了原理,统一了试样制备。G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 11 食品安全国家标准食品中多环芳烃的测定1 范围本标准第一法规定了食品中1 6种多环芳烃的气相色谱-质谱测定方法;第二法规定了食品中1 5种多环芳烃的液相色谱测定方法。本标准第一法适用于粮食及其制品、肉及其制品、水产及其制品、动植物油脂及其制品中1 6种多环芳烃(苯并c 芴、苯并a 蒽、环戊并c,d 芘、5-甲基、苯并b 荧蒽、苯并k 荧蒽、苯并j 荧蒽、苯并a 芘、茚并1,2,3-c,d 芘、二苯并a,h 蒽、苯并g,h,i 苝、二苯并a,l 芘、二苯并a,e 芘、二苯并a,i 芘、二苯并a,h 芘)的测定;适用于婴幼儿配方乳粉、婴幼儿辅助食品中4种多环芳烃(苯并a 蒽、苯并b 荧蒽、苯并a 芘)的测定。本标准第二法适用于粮食及其制品、肉及其制品、水产及其制品、蔬菜、动植物油脂中1 5种多环芳烃(萘、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并a 蒽、苯并b 荧蒽、苯并k 荧蒽、苯并a 芘、茚并1,2,3-c,d芘、二苯并a,h 蒽和苯并g,h,i 苝)的测定。第一法 气相色谱-质谱法2 原理试样中多环芳烃经溶剂提取,氢氧化钾乙醇溶液皂化,固相萃取柱净化,浓缩后用气相色谱-质谱联用仪测定,同位素内标法定量。3 试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6 6 8 2规定的一级水。3.1 试剂3.1.1 乙酸乙酯(C4H8O2):色谱纯。3.1.2 二氯甲烷(CH2C l2):色谱纯。3.1.3 丙酮(C3H6O):色谱纯。3.1.4 环己烷(C6H1 2):色谱纯。3.1.5 正己烷(C6H1 4):色谱纯。3.1.6 异辛烷(C8H1 8):色谱纯。3.1.7 无水乙醇(C2H6O):色谱纯。3.1.8 氨水(NH3H2O):质量分数约2 5%。3.1.9 无水乙醚(C4H1 0O)。3.1.1 0 石油醚(C5H1 2O2):沸程为3 06 0。G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 12 3.1.1 1 氢氧化钾(KOH)。3.1.1 2 无水硫酸钠(N a2S O4):使用前4 0 0下烘烤2h后放干燥器内待用。3.2 试剂配制3.2.1 氢氧化钾乙醇溶液(0.3m o l/L):称取1.6 8g氢氧化钾,用1 0 0m L无水乙醇超声溶解,临用现配。3.2.2 氢氧化钾乙醇溶液(1.5m o l/L):称取8.4 0g氢氧化钾,用1 0 0m L无水乙醇超声溶解,临用现配。3.2.3 环己烷-乙酸乙酯溶液(1+1):将环己烷和乙酸乙酯按11(体积比)混合均匀。3.2.4 二氯甲烷-乙酸乙酯溶液(1+1):将二氯甲烷和乙酸乙酯按11(体积比)混合均匀。3.2.5 丙酮-异辛烷溶液(1+1):将丙酮和异辛烷按11(体积比)混合均匀。3.3 标准溶液3.3.1 多环芳烃标准溶液多环芳烃标准溶液(含苯并c 芴、苯并a 蒽、环戊并c,d 芘、5-甲基、苯并b 荧蒽、苯并k 荧蒽、苯并j 荧蒽、苯并a 芘、茚并1,2,3-c,d 芘、二苯并a,h 蒽、苯并g,h,i 苝、二苯并a,l芘、二苯并a,e 芘、二苯并a,i 芘、二苯并a,h 芘,1 0.0g/m L或相应浓度):经国家认证并授予标准物质证书的标准溶液,-1 8下避光保存。多环芳烃C A S号见附录A。3.3.2 同位素多环芳烃内标溶液同位素多环芳烃内标溶液(至少含D1 2-苯并a 蒽、D1 2-、D1 2-苯并b 荧蒽、D1 2-苯并a 芘、D1 2-茚并1,2,3-c,d 芘、D1 4-二苯并a,h 蒽、D1 2-苯并g,h,i 苝,1 0 0.0g/m L或相应浓度),-1 8 下避光保存。同位素多环芳烃内标C A S号见附录A。警告 多环芳烃是已知的致癌、致畸、致突变的物质,并且致癌性随着苯环数的增加而增加。进行标准溶液配制等操作时应特别注意安全防护,应在通风柜中操作,尽量减少暴露。3.4 标准使用液配制3.4.1 多环芳烃标准使用液(5 0 0.0n g/m L):吸取多环芳烃标准溶液(1 0.0g/m L)0.5 0m L于1 0m L容量瓶中,用丙酮-异辛烷溶液(1+1)定容至刻度,混匀,将溶液转移至棕色玻璃存储瓶中,4 下避光密封保存,保存期3个月。3.4.2 多环芳烃标准使用液(1 0 0.0n g/m L):吸取多环芳烃标准使用液(5 0 0.0n g/m L)2.0m L于1 0m L容量瓶中,用丙酮-异辛烷溶液(1+1)定容至刻度,混匀,将溶液转移至棕色玻璃存储瓶中,4 下避光密封保存,保存期3个月。3.4.3 同位素多环芳烃内标使用液(2 0 0.0n g/m L):吸取同位素多环芳烃内标溶液(1 0 0.0g/m L)0.1 0m L于5 0m L容量瓶中,用丙酮-异辛烷溶液(1+1)定容至刻度,混匀,将溶液转移至棕色玻璃存储瓶中,4下避光密封保存,保存期1年。3.4.4 多环芳烃标准系列工作液:取8个锥底进样瓶,分别吸取多环芳烃标准使用液(1 0 0.0n g/m L)2 0.0L、4 0.0L、5 0.0L、8 0.0L和多环芳烃标准使用液(5 0 0.0n g/m L)2 0.0L、4 0.0L、5 0.0L、1 0 0.0L,再各加同位素多环芳烃内标使用液(2 0 0.0n g/m L)1 0 0.0L,用丙酮-异辛烷溶液(1+1)补充体积至2 0 0L,多环芳烃标准系列工作液浓度为1 0.0n g/m L、2 0.0n g/m L、2 5.0n g/m L、4 0.0n g/m L、5 0.0n g/m L、1 0 0.0n g/m L、1 2 5.0n g/m L、2 5 0.0n g/m L,内标为1 0 0.0n g/m L,临用现配。G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 13 4 仪器和设备4.1 气相色谱-四极杆质谱联用仪(G C-M S):配电子轰击离子源(E I源)。4.2 电子天平:感量为0.0 1g、0.0 0 1g。4.3 高速粉碎机。4.4 均质器。4.5 恒温水浴装置。4.6 超声波清洗器。4.7 氮吹仪。4.8 高速离心机:转速1 00 0 0r/m i n。4.9 涡旋振荡器。4.1 0 精密移液器。4.1 1 固相萃取小柱(苯乙烯二乙烯基苯聚合物)或等效净化柱:6m L,3 0 0m g。5 分析步骤5.1 样品前处理5.1.1 试样制备5.1.1.1 粮食及其制品取样品2 0 0g5 0 0g,用高速粉碎机将其充分粉碎,混合均匀后分出1 0 0g左右,装于洁净样品袋或瓶中,密封标识后-1 8下冷冻保存,供检测用。5.1.1.2 肉及其制品、水产及其制品、蔬菜取样品2 0 0g5 0 0g,将其可食部分先切碎,经均质器充分搅碎,取1 0 0g左右装于洁净样品袋或瓶中,密封标识后-1 8下冷冻保存,供检测用。5.1.1.3 动植物油脂及制品取散装动植物油脂及制品1 0 0g 2 0 0g,装于洁净样品瓶中,密封标识后放阴凉处保存,供检测用。定型包装动植物油脂贴标签放阴凉处保存,供检测用。5.1.1.4 婴幼儿配方乳粉、婴幼儿辅助食品取需粉碎样品2 0 0g5 0 0g,用高速粉碎机将其充分粉碎,混合均匀后分出1 0 0g左右,装于洁净样品袋或瓶中,密封标识后4下冷藏保存,供检测用。不需粉碎的婴幼儿配方乳粉、婴幼儿辅助食品贴标签放阴凉处保存,供检测用。5.1.2 试样提取5.1.2.1 粮食及其制品称取试样5g(精确至0.0 0 1g),置于5 0m L具塞离心管中,加入1 0 0L同位素多环芳烃内标使用液(2 0 0.0n g/m L)振荡混合后静置3 0m i n,加入5g无水硫酸钠、2 0m L环己烷-乙酸乙酯混合溶液(1+1),涡旋提取1m i n,超声提取1 5m i n,以1 00 0 0r/m i n离心3m i n,吸取上清液至1 5m L预称重的离心G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 14 管中(精确至0.0 1g),4 5水浴下氮气吹干溶剂得提取物,称重,计算提取物质量(精确至0.0 1g),提取物待皂化。若提取物质量大于1g,则称出1g提取物(精确至0.0 1g),置于另一1 5m L具塞离心管中待皂化。5.1.2.2 肉及其制品、水产及其制品称取试样5g(精确至0.0 0 1g),置于5 0m L具塞离心管中,加入1 0 0L同位素多环芳烃内标使用液(2 0 0.0n g/m L)振荡混合后静置3 0m i n,加入2 0g无水硫酸钠,用金属角匙搅拌分散,加入2 0m L环己烷-乙酸乙酯混合溶液(1+1),涡旋提取1m i n,进一步超声提取1 5m i n,1 00 0 0r/m i n离心3m i n,吸取上清液至1 5m L预称重的离心管中,4 5水浴下用氮气吹干溶剂得提取物,称重,计算提取物质量(精确至0.0 1g),提取物待皂化。若提取物质量大于1g,则称出1g提取物(精确至0.0 1g),置于另一1 5m L具塞离心管中待皂化。5.1.2.3 动植物油脂及制品称取试样0.5g 1g(精确至0.0 0 1g),置于1 5m L具塞离心管中,加入1 0 0L同位素多环芳烃内标使用液(2 0 0.0n g/m L),待皂化。5.1.2.4 婴幼儿配方乳粉称取试样2g(精确至0.0 0 1g),置于5 0m L具塞离心管中,加入1 0 0L同位素多环芳烃内标使用液(2 0 0.0n g/m L),加1 0m L水,涡旋溶解,加2m L氨水充分混匀,在6 55水浴中放置1 0m i n,取出冷却至室温。加入1 0m L无水乙醇,缓慢混匀,加入8m L无水乙醚,漩涡振荡5m i n,再加入8m L石油醚,漩涡振荡5 m i n,1 00 0 0r/m i n离心5m i n,吸出上层有机相至1 5m L预称重的离心管中,4 5水浴下用氮气吹干溶剂得提取物,称重,计算提取物质量(精确至0.0 1g),提取物待皂化。5.1.2.5 婴幼儿辅助食品称取2g(精确至0.0 0 1g)试样,置于5 0m L具塞离心管中,加入1 0 0L同位素多环芳烃内标使用液(2 0 0.0n g/m L),加1 0m L水、1 0m L无水乙醇,涡旋溶解,加入8m L无水乙醚,漩涡振荡5m i n,再加入8m L石油醚,漩涡振荡5m i n,以1 00 0 0r/m i n离心5m i n,吸出上层有机相至1 5m L预称重的离心管中,4 5水浴中用氮气吹干溶剂得提取物,称重,计算提取物质量(精确至0.0 1g),提取物待皂化。5.1.3 皂化5.1.3.1 提取物质量小于或等于0.2g(精确至0.0 1g),加5m L0.3m o l/L氢氧化钾乙醇溶液,涡旋混匀,室温放置5m i n,加4m L水、5m L正己烷,涡旋提取2m i n,1 00 0 0r/m i n离心2m i n,上层正己烷提取液待净化。5.1.3.2 提取物质量在0.2g 1g(精确至0.0 1g)之间,加入5m L1.5m o l/L氢氧化钾乙醇溶液,加盖涡旋混匀,放置7 02水浴中进行皂化3m i n。皂化完成取出用自来水冷却至室温,加4m L水、5m L正己烷,涡旋提取2m i n,以1 00 0 0r/m i n离心2m i n,上层正己烷提取液待净化。5.1.3.3 动植物油试样中加入5m L1.5m o l/L氢氧化钾乙醇溶液(固体油脂试样先放置5 0水浴融化后加入),加盖涡旋混匀,放置7 02水浴中进行皂化3m i n。皂化完成取出用自来水冷却至室温,加4m L水、5m L正己烷,涡旋提取2m i n,1 00 0 0r/m i n离心2m i n,上层正己烷提取液待净化。注:苯并c 芴对碱不稳定,测定苯并c 芴时,皂化时间视油脂质量而定,以1g提取物皂化3m i n按比例折算。5.1.4 净化在固相萃取小柱上加1g左右无水硫酸钠,依次用3m L二氯甲烷、3m L正己烷淋洗活化柱子,活G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 15 化结束后吸取全部正己烷提取液转移到固相萃取柱上,流速控制在1.0m L/m i n左右,待提取液全部通过填料层后,先用5m L正己烷淋洗除杂,再用5m L二氯甲烷-乙酸乙酯溶液(1+1)洗脱,收集洗脱液于1 0m L锥底玻璃试管内。洗脱液在4 0水浴中用氮气吹干,加0.1m L丙酮-异辛烷溶液(1+1)涡旋溶解残留物,并转移至锥底进样瓶中,供G C-M S测定。5.1.5 空白试验除不加试样外,采用与试样完全相同的分析步骤进行。5.1.6 平行试验按上述步骤,对同一试样进行平行试验测定。5.2 仪器参考条件5.2.1 气相色谱参考条件:5.2.1.1 色谱柱:D B-E U P AH毛细管柱:柱长2 0m,内径0.1 8mm,膜厚0.1 4m或相当色谱柱。5.2.1.2 进样口温度:2 8 0。5.2.1.3 载气:氦气,纯度9 9.9 9 9%。5.2.1.4 进样体积:1L2L,不分流进样。5.2.1.5 溶剂延迟:1 6.5m i n。5.2.1.6 柱温程序:初温8 0,保持2m i n,以1 0/m i n升至2 5 0,保持2m i n,以8/m i n升至3 1 5,保持5m i n,最后以2 0/m i n升至3 2 0,保持5m i n。5.2.1.7 流量程序:0.7m L/m i n保持3 2m i n,再以5m L/m i n从0.7m L/m i n升至1.5m L/m i n至结束。5.2.2 质谱参考条件:5.2.2.1 电离方式:电子轰击源(E I)。5.2.2.2 电离能量为:7 0e V。5.2.2.3 离子源温度:2 3 0。5.2.2.4 传输线温度:2 8 0。5.2.2.5 四极杆温度:1 5 0。5.2.2.6 测定方式:选择离子监测方式。5.2.2.7 监测离子:见附录B。5.3 定性分析试样中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准目标化合物色谱峰的保留时间相比较,变化范围应在0.5%之内。样品中目标化合物监测离子的相对丰度与浓度相当标准溶液的相对丰度一致,允许的偏差不超过表1的规定,则可判断试样中存在对应的被测物。表1 定性离子相对丰度的最大允许偏差相对基峰离子丰度5 0%2 0%5 0%1 0%2 0%1 0%允许的偏差1 0%1 5%2 0%5 0%在上述色谱条件下,多环芳烃及对应同位素内标参考保留时间和特征离子见附录B中表B.1;总离子流图、质量色谱图参见附录C中图C.1以及附录D中图D.1。G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 16 5.4 定量测定5.4.1 标准曲线的制作按照样品检测要求,取6个浓度标准工作液制作标准曲线,由低到高依次注入气相色谱-质谱仪中,测得多环芳烃和同位素多环芳烃内标物的相应峰面积,以标准系列工作液中多环芳烃与对应内标的质量比(Ki)为横坐标,以多环芳烃峰面积与对应内标的峰面积比为纵坐标,绘制标准曲线。5.4.2 试样溶液的测定将试样溶液注入气相色谱-质谱仪中,测得多环芳烃峰面积和相应内标物的峰面积之比,根据标准曲线得到待测液中多环芳烃的质量。待测试样溶液中的响应值应在标准曲线线性范围内,超过线性范围说明样品含量过高,可以适当减少取样量重新测定。6 结果计算和表述试样中多环芳烃含量Xi按式(1)计算。Xi=(Ni-Ni0)10 0 0m10 0 0(1)式中:Xi 试样中多环芳烃i的含量,单位为微克每千克(g/k g);Ni 试样溶液中多环芳烃i的峰面积与对应内标色谱峰的峰面积比值对应的质量,单位为纳克(n g),Ni按式(2)计算:Ni=KiNis(2)式中:Ki 从标准曲线查得的质量比;Nis 样品中加入的内标物的量,单位为纳克(n g);Ni0 空白试验溶液中多环芳烃i的峰面积与对应内标色谱峰的峰面积比值对应的质量,单位为纳克(n g),Ni0按式(3)计算:Ni0=Ki0N0is(3)式中:Ki0 从标准曲线查得的质量比;N0is 空白试验溶液中加入的内标物的量,单位为纳克(n g);m 试样的取样量,单位为克(g);10 0 0 换算系数。以重复条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,计算结果1 0.0g/k g时,保留三位有效数字;1 0.0g/k g时,保留两位有效数字。7 质量保证/质量控制7.1 每批样品必须附带空白试验,空白试验溶液中各多环芳烃应低于检出限,如果高于检出限,则应终止样品分析,检查试剂、容器以及设备等,直到对该批样品重新提取和分析,确定同批空白中没有明显污染。7.2 实验室应经常考察回收率和正确度,以确认分析系统处于正常状态。G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 17 7.3 质量控制考察样品:定期分析质量控制考察样品以确认标准溶液的准确性和分析过程的可靠性。8 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的2 0%。9 其他动植物油脂取样1g,各多环芳烃检出限为0.7g/k g,定量限为2.0g/k g。婴幼儿配方乳粉、婴幼儿辅助食品取样2g,各多环芳烃检出限为0.2g/k g,定量限为0.5g/k g。其他样品取样5g,各多环芳烃检出限为0.3g/k g,定量限为1.0g/k g。第二法 高效液相色谱法1 0 原理试样中的多环芳烃用有机溶剂提取,用P S A(N-丙基乙二胺)和C1 8固相萃取填料净化或用弗罗里硅土固相萃取柱净化,用高效液相色谱分离,测定各种多环芳烃在不同激发波长和发射波长处的荧光强度,外标法定量。1 1 试剂和材料除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为G B/T6 6 8 2规定的一级水。1 1.1 试剂与材料1 1.1.1 乙腈(CH3C N):色谱纯。1 1.1.2 正己烷(C6H1 4):色谱纯。1 1.1.3 二氯甲烷(CH2C l2):色谱纯。1 1.1.4 硅藻土:色谱纯。1 1.1.5 硫酸镁(M g S O4):优级纯。1 1.1.6 N-丙基乙二胺(P S A):粒径4 0m。1 1.1.7 封尾C1 8固相萃取填料:粒径4 0m6 3m。1 1.1.8 弗罗里硅土固相萃取柱:5 0 0m g,3m L。1 1.1.9 有机相型微孔滤膜:0.2 2m。1 1.2 试剂配制1 1.2.1 正己烷-二氯甲烷混合溶剂(1+1):将正己烷和二氯甲烷按11(体积比)混合均匀。1 1.2.2 乙腈饱和的正己烷:量取8 0m L正己烷,加入2 0m L乙腈,振摇混匀后,静置分层,上层正己烷层即为乙腈饱和的正己烷。1 1.3 标准品多环芳烃标准溶液(2 0 0.0g/m L)(含萘、苊烯、苊、芴、菲、蒽、荧蒽、芘、苯并a 蒽、苯并b 荧G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 18 蒽、苯并k 荧蒽、苯并a 芘、茚并1,2,3-c,d 芘、二苯并a,h 蒽和苯并g,h,i 苝):经国家认证并授予标准物质证书的标准溶液,-1 8下避光保存。警告 多环芳烃是已知的致癌、致畸、致突变的物质,并且致癌性随着苯环数的增加而增加,标准溶液配制等操作时应特别注意安全防护。测定应在通风柜中进行并戴手套,尽量减少暴露。1 1.4 标准溶液配制1 1.4.1 多环芳烃标准中间液(10 0 0.0n g/m L):吸取0.5 0m L多环芳烃标准溶液(2 0 0.0g/m L),用乙腈定容至1 0 0m L。-1 8下避光保存,有效期为3个月。1 1.4.2 多环芳烃标准系列工作液:分别吸取多环芳烃标准中间液(10 0 0.0n g/m L)0.1 0m L、0.5 0m L、1.0m L、2.0m L、5.0m L、1 0.0m L,用乙腈定容至1 0 0m L,得到质量浓度为1.0n g/m L、5.0n g/m L、1 0.0n g/m L、2 0.0n g/m L、5 0.0n g/m L、1 0 0.0n g/m L的标准系列工作液,临用现配。1 2 仪器和设备1 2.1 高效液相色谱仪,带荧光检测器。1 2.2 电子天平:感量为0.0 0 1g。1 2.3 冷冻离心机:转速45 0 0r/m i n。1 2.4 涡旋振荡器。1 2.5 超声波振荡器。1 2.6 粉碎机。1 2.7 均质器。1 2.8 氮吹仪。1 2.9 旋转蒸发仪。1 3 分析步骤1 3.1 试样制备同5.1.1。1 3.2 试样提取1 3.2.1 粮食或水分少的食品称取2g 5g(精确至0.0 0 1g)试样,置于5 0m L具塞玻璃离心管A中,按以下步骤处理:a)加入1 0m L正己烷,涡旋振荡3 0s后,放入4 0水浴超声3 0m i n;以45 0 0r/m i n离心5m i n,吸取上清液于玻璃离心管B中;离心管A下层用1 0m L正己烷重复提取一次,提取液合并于离心管B中,于3 5水浴氮吹至近干。b)在离心管B中,加入4m L乙腈,涡旋混合3 0s,再加入9 0 0m g硫酸镁、1 0 0m gP S A和1 0 0m gC1 8填料,涡旋混合3 0s,以45 0 0r/m i n离心3m i n,移取上清液于1 0m L玻璃刻度离心管C中,离心管B下层再用2m L乙腈重复提取一遍,合并提取液于离心管C中,氮吹蒸发溶剂至近1m L,用乙腈定容至1m L,混匀后,过0.2 2m有机相型微孔滤膜,制得试样待测液。1 3.2.2 水产品、肉类和蔬菜类食品称取2g 5g(精确至0.0 0 1g)试样,置于5 0m L具塞玻璃离心管A中,加1g5g硅藻土,用玻G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 19 棒搅匀,以下按1 3.2.1中a)、b)步骤处理,制得试样待测液。1 3.2.3 含油脂高的食品或动植物油脂称取1g 4g(精确至0.0 0 1g)试样,置于5 0m L具塞玻璃离心管A中,按以下步骤处理:a)加入2 0m L乙腈和1 0m L乙腈饱和的正己烷,涡旋振荡3 0s后,放入4 0水浴超声3 0m i n;摇匀后,45 0 0r/m i n-4下冷冻离心5m i n,吸取下层乙腈层于1 0 0m L鸡心瓶中,离心管A中溶液用2 0m L乙腈重复提取1次,提取液合并于鸡心瓶中,3 5减压旋转蒸发至近干。加入5m L正己烷,涡旋振荡3 0s溶解。b)依次用5m L二氯甲烷和1 0m L正己烷活化弗罗里硅土固相萃取柱,将a)获得的5m L提取样液全部移入弗罗里硅土固相萃取柱,再用5m L正己烷洗涤鸡心瓶,洗涤液并入柱中,用8m L正己烷-二氯甲烷混合溶剂(1+1)洗脱,收集所有流出物于2 0m L玻璃离心管B中。氮吹(温度控制在3 5以下)除去溶剂,吹至近干,加入0.5m L乙腈涡旋振荡1 0s,继续氮吹至除尽正己烷-二氯甲烷,用乙腈定容至1m L,混匀后,过0.2 2m有机相型微孔滤膜,制得试样待测液。1 3.3 液相色谱法参考条件a)色谱柱:P AHC 1 8反相键合固定相色谱柱,柱长2 5 0mm,内径4.6mm,粒径5m,或同等性能的色谱柱。b)检测器:荧光检测器。c)流动相:乙腈和水;梯度洗脱程序见表2,溶剂A为乙腈,溶剂B为水。表2 反相C1 8柱梯度洗脱程序色谱时间m i n溶剂A%溶剂B%05 05 055 05 02 01 0 002 81 0 003 25 05 0 d)流速:1.5m L/m i n。e)检测波长:激发和发射波长见表3。表3 多环芳烃的激发波长、发射波长及其切换色谱时间检测参数序号化合物名称时间m i n激发波长n m发射波长n m1萘苊芴02 7 03 2 42菲蒽1 2.0 42 4 83 7 5G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 11 0 表3(续)序号化合物名称时间m i n激发波长n m发射波长n m3荧蒽1 4.0 02 8 04 6 24芘苯并a 蒽1 4.8 52 7 03 8 55苯并b 荧蒽1 8.9 32 5 64 4 66苯并k 荧蒽苯并a 芘二苯并a,h 蒽苯并g,h,i 苝2 0.2 22 9 24 1 07茚并1,2,3-c,d 芘2 3.3 32 7 45 0 7 f)柱温:3 0。g)进样量:2 0L。1 3.4 标准曲线的制作将标准系列工作液分别注入液相色谱仪中,测得相应的峰面积,以标准工作液的质量浓度为横坐标,以峰面积为纵坐标,绘制标准曲线。标准溶液的液相色谱图参见附录E。1 3.5 试样溶液的测定将试样待测液注入液相色谱仪中,以保留时间定性,测得相应的峰面积,根据标准曲线得到试样待测液中多环芳烃的质量浓度。如果试样待测液中被测物质的响应值超出仪器检测的线性范围,可适当稀释后测定。1 3.6 空白试验除不加试样外,采用与试样完全相同的分析步骤。1 4 结果计算和表述试样中多环芳烃的含量Xi按式(4)计算。Xi=iV10 0 0m10 0 0(4)式中:Xi 试样中多环芳烃i的含量,单位为微克每千克(g/k g);i 依据标准 曲 线 计 算 得 到 的 试 样 待 测 液 中 多 环 芳 烃i的 浓 度,单 位 为 纳 克 每 毫 升(n g/m L);V 试样待测液最终定容体积,单位为毫升(m L);10 0 0 换算系数;m 试样质量,单位为克(g)。以重复条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示,计算结果1 0.0g/k g时,保留三位有G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 11 1 效数字;计算结果1 0.0g/k g时,保留两位有效数字。注:计算结果应扣除空白值。1 5 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的2 0%。1 6 其他当试样取4g,定容体积为1m L时,本方法的检出限和定量限见表4。表4 液相色谱法的多环芳烃检出限和定量限单位为微克每千克化合物蒽、苯并a 蒽、茚并1,2,3-c,d 芘、苯并b 荧蒽、苯并k 荧蒽、苯并a 芘、二苯并a,h 蒽、苯并g,h,i 苝菲萘荧蒽苊、芴、芘检出限0.32.03.30.50.7定量限1.06.01 0.01.52.0G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 11 2 附 录 A多环芳烃及同位素内标标准品英文、缩写、相对分子质量及C A S号多环芳烃及同位素内标标准品英文、缩写、相对分子质量和C A S号见表A.1。表A.1 多环芳烃及同位素内标标准品英文、缩写、分子量和C A S号序号名称英文英文缩写相对分子质量C A S号1苯并c 芴B e n z ocf l u o r e n eB c F L2 1 62 0 5-1 2-92D1 2-苯并a 蒽D1 2-B e n zaa n t h r a c e n eD1 2-B a A2 4 01 7 1 8-5 3-23苯并a 蒽B e n zaa n t h r a c e n eB a A2 2 85 6-5 5-34D1 2-D1 2-C h r y s e n eD1 2-CHR2 4 01 7 1 9-0 3-55环戊并c,d 芘C y c l o p e n t ac,dp y r e n eC P P2 2 62 7 2 0 8-3 7-36C h r y s e n eCHR2 2 82 1 8-0 1-975-甲基5-M e t h y l c h r y s e n eMCH2 4 23 6 9 7-2 4-38D1 2-苯并b 荧蒽D1 2-B e n z obf l u o r a n t h e n eD1 2-B b F A2 6 49 3 9 5 1-9 8-59苯并b 荧蒽B e n z obf l u o r a n t h e n eB b F A2 5 22 0 5-9 9-21 0苯并k 荧蒽B e n z okf l u o r a n t h e n eB k F A2 5 22 0 7-0 8-91 1苯并j 荧蒽B e n z ojf l u o r a n t h e n eB j F A2 5 22 0 5-8 2-31 2D1 2-苯并a 芘D1 2-B e n z oap y r e n eD1 2-B a P2 6 46 3 4 6 6-7 1-71 3苯并a 芘B e n z oap y r e n eB a P2 5 25 0-3 2-81 4D1 2-茚并1,2,3-c,d 芘D1 2-I n d e n o1,2,3-c,dp y r e n eD1 2-I P2 8 82 0 3 5 7 8-3 3-01 5茚并1,2,3-c,d 芘I n d e n o1,2,3-c,dp y r e n eI P2 7 61 9 3-3 9-51 6D1 4-二苯并a,h 蒽D1 4-D i b e n za,ha n t h r a c e n eD1 4-D B a h A2 9 21 3 2 5 0-9 8-11 7二苯并a,h 蒽D i b e n za,ha n t h r a c e n eD B a h A2 7 85 3-7 0-31 8D1 2-苯并g,h,i 苝D1 2-B e n z og,h,ip e r y l e n eD1 2-B g h i P2 8 89 3 9 5 1-6 6-71 9苯并g,h,i 苝B e n z og,h,ip e r y l e n eB g h i P2 7 61 9 1-2 4-22 0二苯并a,l 芘D i b e n z oa,lp y r e n eD B a l P3 0 21 9 1-3 0-02 1二苯并a,e 芘D i b e n z oa,ep y r e n eD B a e P3 0 21 9 2-6 5-42 2二苯并a,i 芘D i b e n z oa,ip y r e n eD B a i P3 0 21 8 9-5 5-92 3二苯并a,h 芘D i b e n z oa,hp y r e n eD B a h P3 0 21 8 9-6 4-0G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 11 3 附 录 B多环芳烃及对应内标G C-M S测定参考保留时间和监测离子多环芳烃及相应内标G C-M S测定参考保留时间和监测离子见表B.1。表B.1 多环芳烃及相应内标G C-M S测定参考保留时间和监测离子序号名称保留时间m i n监测离子定量内标内标保留时间m i n内标监测离子12苯并c 芴苯并a 蒽1 7.5 02 0.1 52 1 3、2 1 5、2 1 6a2 2 6、2 2 9、2 2 8aD1 2-苯并a 蒽2 0.0 62 3 6、2 4 0a345环戊并c,d 芘5-甲基2 0.3 82 0.4 72 2.2 22 2 4、2 2 7、2 2 6a2 2 6、2 2 9、2 2 8a2 3 9、2 4 1、2 4 2aD1 2-2 0.3 62 3 6、2 4 0a678苯并b 荧蒽苯并k 荧蒽苯并j 荧蒽2 4.6 02 4.7 12 4.8 22 5 0、2 5 3、2 5 2a2 5 0、2 5 3、2 5 2a2 5 0、2 5 3、2 5 2aD1 2-苯并b 荧蒽2 4.5 02 6 0、2 6 4a9苯并a 芘2 6.2 42 5 0、2 5 3、2 5 2aD1 2-苯并a 芘2 6.1 42 6 0、2 6 4a1 0茚并1,2,3-c,d 芘3 0.9 82 7 4、2 7 7、2 7 6aD1 2-茚并1,2,3-c,d 芘3 0.8 52 8 4、2 8 8a1 1二苯并a,h 蒽3 1.1 42 7 6、2 7 9、2 7 8aD1 4-二苯并a,h 蒽3 0.9 52 8 8、2 9 2a1 21 31 41 51 6苯并g,h,i 苝二苯并a,l 芘二苯并a,e 芘二苯并a,i 芘二苯并a,h 芘3 2.3 43 4.9 73 5.8 63 6.4 23 6.7 52 7 4、2 7 7、2 7 6a3 0 0、3 0 3、3 0 2a3 0 0、3 0 3、3 0 2a3 0 0、3 0 3、3 0 2a3 0 0、3 0 3、3 0 2aD1 2-苯并g,h,i 苝3 2.2 72 8 4、2 8 8a a定量离子。G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 11 4 附 录 C多环芳烃标准溶液G C-M S测定总离子流色谱图(内标法)1 6种多环芳烃标准溶液(1 0 0.0g/L)G C-M S测定总离子流色谱图(内标法)见图C.1。说明:1 苯并c 芴;1 3 苯并a 芘;2 D1 2-苯并a 蒽;1 4 D1 2-茚并1,2,3-c,d 芘;3 苯并a 蒽;1 5 茚并1,2,3-c,d 芘;4 D1 2-;1 6 D1 4-二苯并a,h 蒽;5 ;1 7 二苯并a,h 蒽;6 环戊并c,d 芘;1 8 D1 2-苯并g,h,i 苝;7 5-甲基;1 9 苯并g,h,i 苝;8 D1 2-苯并b 荧蒽;2 0 二苯并a,l 芘;9 苯并b 荧蒽;2 1 二苯并a,e 芘;1 0 苯并k 荧蒽;2 2 二苯并a,i 芘;1 1 苯并j 荧蒽;2 3 二苯并a,h 芘。1 2 D1 2-苯并a 芘;图C.1 1 6种多环芳烃标准溶液(1 0 0.0 g/L)G C-M S测定总离子流色谱图(内标法)G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 11 5 附 录 DS I M检测的目标多环芳烃及同位素内标特征离子质量色谱图多环芳烃及同位素内标质量色谱图见D.1。图D.1 多环芳烃及同位素内标质量色谱图G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 11 6 图D.1(续)G B5 0 0 9.2 6 52 0 2 11 7 附 录 E多环芳烃标准溶液的液相色谱图多环芳烃标准溶液(2 0.0g/L)液相色谱图见E.1。说明:1 萘;9 ;2 苊;1 0 苯并b 荧蒽;3 芴;1 1 苯并k 荧蒽;4 菲;1 2 苯并a 芘;5 蒽;1 3 二苯并a,h 蒽;6 荧蒽;1 4 苯并g,h,i 苝;7 芘;1 5 茚并1,2,3-c,d 芘;8 苯并a蒽;1 6 波长改变。图E.1 多环芳烃标准溶液(2 0.0 g/L)液相色谱图