DB13∕T 2442-2017 蛋种鸡场禽白血病的净化技术规程.pdf

ICS 65.020.30 B 43 DB13 河北省地方标准 DB13/T 24422017 蛋种鸡场禽白血病的净化技术规程 2017 - 03 - 29 发布 2017 - 06 - 01 实施 河北省质量技术监督局 发 布 DB13/T 24422017 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由河北科技师范学院提出。 本标准由河北科技师范学院动物科技学院起草。 本标准主要起草人：张香斋、李蕴玉、李佩国、贾青辉、张文香、申红莲、张艳英、张召兴、常超越、闫艳娟。 DB13/T 24422017 1 蛋种鸡场禽白血病的净化技术规程 1 范围 本标准规定了蛋种鸡场禽白血病净化的术语和定义、净化方法与程序、饲养管理、种鸡场建设和净化标准。 本标准适用于蛋种鸡场禽白血病的净化。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 13078 饲料卫生标准 GB 16548 病害动物和病害动物产品生物安全处理规程 NY/T 388 畜禽场环境质量标准 NY/T 1167 畜禽场环境质量及卫生控制规范 NY/T 1168 畜禽粪便无害化处理技术规范 NY 5027 无公害食品 畜禽饮用水水质 NY/T 5038 无公害食品 家禽养殖生产管理规范 NY/T 5339 无公害食品 畜禽饲养兽医防疫准则 DB13/T 990 鸡场消毒技术规范 中华人民共和国动物防疫法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 禽白血病 由反转录病毒科的禽白血病病毒(Avian leukosis virus，ALV)引起的禽类多种肿瘤性传染病。 注：主要包括淋巴细胞性白血病、成红细胞性白血病、成髓细胞性白血病、骨髓细胞瘤等。 3.2 ALVp 27抗原 禽白血病病毒所有亚群共有的核衣壳蛋白，氨基酸序列比较保守，是ALV的主要特异性抗原。 3.3 酶联免疫吸附试验（ELISA） 一种用酶标记抗原或抗体的方法，将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的一种新型的免疫测定技术，可敏感地检测体液中微量的特异性抗原或抗体。 3.4 DB13/T 24422017 2 DF-1细胞系（DF-1） 来源于East Lansing Line（ELL-0）鸡胚胎，是鸡胚成纤维细胞的可传代细胞系。 注：该细胞系缺少禽白血病病毒、肉瘤病毒群病毒相关的内源片段，并具有正常的成纤维形态。DF-1细胞支持禽反转录病毒的复制，是一种自发的、无肿瘤基因的、稳定的、无限增殖的细胞系。 3.5 净化 为达到消灭和清除传染源的目的，在某一限定地区或养殖场内采取的一系列措施。 4 净化方法与程序 4.1 原种鸡场核心群禽白血病的净化 4.1.1 1 日龄雏鸡胎粪检测 出壳前，将每只种鸡的种蛋置于同一出壳袋中。出壳后，逐只采集1日龄雏鸡胎粪，采用ELISA的方法检测ALV-p27抗原。每采集完同一只母鸡的雏鸡胎粪后，更换一次手套。同一只母鸡所产雏鸡中，只要有一只阳性就淘汰同袋中的其他雏鸡，同时淘汰相应种母鸡。 4.1.2 610 周龄育成鸡检测 610周龄按育种规程选择出后备鸡，逐只采集血浆，接种DF-1细胞分离病毒，培养9 d后用ELISA的方法逐孔检测ALV-p27抗原，淘汰阳性鸡。同一饲养笼中鸡只，只要有一只阳性就淘汰同笼中的所有鸡。 4.1.3 1820 周龄开产初期检测 取母鸡初生蛋3个， 分离蛋清， 公鸡采集精液或泄殖腔棉拭子， 分别用ELISA方法检测ALV-p27抗原，淘汰阳性鸡。 4.1.4 留种继代前(4355 周龄)检测 取23个种蛋，对蛋清做ALV-p27抗原检测，公鸡可采集精液检测ALV-p27抗原，淘汰阳性鸡。逐只采集血液，分离血清，ELISA检测A/B、J抗体，淘汰阳性鸡；同时采集抗凝血，分离血浆，接种DF-1细胞分离病毒，培养9 d后用ELISA方法逐孔检测ALV-p27抗原，淘汰阳性鸡，然后组建家系，收集种蛋入孵。 4.1.5 第 25 世代鸡的检测与淘汰 对经上述检测组建家系后的种鸡， 收集种蛋入孵， 出壳的雏鸡， 作为净化后第二世代鸡， 按4.1.1、4.1.2、4.1.3、4.1.4的要求进行第25世代种鸡ALV-p27的检测和净化，直至达到净化标准。 4.2 祖代或父母代种鸡群禽白血病的净化 4.2.1 选择净化的种源，加强引种检疫 引进种鸡时， 应要求对方出具禽白血病净化证明和其他相关的检疫合格证或按照NY/T 5339的要求进行。 4.2.2 严格隔离制度 DB13/T 24422017 3 种鸡引入后至少隔离饲养60 d，并经病原学检测确认为阴性，同时按照本场免疫程序进行常规免疫后方可调入鸡场。 4.2.3 定期检测 祖代和父母代鸡场连续三次抽检，抽检比例为1%左右，每次检测间隔2个月。如果病原学检测阳性率超过净化标准，应按原种鸡场核心群禽白血病的净化方法与程序进行净化，直至达到净化标准。 5 种鸡场建设要求 5.1 种鸡场的场址选择、布局与卫生设施应符合 NY/T 5038 的要求。 5.2 场区的空气环境质量应符合 NY/T 388 的要求。 5.3 场区的土壤环境质量应符合 NY/T 1167 的要求。 6 饲养管理 6.1 优化饲养方式 6.1.1 实行全进全出的饲养方式。 6.1.2 对于原种鸡场，在育雏和育成鸡执行单家系饲养管理，产蛋鸡采取单笼饲养，执行终身跟踪制度。 6.2 出雏管理 按照1只母鸡后代的全同胞进行装袋落盘。出雏执行严格隔离，品系之间、家系之间不交叉。 6.3 饲料质量 饲料品质应符合GB 13078 的要求。 6.4 饮水质量 饮用水水质应符合NY 5027的要求。 6.5 卫生消毒 6.5.1 消毒剂的选择应符合中华人民共和国兽药典的规定，选择广谱、高效、杀菌作用强、刺激性低、对人和鸡安全的产品。消毒剂应定期轮换使用，以提高杀菌效力。 6.5.2 场区环境、人员、用具、鸡舍及种蛋的消毒按 DB13/T 990 的要求进行。 6.5.3 每天对孵化室进行清扫，并喷雾消毒，保持清洁。 6.5.4 入孵前，对孵化器、入孵盘进行清洗、喷雾消毒，再按每立方米 38 %甲醛溶液 14 ml、高锰酸钾 7 g、水 7 ml 的比例熏蒸 30 min。 6.5.5 落盘后，出雏器内按每立方米 38 %甲醛溶液 20 ml30 ml，自然挥发，直至出雏结束。 DB13/T 24422017 4 6.5.6 出雏后，清除出雏器中的污物、死胚、死雏、蛋壳，并对出雏器、出雏盘进行清洗和喷雾消毒，再按每立方米 38 %甲醛溶液 42 ml、高锰酸钾 21 g、水 21 ml 的比例熏蒸 30 min。 6.6 免疫接种 免疫接种应符合中华人民共和国动物防疫法的要求，根据本地区和本场疫病流行情况，制定合理的免疫接种计划，选择适宜的疫苗和免疫方法，并做好记录。 6.7 无害化处理 对病死鸡、蛋壳和鸡粪等和孵化场内的废弃物应按GB 16548和NY/T 1168的要求进行无害化处理。 6.8 杀虫、灭鼠 定期开展杀灭蚊虫、苍蝇和老鼠等工作，消灭传播媒介和传染源。 7 净化标准 7.1 病原学检测 原种场全部为阴性，祖代场和父母代场阳性率低于1 %。 7.2 血清学检测 A/B、J 抗体检测，原种场全部为阴性，祖代场和父母代场阳性率低于1 %。 8 净化状态的维持 种鸡场达到禽白血病净化状态或通过评估后，可开展维持性监测。 DB13/T 24422017 5 附 录 A （资料性附录） 相关技术 A.1 ALV 病毒分离 采集抗凝血置于灭菌离心管中，1500 r/min离心3 min，取100 L血浆接种24孔细胞板处于对数生长期的DF-1细胞，37 、5 % CO2培养箱作用2 h后，用灭菌PBS润洗一遍，加入含1 %胎牛血清的DMEM维持培养7 d9 d，收集细胞上清进行ALV-p27抗原检测。 A.2 ELISA 检测 采集的胎粪、泄殖腔棉拭子、蛋清上清等样品，经过几次反复冻融后，按照ELISA检测试剂盒操作说明进行ALV-p27抗原检测；无菌采集血液，分离血清，按照ELISA检测试剂盒操作说明进行ALV A/B、J抗体检测，操作过程详见试剂盒说明书。 _