大鼠MCAO模型的制作.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,大鼠MCAO模型制作,大鼠MCAO模型的制作,第1页,原理,MCAO即大脑中动脉闭塞，该模型阻断颈外动脉及其分支，且阻断翼腭动脉，以切断颅外起源侧副循环血流。从颈外动脉插入栓线，经颈内动脉到大脑前动脉，机械性阻断大脑中动脉发出处血供来建立大脑中动脉缺血模型。,假如需要再灌注，只需拔出栓线结扎伤口，即可恢复大脑血供,大鼠MCAO模型的制作,第2页,大鼠MCAO模型的制作,第3页,试验前准备工作（1）,手术器械+取脑器械：清洗洁净，简单消毒,其它：干棉球，酒精棉球，大鼠板，固定线，自制拉钩，培养皿,麻醉药：NS配制10%水合氯醛，使用方法为0.35ml/100gIP，手术过程中可用1/41/3倍液追麻,TTC染液：NS配制1%红四氮唑溶液，现配现用，24避光保留,大鼠MCAO模型的制作,第4页,试验前准备工作（2）,栓线选择：准备直径0.205mm、0.235mm、0.26mm三种粗细鱼线，试验中依据大鼠体重以及大鼠个体差异调整,栓线处理：取一段5cm长鱼线，在一端以及2cm、2.2cm处罚别用记号笔作一个标识，垂直在熔化石蜡中快速浸入并提起，马上凝固一薄层石蜡可牢靠地粘附在鱼线一端表面,大鼠MCAO模型的制作,第5页,试验方法（1）,动物麻醉后仰卧位固定在鼠板上，剪毛后用75%乙醇简单消毒，颈正中线开口,大鼠MCAO模型的制作,第6页,试验方法（2）,沿正中钝性分离两侧鼓泡腺体，暴露颈前肌群,沿胸锁乳突肌内缘分离肌肉和筋膜，暴露颈总动脉及分支,这两步均用弯头止血钳进行钝性分离,大鼠MCAO模型的制作,第7页,试验方法（3）,首先分离颈总动脉并穿单线备用,沿颈总动脉向远心端依次分离出颈外动脉、甲状腺上动脉、枕下动脉以及颈内动脉，在颈外动脉及枕下动脉穿双线备用,大鼠MCAO模型的制作,第8页,试验方法（4）,双线结扎颈外动脉和枕下动脉后剪断血管，在颈外动脉残端上用单线打一个松结,动脉夹夹闭颈总动脉近心端以及颈内动脉，颈外动脉残端上45度剪一小口，向颈内方向插入栓线，扎紧固定线，松开动脉夹,大鼠MCAO模型的制作,第9页,试验方法（5）,用眼科镊向为内上方轻推栓线，从血管分叉处开始算距离，当插入深度抵达鱼线标识处时，扎紧固定线,若鱼线堵在在1cm处，是误进翼颚动脉，若在1.6cm堵住，则是卡在了入颅处。此时都应回抽鱼线调整方向再进线，重复试几次还不行最好换根栓线，很可能前端已经变形,假如是再灌注模型，则在缺血一定时间后拔出鱼线，结扎死颈外动脉残端就能恢复颈总到颈内动脉血供,大鼠MCAO模型的制作,第10页,试验方法（6）,待大鼠清醒后，观察症状，模型成功可见大鼠向对侧绕圈或追尾、倾倒,神经功效缺失体征评分 参考Longa 5 分制法，缺血24h 后进行评分。,0 分:无神经损伤症状;,1 分:不能完全伸展对侧前爪;,2 分:向对侧转圈;,3 分:向对侧倾倒;,4 分:不能自发行走,意识丧失。,分值越高,说明动物行为障碍越严重,大鼠MCAO模型的制作,第11页,试验方法（7）-取脑,脱颈椎处死大鼠，剪开皮肤暴露头及颈段，从颈椎处剪断颈髓，,去除肌肉和颅骨上膜，剪刀伸进去0.8cm1cm，沿正中以及两侧45 度分别剪一刀，用大号弯头止血钳去除颅骨,眼科镊拉断硬脑膜，取出脑组织,大鼠MCAO模型的制作,第12页,试验方法（8）-染色,脑组织用NS冲洗净表面毛和血迹，-20 速冻10min后切片56片：第一刀在脑前极与视交叉连线中点处；第二刀在视交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄与后叶尾极之间。,大鼠MCAO模型的制作,第13页,切片置1%TTC染液中，60烘箱中染色10min,用image pro-plus 6.0 软件计算梗塞面积,大鼠MCAO模型的制作,第14页,讨论,优点,不开颅、效果必定、可准确控制缺血及再灌注时间,对全身影响小、动物存活时间长，适于慢性脑损伤研究,缺点,非直视下手术,动物品系、体重、批次会影响结果。,操作者手术熟练度要求较高,大鼠MCAO模型的制作,第15页,注意保温,动作轻柔熟练,麻醉药用量宁少勿多,控制进线深度,线拴法有一定死亡率，淘汰率也比较高，做好预试,模型不成功大鼠要统计和总结,大鼠MCAO模型的制作,第16页,谢谢！,大鼠MCAO模型的制作,第17页,