以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,肿瘤疫苗和,DC,简史,肿瘤细胞免疫逃避机制和,DC,抗肿瘤机制,以,DC,为基础肿瘤疫苗策略,DC,肿瘤疫苗主要影响原因,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第1页,树突状细胞,dendritic cell;DC,1973,美国学者,Steinman,小鼠脾细胞,因其成熟时伸出许多树突样或伪足样突起而得名,当前所知功效最强抗原提呈细胞,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第2页,CD34,骨髓干细胞,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第3页,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第4页,肿瘤疫苗,dendritic cell vaccine,DC vaccine,1,、增强肿瘤,免疫原性,2,、增强机体抗肿瘤,免疫应答,3,、,打破,肿瘤免疫,耐受,关键问题,诱导主动性免疫,刺激宿主产生有效免疫应答,安全、无不良反应,能为预防肿瘤复发提供保护性长久免疫记忆功效,理想肿瘤疫苗,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第5页,肿瘤疫苗研究进展,疫苗出现,1796 Edward Jenner,接种疫苗,天花,肿瘤疫苗尝试性研究,提升肿瘤本身免疫原性,方法增加机体抗肿瘤免疫反应,1,、,WiUiam Coley,丹毒患者活链球菌,注射,肿瘤患者肿瘤结节内激发起肿瘤患者机体对肿瘤免疫应答,2,、,牛痘病毒,感染肿瘤细胞肿瘤溶解物注射人体,3,、混合,卡介苗,或,短小棒状杆菌,+,经过照射灭活肿瘤细胞共孵育注射人体,没有取得显著必定治疗效果,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第6页,理论基础奠定,1971,Burnet,Thomas,免疫监视学说,免疫系统,细胞免疫机制,识别去除,肿瘤细胞,临床和试验证据,1,、,免疫缺点,（尤其是细胞免疫缺点）肿瘤发生率,2,、,幼儿期,（免疫功效未发育成熟）和,老年期,（免疫功效衰退）肿瘤发生率比其它年纪,3,、经,抗淋巴细胞血清处理,或,胸腺摘除,小鼠肿瘤发生率高,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第7页,肿瘤疫苗研究飞跃,20,世纪末,90,年代,初以,基因修饰肿瘤细胞,为基础疫苗发展,肿瘤疫苗真正成为能够应用于临床肿瘤治疗方法,1997,年,美国,Jefferson,大学,约,60,黑色素细胞瘤转移患者注射肿瘤疫苗后存活,5,年以上,1998,年,波士顿研究人员,制成一个经生物工程改造肿瘤疫苗，它包含一个能够刺激机体免疫系统，使细胞保持较长时间攻击力。,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第8页,（一）全肿瘤细胞疫苗,1,、经物理、化学等方法处理疫苗,2,、转基因疫苗,3,、感染病毒类疫苗,4,、细胞融合疫苗,（二）肿瘤抗原及抗原类分子疫苗,该类疫苗研究最为广泛,该类疫苗特异性高,但免疫原性低,1,、抗原疫苗,2,、多肽类疫苗,3,、抗独特型抗体疫苗,4,、热休克蛋白,肽类复合物疫苗,（三）核酸疫苗,（四）重组病毒、病菌疫苗,（五）树突状细胞疫苗,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第9页,肿瘤疫苗新热点,近,10,年来,以树突状细胞为基础肿瘤抗原特异性疫苗,1991,年,Steinman,首次发觉,DC,这一强大抗原递呈功效以来，,DC,就被用于肿瘤免疫治疗研究,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第10页,转基因疫苗,表示共刺激分子、细胞因子,经过激活细胞使更多抗原被摄取呈递,临床试验效果不如动物试验；,瘤细胞获取复杂；,灭活要求高；,基因导入安全问题,直接携带肿瘤抗原,DC,细胞作用则更为直接,能够活化静息细胞，激发更强抗肿瘤免疫反应,DC,疫苗,VS,易获取，操作简便，效果和转基因疫苗相当甚至更加好,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第11页,美国密执安大学、瑞士苏黎世大学等应用,树突状细胞,分别携带,乳腺癌,、,黑色素瘤抗原,制备疫苗,Dukes,大学则应用,肿瘤细胞转导,细胞,均已进入,期或,期 临床试验。,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第12页,年,中山大学肿瘤医院,研发出,一个,除了干细胞移植、化疗等常规治疗方法外白血病治疗方法,白血病,DC,疫苗,已在,14,位患者身上取得显著疗效，,国内尚属首创,。,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第13页,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第14页,1）肿瘤免疫原性较弱,并含有抗原调变能力,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第15页,2）,MHC-I类分子表示下降或消失。,B7，ICAM-1等共刺激分子在癌细胞上表示异常；,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第16页,肿瘤细胞高水平表示包含唾液酸在内粘多糖或其它凝聚系统；血清中封闭因子（封闭抗体）封闭肿瘤表面抗原表位。,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第17页,漏逸少许肿瘤细胞不能引发足够免疫应答，反而能够刺激肿瘤不停生长，产生免疫刺激。,存在于一些肿瘤组织内淋巴细胞能够为肿瘤细胞提供一些肿瘤营养因子并刺激肿瘤细胞生长。,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第18页,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第19页,Sakaguchi 等在1995年发觉鼠源性CD4CD25 双阳性T细胞亚群，能经过细胞与细胞间接触以及分泌细胞因子显著抑制各种免疫细胞功效。,局部微环境肿瘤抗原可显著诱导特异Treg细胞生成，称为肿瘤特异Treg细胞。,很多资料显示Treg细胞在肿瘤微环境及患者外周血中富集存在。,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第20页,肿瘤免疫抑制因子能够使肿瘤细胞躲避局部免疫效应细胞攻击，还能进入外周血循环，抑制宿主全身抗肿瘤免疫功效。,Lyon 小组应用“微量样本多指标流式蛋白定量技术(,Cytometric Bead Array，CBA,)”对35例确诊乳癌患者及24例疑似患者样本进行了检测对比，得出在所测IL-1B、IL-2、IL4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、IL-12(p70)、IL-13、IL-17、G-CSF、GM-CSF、IFN-、MCP-1、MIP-1 B和TNF-细胞因子中，除了GMCSF，INF-外，其它因子都有显著增高。,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第21页,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第22页,Ishigami,等研究显示,胃癌组织中,DC,数量与胃癌淋巴结转移、临床分期和周围浸润呈负相关。,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第23页,1)未成熟DC 与肿瘤细胞直接接触影响了DC 成熟;,2)肿瘤细胞释放可溶性免疫抑制因子影响着全身DC 成熟和功效,包含VEGF、TNF-、TGF-、M-CSF、GM-CSF、I L-6 和IL-10 等。,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第24页,肿瘤局部DC 浸润数量可作为判断肿瘤预后独立指标。,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第25页,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第26页,以DC为基础肿瘤疫苗策略,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第27页,以DC为基础肿瘤疫苗策略,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第28页,以DC为基础肿瘤疫苗策略,肿瘤细胞,/,肿瘤细胞提取物冲击,DC,1,蛋白质冲击,DC,2,肿瘤抗原肽冲击,DC,3,肿瘤抗原,DNA/RNA,冲击,DC,4,肿瘤抗原在体内冲击,DC,5,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第29页,1.,肿瘤细胞/肿瘤细胞提取物冲击DC,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第30页,1.,肿瘤细胞/肿瘤细胞提取物冲击DC,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第31页,1.,肿瘤细胞,/,肿瘤细胞提取物冲击,DC,Yasuda,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第32页,1.肿瘤细胞/肿瘤细胞提取物冲击DC,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第33页,2.,蛋白质冲击DC,对于抗原表位尚不了解肿瘤，能够可溶性蛋白作为抗原装载DC,在肿瘤动物模型和肿瘤患者中，以肿瘤抗原蛋白转染DC在体外和体内均可诱导出针对肿瘤抗原特异性CTL反应,优点：可使那些因,MHC,限制而排除在肽疫苗治疗之外患者受益。,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第34页,3.,肿瘤抗原肽冲击DC,以肿瘤特异性抗原或肿瘤相关抗原肽装载DC肿瘤疫苗,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第35页,4.,肿瘤抗原DNA/RNA冲击DC,载体,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第36页,4.,肿瘤抗原DNA/RNA冲击DC,DNA/RNA疫苗可在体外合成而大量取得，并可包含多个抗原表位，还可经修饰使其功效加强。,RNA疫苗只在宿主细胞胞质中表示，DNA疫苗需进入细胞核后转录癌变潜在危险,DNA疫苗稳定性好，功效长久,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第37页,5.肿瘤抗原在体内冲击DC,肿瘤抗原,GM-CSF,IL-4,脂质体,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第38页,DC,装载抗原策略,免疫佐剂使用,DC,体外扩增,免疫路径,临床病人选择,DC肿瘤疫苗主要影响原因,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第39页,DC,起源,DC,分离纯化,DC,培养基,DC,培养使用细胞因子,DC,细胞判定,DC培养技术,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第40页,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第41页,DC,起源,骨髓,取材有限，,HSC,含量极少,大约为,1/10,5,单个核细胞。,BM,为侵入性操作,患者不轻易接收。其增殖及多向分化能力随供者年纪增加,体质衰弱而减弱。,在体外培养过程中有自发分化和衰老现象,且,BM,有病毒污染可能,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第42页,DC起源外周血,标本起源充分,取材方便,因子组合简单,培养步骤简单、经济,。,HSC,含量极少,最终收获,DC,数量少,活力和纯度均不高。,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第43页,其端粒及端粒酶活性均长于和高于,BM,及,PB HSC/HPC,而且低表示或不表示细胞凋亡配基,CD95/Fas,故体外生存期更长,DC起源脐带血,较丰富原始且能重建长久造血,HSC/HPC,自我增殖及多向分化能力较强,对刺激因子反应和增殖能力、体外集落形成能力、刺激后进入细胞周期速度以及自泌生长因子能力均强于,BM,及,PB,HSC/HPC,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第44页,脐带血,优点,缺点,产量大、纯度高等,母婴无不良影响,不包括社会、伦理及法律等方面争论,受胎盘屏障保护,被污染概率低,CB,量较少,通常只有,50,150 ml;,CB HSC,对理化改变较敏感,洗涤、分离或利用传统方法去除红细胞方法均会造成,HSC,严重丢失,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第45页,分离纯化,操作简单,细胞成份复杂,屡次传代后不能纯化,增殖活力相对较低,连续,贴壁法,操作简单,成本低廉,纯化率较低,密度梯度离心法,细胞纯度高,(90%),但操作复杂,价格昂贵,单克隆抗体选择不妥,轻易丢失目标细胞,免疫磁珠,分选法,联合,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第46页,DC培养基,10%,胎牛血清,引发机体免疫反应,自体单核细胞条件培养基,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第47页,细胞因子,维持,DC,分化、发育、存活、功效最基本,CK,主要使,HSC,向,DC,、单核及巨噬细胞分化,并以生成单核细胞为主,GM-CSF,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第48页,IL-4,IL-4,经过抑制单核细胞向巨噬细胞方向分化而诱导其向,DC,方向分化,IL-4,能够增加并稳固,GM-CSF,诱导,CD1a,表示,IL-4,与极低浓度,GM-CSF,协同刺激,iDC,后,促进,DC,成熟,上调,MHC,和共刺激分子表示,;,IL-4,还能促进,IL-12,分泌,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第49页,TNF-,GM-CSF,体外诱导,DC,体系中是必需,早期诱导细胞进入细胞周期,促进细胞增殖,;,后期阻止细胞向粒系分化,上调,GM-CSF,受体表示,并促进,DC,成熟,可抑制,DC,发生自发性凋亡,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第50页,DC判定,形态学判定,表面特异性标识物判定（CD1a、CD83）,功效学判定：,混合淋巴细胞反应,促T 细胞增殖作用,DC 分泌IL-12 检测,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第51页,DC判定,形态学判定,表面特异性标识物判定（CD1a、CD83）,功效学判定：,混合淋巴细胞反应,促T 细胞增殖作用,DC 分泌IL-12 检测,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第52页,DC体外培养技术,外周血提取,DC,密度梯度离心法,GM-CSF,、,IL-4,、,TNF-,联合诱导培养,连续贴壁法,DC,DC,判定,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第53页,DC,装载抗原策略,免疫佐剂使用,DC,体外扩增,免疫路径,临床病人选择,DC肿瘤疫苗影响原因,静脉、皮内、皮下,淋巴管,GM-CSF,、,IL-2,、,18,岁以上，身体情况良，现有治疗效果微弱、,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第54页,展望,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第55页,以DC为基础的肿瘤疫苗策略专家讲座,第56页,